- ICH GCP
- Реестр клинических исследований США
- Клиническое испытание NCT03416400
Сравнение эффекта витрификации до и после созревания in vitro
Характеристика метода сохранения фертильности у больных с онкологическим диагнозом
Криоконсервация ооцитов человека обычно используется для сохранения фертильности женщин, которые будут подвергаться гонадотоксичному эффекту лечения рака. После стимуляции яичников созревшие ооциты витрифицируют. Однако эту стратегию не всегда можно использовать, особенно при гормоночувствительном раке или когда стимуляция яичников невозможна. В этих случаях можно рассмотреть подход, включающий незрелые ооциты и созревание in vitro (IVM). В то время как некоторый качественный анализ ооцитов, витрифицированных до или после IVM, предполагает, что витрификацию следует проводить после IVM, мало что известно о влиянии витрификации на актиновый и тубулиновый цитоскелет и кинетику созревания ооцитов человека.
Чтобы ответить на этот вопрос, исследователь провел количественный анализ, сравнивая созревшие ооциты из трех разных групп: витрифицированные до или после IVM и не витрифицированные ооциты. В качестве контроля использовали не витрифицированные созревшие ооциты. Были проанализированы различные параметры во время созревания и в созревших ооцитах.
Обзор исследования
Статус
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Тип исследования
Регистрация (Ожидаемый)
Контакты и местонахождение
Места учебы
-
-
-
Clermont-Ferrand, Франция, 63003
- Рекрутинг
- CHU Clermont-Ferrand
-
Младший исследователь:
- Aïcha METCHAT
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Полы, имеющие право на обучение
Метод выборки
Исследуемая популяция
Описание
Критерии включения:
- - лечение ИКСИ
- Незрелые ооциты
- < 37 лет
Критерий исключения:
- - Синдром поликистоза яичников
- Эндометриоз
- Овуляторная болезнь
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
Когорты и вмешательства
Группа / когорта |
Вмешательство/лечение |
---|---|
Витрификация незрелых ооцитов перед созреванием in vitro
Незрелые ооциты витрифицируют с использованием закрытой системы витрификации.
После прогревания их культивировали в течение 36 часов в среде IVM и фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
Культивирование незрелых ооцитов in vitro перед витрификацией
Незрелые ооциты культивировали in vitro в среде IVM в течение 36 часов.
После IVM они были витрифицированы.
После нагревания их фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
Свежие ооциты
Незрелые ооциты культивировали in vitro в среде IVM в течение 36 часов и затем фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
---|---|---|
Анализ кинетики созревания ооцитов, витрифицированных на стадии профазы-I, по сравнению со свежими ооцитами
Временное ограничение: в день 1
|
После извлечения ооцитов незрелые ооциты витрифицируют (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) в закрытой системе (Rapid-I®, Vitrolife) и через несколько дней оттаивают для созревания in vitro.
Процесс мейоза будет проанализирован с помощью покадровой технологии (Primovision®, Vitrolife).
Это позволит оценить время созревания от возобновления до экструзии полярного тела овоцитов.
|
в день 1
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
---|---|---|
Анализ актинового и тубулинового цитоскелета на стадии метафазы-II
Временное ограничение: в день 1
|
Ооциты стадии метафазы-II из обоих протоколов будут использоваться в экспериментах по иммунофлуоресценции для окрашивания актина, тубулина и хромосом.
Ооциты будут визуализированы с использованием конфокального микроскопа для выполнения визуализации с высоким разрешением и количественного анализа изображений.
Длина, положение и ориентация второго мейотического веретена будут количественной оценкой.
Актиновая сеть и хромосомы будут проанализированы количественно.
Все измерения будут сравниваться со свежими ооцитами метафазы-II, используемыми в качестве контрольной группы.
|
в день 1
|
Анализ расхождения хромосом во время первого мейотического деления.
Временное ограничение: в день 1
|
Первое асимметричное деление очень подвержено ошибкам.
Чтобы выяснить, правильно ли расщеплены хромосомы после витрификации, мы проведем флуоресцентную гибридизацию in situ, чтобы окрасить каждую хромосому после распространения хромосом из ооцитов на стадии метафазы II в обоих условиях.
|
в день 1
|
Анализ распределения кортикальных гранул в ооцитах стадии метафазы-II.
Временное ограничение: в день 1
|
Окрашивание лектином будет использоваться для маркировки кортикальных гранул созревших ооцитов из обоих протоколов, чтобы наблюдать, действительно ли витрификация изменяет их пространственное распределение.
Чтобы проанализировать это окрашивание, мы будем использовать метод количественного анализа изображений.
|
в день 1
|
Анализ стабильности материнского фактора.
Временное ограничение: в день 1
|
Материнские факторы, хранящиеся в цитоплазме ооцита во время оогенеза в виде белков и транскриптов, необходимы для раннего эмбрионального развития.
Чтобы узнать, уменьшается ли запас материнских факторов в результате процедуры витрификации, мы проведем обратную транскрипцию в сочетании с ПЦР в реальном времени для количественного определения количества транскриптов генов-кандидатов, выбранных из баз данных ооцитов человека.
|
в день 1
|
Соавторы и исследователи
Соавторы
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
Первичное завершение (Действительный)
Завершение исследования (Ожидаемый)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Действительный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Другие идентификационные номера исследования
- CHU-372
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .