Сравнение эффекта витрификации до и после созревания in vitro
31 января 2018 г. обновлено: University Hospital, Clermont-Ferrand
Характеристика метода сохранения фертильности у больных с онкологическим диагнозом
Криоконсервация ооцитов человека обычно используется для сохранения фертильности женщин, которые будут подвергаться гонадотоксичному эффекту лечения рака. После стимуляции яичников созревшие ооциты витрифицируют. Однако эту стратегию не всегда можно использовать, особенно при гормоночувствительном раке или когда стимуляция яичников невозможна. В этих случаях можно рассмотреть подход, включающий незрелые ооциты и созревание in vitro (IVM). В то время как некоторый качественный анализ ооцитов, витрифицированных до или после IVM, предполагает, что витрификацию следует проводить после IVM, мало что известно о влиянии витрификации на актиновый и тубулиновый цитоскелет и кинетику созревания ооцитов человека.
Чтобы ответить на этот вопрос, исследователь провел количественный анализ, сравнивая созревшие ооциты из трех разных групп: витрифицированные до или после IVM и не витрифицированные ооциты. В качестве контроля использовали не витрифицированные созревшие ооциты. Были проанализированы различные параметры во время созревания и в созревших ооцитах.
Обзор исследования
Статус
Неизвестный
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе ("Vitrolife").
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision ("Vitrolife") и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
Тип исследования
Наблюдательный
Регистрация (Ожидаемый)
100
Контакты и местонахождение
В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.
Места учебы
-
-
-
Clermont-Ferrand, Франция, 63003
- Рекрутинг
- Chu Clermont-Ferrand
-
Младший исследователь:
- Aïcha METCHAT
-
-
Критерии участия
Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
От 18 лет до 37 лет (Взрослый)
Принимает здоровых добровольцев
Да
Полы, имеющие право на обучение
Женский
Метод выборки
Невероятностная выборка
Исследуемая популяция
женский
Описание
Критерии включения:
- - лечение ИКСИ
- Незрелые ооциты
- < 37 лет
Критерий исключения:
- - Синдром поликистоза яичников
- Эндометриоз
- Овуляторная болезнь
Учебный план
В этом разделе представлена подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.
Как устроено исследование?
Детали дизайна
Когорты и вмешательства
Группа / когорта |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Витрификация незрелых ооцитов перед созреванием in vitro
Незрелые ооциты витрифицируют с использованием закрытой системы витрификации.
После прогревания их культивировали в течение 36 часов в среде IVM и фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
|
Культивирование незрелых ооцитов in vitro перед витрификацией
Незрелые ооциты культивировали in vitro в среде IVM в течение 36 часов.
После IVM они были витрифицированы.
После нагревания их фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
|
Свежие ооциты
Незрелые ооциты культивировали in vitro в среде IVM в течение 36 часов и затем фиксировали для клеточного анализа.
|
Незрелые ооциты были собраны у пациенток (возраст ≤37 лет, без эндометриоза, поликистоза или других овуляторных заболеваний), которым была проведена ИКСИ.
Кроме того, в это исследование будут включены незрелые ооциты, полученные от пациенток с диагнозом рак.
Ооциты созревали in vitro в среде IVM и витрифицируются в закрытой системе (Vitrolife).
Кинетику созревания анализировали с помощью Primovision (Vitrolife) и актина, а организацию веретена изучали с помощью микроскопии, методов иммунного окрашивания и количественного анализа.
|
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Анализ кинетики созревания ооцитов, витрифицированных на стадии профазы-I, по сравнению со свежими ооцитами
Временное ограничение: в день 1
|
После извлечения ооцитов незрелые ооциты витрифицируют (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) в закрытой системе (Rapid-I®, Vitrolife) и через несколько дней оттаивают для созревания in vitro.
Процесс мейоза будет проанализирован с помощью покадровой технологии (Primovision®, Vitrolife).
Это позволит оценить время созревания от возобновления до экструзии полярного тела овоцитов.
|
в день 1
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Анализ актинового и тубулинового цитоскелета на стадии метафазы-II
Временное ограничение: в день 1
|
Ооциты стадии метафазы-II из обоих протоколов будут использоваться в экспериментах по иммунофлуоресценции для окрашивания актина, тубулина и хромосом.
Ооциты будут визуализированы с использованием конфокального микроскопа для выполнения визуализации с высоким разрешением и количественного анализа изображений.
Длина, положение и ориентация второго мейотического веретена будут количественной оценкой.
Актиновая сеть и хромосомы будут проанализированы количественно.
Все измерения будут сравниваться со свежими ооцитами метафазы-II, используемыми в качестве контрольной группы.
|
в день 1
|
|
Анализ расхождения хромосом во время первого мейотического деления.
Временное ограничение: в день 1
|
Первое асимметричное деление очень подвержено ошибкам.
Чтобы выяснить, правильно ли расщеплены хромосомы после витрификации, мы проведем флуоресцентную гибридизацию in situ, чтобы окрасить каждую хромосому после распространения хромосом из ооцитов на стадии метафазы II в обоих условиях.
|
в день 1
|
|
Анализ распределения кортикальных гранул в ооцитах стадии метафазы-II.
Временное ограничение: в день 1
|
Окрашивание лектином будет использоваться для маркировки кортикальных гранул созревших ооцитов из обоих протоколов, чтобы наблюдать, действительно ли витрификация изменяет их пространственное распределение.
Чтобы проанализировать это окрашивание, мы будем использовать метод количественного анализа изображений.
|
в день 1
|
|
Анализ стабильности материнского фактора.
Временное ограничение: в день 1
|
Материнские факторы, хранящиеся в цитоплазме ооцита во время оогенеза в виде белков и транскриптов, необходимы для раннего эмбрионального развития.
Чтобы узнать, уменьшается ли запас материнских факторов в результате процедуры витрификации, мы проведем обратную транскрипцию в сочетании с ПЦР в реальном времени для количественного определения количества транскриптов генов-кандидатов, выбранных из баз данных ооцитов человека.
|
в день 1
|
Соавторы и исследователи
Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.
Соавторы
Даты записи исследования
Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
1 января 2017 г.
Первичное завершение (Действительный)
1 января 2018 г.
Завершение исследования (Ожидаемый)
31 декабря 2019 г.
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
24 января 2018 г.
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
24 января 2018 г.
Первый опубликованный (Действительный)
31 января 2018 г.
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
1 февраля 2018 г.
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
31 января 2018 г.
Последняя проверка
1 января 2018 г.
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Другие идентификационные номера исследования
- CHU-372
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Нет
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Нет
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .