Sammenligning av forglasningseffekt før eller etter in vitro-modning
31. januar 2018 oppdatert av: University Hospital, Clermont-Ferrand
Karakterisering av en metode for bevaring av fruktbarhet for pasienter diagnostisert for kreft
Kryokonservering av menneskelige oocytter brukes rutinemessig for fruktbarhetsbevaring av kvinner som vil bli utsatt for gonadotoksisk effekt av kreftbehandling. Etter eggstokkstimulering blir modne oocytter forglasset. Denne strategien kan imidlertid ikke alltid brukes, spesielt for hormonsensitiv kreft eller når eggstokkstimulering ikke er mulig. En tilnærming som inkluderer umodne oocytter og in vitro-modning (IVM) kan vurderes i disse tilfellene. Mens noen kvalitative analyser av oocytter forglasset før eller etter IVM antyder at forglasning bør utføres etter IVM, er lite kjent om forglasningseffekter på aktin- og tubulincytoskjelett og modningskinetikk av humane eggocytter.
For å svare på dette spørsmålet utførte Investigator kvantitive analyser som sammenlignet modne oocytter fra tre forskjellige grupper: forglasset før IVM eller etter IVM og ikke-vitrifiserte oocytter. Ikke-vitrifiserte modne oocytter ble brukt som kontroll. Ulike parametere har blitt analysert under modning og i modne oocytter.
Studieoversikt
Status
Ukjent
Intervensjon / Behandling
Detaljert beskrivelse
Umodne oocytter ble samlet inn fra pasienter (≤37 år gamle, uten endometriose, polycystisk syndrom eller annen eggløsningssykdom) som gjennomgikk ICSI.
I tillegg vil umodne oocytter samlet fra pasienter diagnostisert med kreft bli inkludert i denne studien.
Oocytter ble modnet in vitro med IVM-medium og forglasset i lukket system ("Vitrolife").
Kinetikk av modning ble analysert av Primovision ("Vitrolife") og aktin, og spindelorganisering ble studert ved mikroskopi, immunfargingsteknikker og kvantitativ analyse.
Studietype
Observasjonsmessig
Registrering (Forventet)
100
Kontakter og plasseringer
Denne delen inneholder kontaktinformasjon for de som utfører studien, og informasjon om hvor denne studien blir utført.
Studiesteder
-
-
-
Clermont-Ferrand, Frankrike, 63003
- Rekruttering
- Chu Clermont-Ferrand
-
Underetterforsker:
- Aïcha METCHAT
-
-
Deltakelseskriterier
Forskere ser etter personer som passer til en bestemt beskrivelse, kalt kvalifikasjonskriterier. Noen eksempler på disse kriteriene er en persons generelle helsetilstand eller tidligere behandlinger.
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
18 år til 37 år (Voksen)
Tar imot friske frivillige
Ja
Kjønn som er kvalifisert for studier
Hunn
Prøvetakingsmetode
Ikke-sannsynlighetsprøve
Studiepopulasjon
hunn
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
- - ICSI behandling
- Umodne oocytter
- < 37 år gammel
Ekskluderingskriterier:
- - Polyckistisk ovariesyndrom
- Endometriose
- Eggløsningssykdom
Studieplan
Denne delen gir detaljer om studieplanen, inkludert hvordan studien er utformet og hva studien måler.
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
Kohorter og intervensjoner
Gruppe / Kohort |
Intervensjon / Behandling |
|---|---|
|
Umodne oocytter forglasset før in vitro modning
Umodne oocytter ble forglasset ved å bruke lukket system forglasning.
Etter oppvarming ble de dyrket i løpet av 36 timer i IVM-medium og fiksert for cellulær analyse
|
Umodne oocytter ble samlet inn fra pasienter (≤37 år gamle, uten endometriose, polycystisk syndrom eller annen eggløsningssykdom) som gjennomgikk ICSI.
I tillegg vil umodne oocytter samlet fra pasienter diagnostisert med kreft bli inkludert i denne studien.
Oocytter ble modnet in vitro med IVM-medium og forglasset i lukket system (Vitrolife).
Kinetikk av modning ble analysert av Primovision (Vitrolife) og aktin, og spindelorganisering ble studert ved mikroskopi, immunfargingsteknikker og kvantitativ analyse.
|
|
Umodne oocytter dyrket in vitro før forglasning
Umodne oocytter ble dyrket in vitro i IVM-medium i løpet av 36 timer.
Etter IVM ble de forglasset.
Etter oppvarming ble de fikset for cellulær analyse.
|
Umodne oocytter ble samlet inn fra pasienter (≤37 år gamle, uten endometriose, polycystisk syndrom eller annen eggløsningssykdom) som gjennomgikk ICSI.
