Comparaison de l'effet de vitrification avant ou après maturation in vitro
31 janvier 2018 mis à jour par: University Hospital, Clermont-Ferrand
Caractérisation d'une méthode de préservation de la fertilité pour des patients diagnostiqués pour un cancer
La cryoconservation des ovocytes humains est couramment utilisée pour la préservation de la fertilité des femmes qui seront exposées à l'effet gonadotoxique du traitement du cancer. Après stimulation ovarienne, les ovocytes matures sont vitrifiés. Cependant, cette stratégie ne peut pas toujours être utilisée, en particulier pour les cancers hormono-sensibles ou lorsque la stimulation ovarienne n'est pas possible. Une approche incluant les ovocytes immatures et la maturation in vitro (IVM) pourrait être envisagée dans ces cas. Alors que certaines analyses qualitatives d'ovocytes vitrifiés avant ou après IVM suggèrent que la vitrification devrait être effectuée après IVM, on sait peu de choses sur les effets de la vitrification sur le cytosquelette d'actine et de tubuline et sur la cinétique de maturation des ovocytes humains.
Pour répondre à cette question, Investigator a réalisé des analyses quantitatives comparant des ovocytes matures de trois groupes différents : vitrifiés avant IVM ou après IVM et ovocytes non vitrifiés. Des ovocytes mûris non vitrifiés ont été utilisés comme contrôle. Différents paramètres ont été analysés au cours de la maturation et dans les ovocytes matures.
Aperçu de l'étude
Statut
Inconnue
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Des ovocytes immatures ont été prélevés chez des patientes (≤37 ans, sans endométriose, syndrome polykystique ou autre maladie ovulatoire) ayant subi une ICSI.
De plus, les ovocytes immatures prélevés chez des patients diagnostiqués avec un cancer seront inclus dans cette étude.
Les ovocytes ont été maturés in vitro avec du milieu IVM et vitrifiés en système fermé (« Vitrolife »).
La cinétique de maturation a été analysée par Primovision ("Vitrolife") et l'actine et l'organisation du fuseau ont été étudiées par microscopie, techniques d'immunocoloration et analyse quantitative.
Type d'étude
Observationnel
Inscription (Anticipé)
100
Contacts et emplacements
Cette section fournit les coordonnées de ceux qui mènent l'étude et des informations sur le lieu où cette étude est menée.
Lieux d'étude
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Clermont-Ferrand, France, 63003
- Recrutement
- Chu Clermont-Ferrand
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Sous-enquêteur:
- Aïcha METCHAT
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Critères de participation
Les chercheurs recherchent des personnes qui correspondent à une certaine description, appelée critères d'éligibilité. Certains exemples de ces critères sont l'état de santé général d'une personne ou des traitements antérieurs.
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
18 ans à 37 ans (Adulte)
Accepte les volontaires sains
Oui
Sexes éligibles pour l'étude
Femelle
Méthode d'échantillonnage
Échantillon non probabiliste
Population étudiée
femme
La description
Critère d'intégration:
- - Traitement ICSI
- Ovocytes immatures
- < 37 ans
Critère d'exclusion:
- - Syndrome des ovaires polyckistiques
- Endométriose
- Maladie ovulatoire
Plan d'étude
Cette section fournit des détails sur le plan d'étude, y compris la façon dont l'étude est conçue et ce que l'étude mesure.
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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Ovocytes immatures vitrifiés avant maturation in vitro
Les ovocytes immatures ont été vitrifiés par vitrification en système fermé.
Après réchauffement, elles ont été cultivées pendant 36 heures en milieu IVM et fixées pour analyse cellulaire
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Des ovocytes immatures ont été prélevés chez des patientes (≤37 ans, sans endométriose, syndrome polykystique ou autre maladie ovulatoire) ayant subi une ICSI.
De plus, les ovocytes immatures prélevés chez des patients diagnostiqués avec un cancer seront inclus dans cette étude.
Les ovocytes ont été maturés in vitro avec du milieu IVM et vitrifiés en système fermé (Vitrolife).
La cinétique de maturation a été analysée par Primovision (Vitrolife) et l'actine, et l'organisation des fuseaux ont été étudiées par microscopie, techniques d'immunocoloration et analyse quantitative.
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Ovocytes immatures cultivés in vitro avant vitrification
Les ovocytes immatures ont été cultivés in vitro en milieu IVM pendant 36 heures.
Après IVM, ils ont été vitrifiés.
Après réchauffement, ils ont été fixés pour analyse cellulaire.
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Des ovocytes immatures ont été prélevés chez des patientes (≤37 ans, sans endométriose, syndrome polykystique ou autre maladie ovulatoire) ayant subi une ICSI.
De plus, les ovocytes immatures prélevés chez des patients diagnostiqués avec un cancer seront inclus dans cette étude.
Les ovocytes ont été maturés in vitro avec du milieu IVM et vitrifiés en système fermé (Vitrolife).
La cinétique de maturation a été analysée par Primovision (Vitrolife) et l'actine, et l'organisation des fuseaux ont été étudiées par microscopie, techniques d'immunocoloration et analyse quantitative.
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Ovocytes frais
Les ovocytes immatures ont été cultivés in vitro dans du milieu IVM pendant 36 heures puis fixés pour analyse cellulaire.
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Des ovocytes immatures ont été prélevés chez des patientes (≤37 ans, sans endométriose, syndrome polykystique ou autre maladie ovulatoire) ayant subi une ICSI.
De plus, les ovocytes immatures prélevés chez des patients diagnostiqués avec un cancer seront inclus dans cette étude.
Les ovocytes ont été maturés in vitro avec du milieu IVM et vitrifiés en système fermé (Vitrolife).
La cinétique de maturation a été analysée par Primovision (Vitrolife) et l'actine, et l'organisation des fuseaux ont été étudiées par microscopie, techniques d'immunocoloration et analyse quantitative.
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Analyse de la cinétique de maturation des ovocytes vitrifiés au stade Prophase-I par rapport aux ovocytes frais
Délai: au jour 1
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Après prélèvement des ovocytes, les ovocytes immatures seront vitrifiés (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) en système clos (Rapid-I®, Vitrolife) et décongelés pour maturation in vitro quelques jours après.
Le processus méiotique sera analysé par la technologie time lapse (Primovision®, Vitrolife).
Cela permettra de marquer le temps de maturation depuis la reprise jusqu'à l'extrusion des globules polaires des ovocytes.
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au jour 1
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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Analyse du cytosquelette d'actine et de tubuline au stade métaphase-II
Délai: au jour 1
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Les ovocytes de stade métaphase II des deux protocoles seront utilisés pour des expériences d'immuno-fluorescence pour colorer l'actine, la tubuline et les chromosomes.
Les ovocytes seront imagés à l'aide d'un microscope confocal pour effectuer une imagerie haute résolution et une analyse d'image quantitative.
La longueur, la position et l'orientation du deuxième fuseau méiotique seront quantifiées.
Le réseau d'actine et les chromosomes seront analysés quantitativement.
Toutes les mesures seront comparées avec des ovocytes frais en métaphase-II utilisés comme groupe témoin.
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au jour 1
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Analyse de la ségrégation chromosomique lors de la première division méiotique.
Délai: au jour 1
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La première division asymétrique est très sujette aux erreurs.
Pour déterminer si les chromosomes sont séparés avec précision après la vitrification, nous effectuerons une hybridation in situ par fluorescence pour peindre chaque chromosome après la propagation du chromosome à partir d'ovocytes au stade métaphase-II des deux conditions.
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au jour 1
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Analyse de la distribution des granules corticaux dans les ovocytes au stade métaphase-II.
Délai: au jour 1
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Une coloration à la lectine sera utilisée pour marquer les granules corticaux des ovocytes matures des deux protocoles afin d'observer si la vitrification modifie leur distribution spatiale.
Pour analyser cette coloration, nous utiliserons une méthode d'analyse d'image quantitative.
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au jour 1
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Analyse des stabilités des facteurs maternels.
Délai: au jour 1
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Les facteurs maternels stockés dans le cytoplasme de l'ovocyte pendant l'ovogenèse sous forme de protéines et de transcrits sont essentiels au développement embryonnaire précoce.
Pour savoir si le stock de facteurs maternels est diminué par la procédure de vitrification, nous effectuerons une transcription inverse combinée à une PCR en temps réel pour quantifier les quantités de transcrits de gènes candidats sélectionnés à partir de bases de données d'ovocytes humains.
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au jour 1
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Collaborateurs et enquêteurs
C'est ici que vous trouverez les personnes et les organisations impliquées dans cette étude.
Parrainer
Collaborateurs
Dates d'enregistrement des études
Ces dates suivent la progression des dossiers d'étude et des soumissions de résultats sommaires à ClinicalTrials.gov. Les dossiers d'étude et les résultats rapportés sont examinés par la Bibliothèque nationale de médecine (NLM) pour s'assurer qu'ils répondent à des normes de contrôle de qualité spécifiques avant d'être publiés sur le site Web public.
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
1 janvier 2017
Achèvement primaire (Réel)
1 janvier 2018
Achèvement de l'étude (Anticipé)
31 décembre 2019
Dates d'inscription aux études
Première soumission
24 janvier 2018
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
24 janvier 2018
Première publication (Réel)
31 janvier 2018
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
1 février 2018
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
31 janvier 2018
Dernière vérification
1 janvier 2018
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Autres numéros d'identification d'étude
- CHU-372
Informations sur les médicaments et les dispositifs, documents d'étude
Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine
Non
Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine
Non
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