体外熟成前後のガラス化効果の比較
2018年1月31日 更新者：University Hospital, Clermont-Ferrand
癌と診断された患者の妊孕性温存方法の特徴付け
ヒト卵子の凍結保存は、がん治療による性腺毒性の影響を受ける女性の妊孕性を温存するために日常的に使用されています。 卵巣刺激後、成熟した卵母細胞はガラス化されます。 ただし、この戦略は、特にホルモン感受性のがんの場合や卵巣刺激が不可能な場合には常に使用できるわけではありません。 このような場合には、未熟卵母細胞と体外成熟（IVM）を含むアプローチが考慮される可能性があります。 IVMの前後でガラス化された卵母細胞の定性分析では、IVM後にガラス化を行うべきであることが示唆されていますが、アクチンおよびチューブリンの細胞骨格に対するガラス化の影響や、ヒト卵母細胞の成熟の動態についてはほとんど知られていません。
この疑問に答えるために、研究者は、IVM 前または IVM 後のガラス化卵母細胞と非ガラス化卵母細胞の 3 つの異なるグループからの成熟卵母細胞を比較する定量分析を実行しました。 非ガラス化成熟卵母細胞を対照として使用した。 成熟中および成熟卵母細胞では、さまざまなパラメーターが分析されています。
調査の概要
詳細な説明
未熟卵母細胞は、ICSIを受けた患者（37歳以下、子宮内膜症、多嚢胞性症候群、その他の排卵疾患がない）から採取されました。
さらに、がんと診断された患者から採取された未熟卵母細胞もこの研究に含まれます。
卵母細胞をIVM培地を用いてインビトロで成熟させ、閉鎖系(「Vitrolife」)でガラス化した。
成熟の動態はPrimovision (「Vitrolife」)およびアクチンによって分析され、紡錘体組織は顕微鏡法、免疫染色技術および定量分析によって研究されました。
研究の種類
観察的
入学 (予想される)
100
連絡先と場所
このセクションには、調査を実施する担当者の連絡先の詳細と、この調査が実施されている場所に関する情報が記載されています。
研究場所
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Clermont-Ferrand、フランス、63003
- 募集
- Chu Clermont-Ferrand
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副調査官：
- Aïcha METCHAT
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参加基準
研究者は、適格基準と呼ばれる特定の説明に適合する人を探します。これらの基準のいくつかの例は、人の一般的な健康状態または以前の治療です。
適格基準
就学可能な年齢
18年～37年 (大人)
健康ボランティアの受け入れ
はい
受講資格のある性別
女性
サンプリング方法
非確率サンプル
調査対象母集団
女性
説明
包含基準:
- - ICSI治療
- 未熟卵母細胞
- 37歳未満
除外基準:
- - 多性卵巣症候群
- 子宮内膜症
- 排卵障害
研究計画
このセクションでは、研究がどのように設計され、研究が何を測定しているかなど、研究計画の詳細を提供します。
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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体外成熟前にガラス化された未熟卵母細胞
未熟卵母細胞は閉鎖系ガラス化法を使用してガラス化されました。
加温後、IVM培地で36時間培養し、細胞分析のために固定しました。
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未熟卵母細胞は、ICSIを受けた患者（37歳以下、子宮内膜症、多嚢胞性症候群、その他の排卵疾患がない）から採取されました。
さらに、がんと診断された患者から採取された未熟卵母細胞もこの研究に含まれます。
卵母細胞をIVM培地を用いてインビトロで成熟させ、閉鎖系(Vitrolife)でガラス化した。
成熟の動態はPrimovision (Vitrolife)およびアクチンによって分析され、紡錘体組織は顕微鏡法、免疫染色技術および定量分析によって研究されました。
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ガラス化前に体外で培養された未熟卵母細胞
未成熟卵母細胞を、IVM培地中でインビトロで36時間培養した。
IVM後、それらはガラス化された。
加温後、細胞分析のために固定しました。
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未熟卵母細胞は、ICSIを受けた患者（37歳以下、子宮内膜症、多嚢胞性症候群、その他の排卵疾患がない）から採取されました。
さらに、がんと診断された患者から採取された未熟卵母細胞もこの研究に含まれます。
卵母細胞をIVM培地を用いてインビトロで成熟させ、閉鎖系(Vitrolife)でガラス化した。
成熟の動態はPrimovision (Vitrolife)およびアクチンによって分析され、紡錘体組織は顕微鏡法、免疫染色技術および定量分析によって研究されました。
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新鮮な卵子
未成熟卵母細胞は、IVM培地中でin vitroで36時間培養され、その後、細胞分析のために固定されました。
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未熟卵母細胞は、ICSIを受けた患者（37歳以下、子宮内膜症、多嚢胞性症候群、その他の排卵疾患がない）から採取されました。
さらに、がんと診断された患者から採取された未熟卵母細胞もこの研究に含まれます。
卵母細胞をIVM培地を用いてインビトロで成熟させ、閉鎖系(Vitrolife)でガラス化した。
成熟の動態はPrimovision (Vitrolife)およびアクチンによって分析され、紡錘体組織は顕微鏡法、免疫染色技術および定量分析によって研究されました。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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新鮮な卵母細胞と比較した、前期 I 段階でガラス化された卵母細胞の成熟動態の分析
時間枠：1日目
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採卵後、未成熟卵母細胞は閉鎖系 (Rapid-I®、Vitrolife) 内でガラス化され (Rapid Vit Ovocyte®、Vitrolife)、数日後に in vitro 成熟のために解凍されます。
減数分裂のプロセスは、タイムラプス技術 (Primovision®、Vitrolife) によって分析されます。
これにより、卵母細胞の再開から極体の排出までの成熟時間を記録することができます。
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1日目
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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中期II期のアクチンおよびチューブリン細胞骨格の解析
時間枠：1日目
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両方のプロトコルからの中期 II 段階の卵母細胞は、アクチン、チューブリン、および染色体を染色するための免疫蛍光実験に使用されます。
共焦点顕微鏡を使用して卵母細胞を画像化し、高解像度画像化および定量的画像分析を実行します。
第 2 減数分裂紡錘体の長さ、位置、方向が定量化されます。
アクチンネットワークと染色体を定量的に解析します。
すべての測定値は、対照群として使用される新鮮な中期 II 卵母細胞と比較されます。
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1日目
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最初の減数分裂中の染色体分離の分析。
時間枠：1日目
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最初の非対称除算は非常にエラーが発生しやすくなります。
ガラス化後に染色体が正確に分離されているかどうかを調べるために、両方の条件の中期 II 期の卵母細胞から染色体を拡散させた後、蛍光 In Situ ハイブリダイゼーションを実行して各染色体をペイントします。
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1日目
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中期II期の卵母細胞における皮質顆粒の分布の分析。
時間枠：1日目
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レクチンによる染色を使用して、両方のプロトコルからの成熟卵母細胞の皮質顆粒をマークし、ガラス化によってその空間分布が変化するかどうかを観察します。
この染色を解析するために、定量的画像解析手法を使用します。
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1日目
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母体因子の安定性の分析。
時間枠：1日目
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卵形成中にタンパク質および転写物として卵母細胞の細胞質に保存される母性因子は、初期胚の発生に不可欠です。
ガラス化処置により母体因子のストックが減少するかどうかを知るために、リアルタイムPCRと組み合わせた逆転写を実行し、ヒト卵母細胞データベースから選択された候補遺伝子の転写量を定量します。
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1日目
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協力者と研究者
ここでは、この調査に関係する人々や組織を見つけることができます。
研究記録日
これらの日付は、ClinicalTrials.gov への研究記録と要約結果の提出の進捗状況を追跡します。研究記録と報告された結果は、国立医学図書館 (NLM) によって審査され、公開 Web サイトに掲載される前に、特定の品質管理基準を満たしていることが確認されます。
主要日程の研究
研究開始 (実際)
2017年1月1日
一次修了 (実際)
2018年1月1日
研究の完了 (予想される)
2019年12月31日
試験登録日
最初に提出
2018年1月24日
QC基準を満たした最初の提出物
2018年1月24日
最初の投稿 (実際)
2018年1月31日
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
2018年2月1日
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
2018年1月31日
最終確認日
2018年1月1日
詳しくは
本研究に関する用語
キーワード
その他の研究ID番号
- CHU-372
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
いいえ
米国FDA規制機器製品の研究
いいえ
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