Comparação do efeito de vitrificação antes ou depois da maturação in vitro
31 de janeiro de 2018 atualizado por: University Hospital, Clermont-Ferrand
Caracterização de um Método de Preservação da Fertilidade para Pacientes com Diagnóstico de Câncer
A criopreservação de oócitos humanos é rotineiramente utilizada para a preservação da fertilidade de mulheres que serão expostas ao efeito gonadotóxico do tratamento do câncer. Após a estimulação ovariana, os oócitos maturados são vitrificados. No entanto, essa estratégia nem sempre pode ser usada, particularmente para câncer sensível a hormônios ou quando a estimulação ovariana não é possível. Uma abordagem incluindo oócitos imaturos e maturação in vitro (MIV) pode ser considerada nesses casos. Embora algumas análises qualitativas de oócitos vitrificados antes ou depois da MIV sugiram que a vitrificação deva ser realizada após a MIV, pouco se sabe sobre os efeitos da vitrificação no citoesqueleto de actina e tubulina e na cinética de maturação de ovócitos humanos.
Para responder a esta questão, o Investigador realizou análises quantitativas comparando oócitos maturados de três grupos diferentes: vitrificados antes da MIV ou após a MIV e oócitos não vitrificados. Oócitos maturados não vitrificados foram usados como controle. Diferentes parâmetros têm sido analisados durante a maturação e em oócitos maturados.
Visão geral do estudo
Status
Desconhecido
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Oócitos imaturos foram coletados de pacientes (≤37 anos, sem endometriose, síndrome policística ou outra doença ovulatória) submetidas a ICSI.
Além disso, oócitos imaturos coletados de pacientes diagnosticados com câncer serão incluídos neste estudo.
Os oócitos foram maturados in vitro com meio IVM e vitrificados em sistema fechado ("Vitrolife").
A cinética de maturação foi analisada por Primovision ("Vitrolife") e a actina, e a organização do fuso foram estudadas por microscopia, técnicas de imunocoloração e análise quantitativa.
Tipo de estudo
Observacional
Inscrição (Antecipado)
100
Contactos e Locais
Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.
Locais de estudo
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Clermont-Ferrand, França, 63003
- Recrutamento
- Chu Clermont-Ferrand
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Subinvestigador:
- Aïcha METCHAT
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Critérios de participação
Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
18 anos a 37 anos (Adulto)
Aceita Voluntários Saudáveis
Sim
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Fêmea
Método de amostragem
Amostra Não Probabilística
População do estudo
fêmea
Descrição
Critério de inclusão:
- - Tratamento ICSI
- ovócitos imaturos
- < 37 anos
Critério de exclusão:
- - Síndrome dos Ovários Policísticos
- Endometriose
- doença ovulatória
Plano de estudo
Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
|---|---|
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Ovócitos imaturos vitrificados antes da Maturação In Vitro
Os ovócitos imaturos foram vitrificados em sistema fechado de vitrificação.
Após o aquecimento, foram cultivados durante 36 horas em meio IVM e fixados para análise celular
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Oócitos imaturos foram coletados de pacientes (≤37 anos, sem endometriose, síndrome policística ou outra doença ovulatória) submetidas a ICSI.
Além disso, oócitos imaturos coletados de pacientes diagnosticados com câncer serão incluídos neste estudo.
Os oócitos foram maturados in vitro com meio IVM e vitrificados em sistema fechado (Vitrolife).
A cinética de maturação foi analisada por Primovision (Vitrolife) e actina, e a organização do fuso foi estudada por microscopia, técnicas de imunocoloração e análise quantitativa.
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Oócitos imaturos cultivados in vitro antes da vitrificação
Oócitos imaturos foram cultivados in vitro em meio IVM durante 36 horas.
Após IVM, foram vitrificados.
Após o aquecimento, foram fixados para análise celular.
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Oócitos imaturos foram coletados de pacientes (≤37 anos, sem endometriose, síndrome policística ou outra doença ovulatória) submetidas a ICSI.
Além disso, oócitos imaturos coletados de pacientes diagnosticados com câncer serão incluídos neste estudo.
Os oócitos foram maturados in vitro com meio IVM e vitrificados em sistema fechado (Vitrolife).
A cinética de maturação foi analisada por Primovision (Vitrolife) e actina, e a organização do fuso foi estudada por microscopia, técnicas de imunocoloração e análise quantitativa.
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Ovócitos frescos
Oócitos imaturos foram cultivados in vitro em meio IVM durante 36 horas e posteriormente fixados para análise celular.
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Oócitos imaturos foram coletados de pacientes (≤37 anos, sem endometriose, síndrome policística ou outra doença ovulatória) submetidas a ICSI.
Além disso, oócitos imaturos coletados de pacientes diagnosticados com câncer serão incluídos neste estudo.
Os oócitos foram maturados in vitro com meio IVM e vitrificados em sistema fechado (Vitrolife).
A cinética de maturação foi analisada por Primovision (Vitrolife) e actina, e a organização do fuso foi estudada por microscopia, técnicas de imunocoloração e análise quantitativa.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Análise da cinética de maturação de oócitos vitrificados na fase de prófase I em comparação com oócitos frescos
Prazo: no dia 1
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Após a coleta dos oócitos, os oócitos imaturos serão vitrificados (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) em sistema fechado (Rapid-I®, Vitrolife) e descongelados para maturação in vitro alguns dias após.
O processo meiótico será analisado pela tecnologia time lapse (Primovision®, Vitrolife).
Isso permitirá marcar o tempo de maturação desde a retomada até a extrusão do corpo polar dos ovócitos.
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no dia 1
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Análise do citoesqueleto de actina e tubulina no estágio de metáfase II
Prazo: no dia 1
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Oócitos em metáfase II de ambos os protocolos serão utilizados para experimentos de imunofluorescência para coloração de actina, tubulina e cromossomos.
Os oócitos serão visualizados usando microscópio confocal para realizar imagens de alta resolução e análise quantitativa de imagens.
O comprimento, posição e orientação do segundo fuso meiótico serão quantificados.
A rede de actina e os cromossomos serão analisados quantitativamente.
Todas as medições serão comparadas com oócitos metafásicos II frescos usados como grupo controle.
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no dia 1
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Análise da segregação cromossômica durante a primeira divisão meiótica.
Prazo: no dia 1
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A primeira divisão assimétrica é altamente propensa a erros.
Para investigar se os cromossomos são segregados com precisão após a vitrificação, realizaremos a Hibridização In Situ de Fluorescência para pintar cada cromossomo após a propagação do cromossomo de oócitos em estágio de Metáfase II de ambas as condições
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no dia 1
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Análise da distribuição dos grânulos corticais em oócitos em estágio de metáfase II.
Prazo: no dia 1
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Uma coloração com lectina será utilizada para marcar grânulos corticais de oócitos maturados de ambos os protocolos para observar se a vitrificação modifica sua distribuição espacial.
Para analisar essa coloração, usaremos o método quantitativo de análise de imagem.
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no dia 1
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Análise das estabilidades dos fatores maternos.
Prazo: no dia 1
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Fatores maternos armazenados no citoplasma do oócito durante a oogênese como proteínas e transcritos são essenciais para o desenvolvimento embrionário inicial.
Para saber se o estoque de fatores maternos é diminuído pelo procedimento de vitrificação, faremos Transcrição Reversa combinada com PCR em Tempo Real para quantificar as quantidades de transcrição de genes candidatos selecionados de bancos de dados de oócitos humanos.
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no dia 1
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Colaboradores e Investigadores
É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.
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Colaboradores
Datas de registro do estudo
Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
1 de janeiro de 2017
Conclusão Primária (Real)
1 de janeiro de 2018
Conclusão do estudo (Antecipado)
31 de dezembro de 2019
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
24 de janeiro de 2018
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
24 de janeiro de 2018
Primeira postagem (Real)
31 de janeiro de 2018
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
1 de fevereiro de 2018
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
31 de janeiro de 2018
Última verificação
1 de janeiro de 2018
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Outros números de identificação do estudo
- CHU-372
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Não
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
Não
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