I tillegg vil umodne oocytter samlet fra pasienter diagnostisert med kreft bli inkludert i denne studien.
Oocytter ble modnet in vitro med IVM-medium og forglasset i lukket system (Vitrolife).
Kinetikk av modning ble analysert av Primovision (Vitrolife) og aktin, og spindelorganisering ble studert ved mikroskopi, immunfargingsteknikker og kvantitativ analyse.
|
|
Friske oocytter
Umodne oocytter ble dyrket in vitro i IVM-medium i løpet av 36 timer og deretter fiksert for cellulær analyse.
|
Umodne oocytter ble samlet inn fra pasienter (≤37 år gamle, uten endometriose, polycystisk syndrom eller annen eggløsningssykdom) som gjennomgikk ICSI.
I tillegg vil umodne oocytter samlet fra pasienter diagnostisert med kreft bli inkludert i denne studien.
Oocytter ble modnet in vitro med IVM-medium og forglasset i lukket system (Vitrolife).
Kinetikk av modning ble analysert av Primovision (Vitrolife) og aktin, og spindelorganisering ble studert ved mikroskopi, immunfargingsteknikker og kvantitativ analyse.
|
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Analyse av modningskinetikk av oocytter som er forglasset på profase-I-stadiet sammenlignet med ferske oocytter
Tidsramme: på dag 1
|
Etter uthenting av oocytter vil umodne oocytter bli forglasset (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) i et lukket system (Rapid-I®, Vitrolife) og tint for in vitro-modning noen dager etter.
Den meiotiske prosessen vil bli analysert med time lapse-teknologi (Primovision®, Vitrolife).
Dette vil tillate å score tidspunktet for modning fra gjenopptakelse til polar kroppsekstrudering av eggceller.
|
på dag 1
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Analyse av aktin og tubulin cytoskjelett på Metafase-II stadium
Tidsramme: på dag 1
|
Metafase-II stadium oocytter fra begge protokollene vil bli brukt til immunfluorescenseksperimenter for å farge aktin, tubulin og kromosomer.
Oocytter vil bli avbildet ved hjelp av konfokalt mikroskop for å utføre høyoppløselig bildebehandling og kvantitativ bildeanalyse.
Lengden, posisjonen og orienteringen til den andre meiotiske spindelen vil kvantifisere.
Aktinnettverket og kromosomene vil bli analysert kvantitativt.
Alle målinger vil bli sammenlignet med ferske Metafase-II oocytter brukt som kontrollgruppe.
|
på dag 1
|
|
Analyse av kromosomsegregering under den første meiotiske deling.
Tidsramme: på dag 1
|
Den første asymmetriske divisjonen er svært utsatt for feil.
For å undersøke om kromosomer er segregert nøyaktig etter forglasning, vil vi utføre fluorescens in situ hybridisering for å male hvert kromosom etter kromosomspredning fra oocytter i Metafase-II stadium fra begge tilstander
|
på dag 1
|
|
Analyse av kortikale granulatfordeling i oocytter i Metafase-II stadium.
Tidsramme: på dag 1
|
En farging med Lektin vil bli brukt til å merke kortikale granuler av modne oocytter fra begge protokollene for å observere om forglasningen endrer deres romlige fordeling.
For å analysere denne fargingen vil vi bruke kvantitativ bildeanalysemetode.
|
på dag 1
|
|
Analyse av mors faktorstabilitet.
Tidsramme: på dag 1
|
Morsfaktorer lagret i oocyttcytoplasmaet under oogenese som proteiner og transkripsjoner er avgjørende for den tidlige embryonale utviklingen.
For å vite om bestanden av morsfaktorer reduseres ved forglasningsprosedyren, vil vi utføre omvendt transkripsjon kombinert med sanntids-PCR for å kvantifisere transkripsjonsmengder av kandidatgener valgt fra humane oocyttdatabaser.
|
på dag 1
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Det er her du vil finne personer og organisasjoner som er involvert i denne studien.
Samarbeidspartnere
Studierekorddatoer
Disse datoene sporer fremdriften for innsending av studieposter og sammendragsresultater til ClinicalTrials.gov. Studieposter og rapporterte resultater gjennomgås av National Library of Medicine (NLM) for å sikre at de oppfyller spesifikke kvalitetskontrollstandarder før de legges ut på det offentlige nettstedet.
Studer hoveddatoer
Studiestart (Faktiske)
1. januar 2017
Primær fullføring (Faktiske)
1. januar 2018
Studiet fullført (Forventet)
31. desember 2019
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
24. januar 2018
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
24. januar 2018
Først lagt ut (Faktiske)
31. januar 2018
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)
1. februar 2018
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
31. januar 2018
Sist bekreftet
1. januar 2018
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Andre studie-ID-numre
- CHU-372
Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter
Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt
Nei
Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt
Nei
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .