Vergleich des Vitrifikationseffekts vor oder nach der In-vitro-Reifung
31. Januar 2018 aktualisiert von: University Hospital, Clermont-Ferrand
Charakterisierung einer Methode zur Erhaltung der Fruchtbarkeit bei Patienten mit diagnostizierter Krebserkrankung
Die Kryokonservierung menschlicher Eizellen wird routinemäßig zur Erhaltung der Fruchtbarkeit von Frauen eingesetzt, die der gonadotoxischen Wirkung einer Krebsbehandlung ausgesetzt sind. Nach der Stimulation der Eierstöcke werden reife Eizellen vitrifiziert. Allerdings ist diese Strategie nicht immer anwendbar, insbesondere bei hormonsensitivem Krebs oder wenn eine Stimulation der Eierstöcke nicht möglich ist. In diesen Fällen könnte ein Ansatz in Betracht gezogen werden, der unreife Eizellen und In-vitro-Reifung (IVM) umfasst. Während einige qualitative Analysen von vor oder nach der IVM vitrifizierten Eizellen darauf hindeuten, dass die Vitrifizierung nach der IVM durchgeführt werden sollte, ist wenig über die Auswirkungen der Vitrifizierung auf das Aktin- und Tubulin-Zytoskelett und die Reifungskinetik menschlicher Eizellen bekannt.
Um diese Frage zu beantworten, führte der Forscher quantitative Analysen durch und verglich reife Eizellen aus drei verschiedenen Gruppen: vitrifizierte Eizellen vor oder nach IVM und nicht vitrifizierte Eizellen. Als Kontrolle dienten nicht vitrifizierte reife Eizellen. Während der Reifung und in reifen Eizellen wurden verschiedene Parameter analysiert.
Studienübersicht
Status
Unbekannt
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Unreife Eizellen wurden von Patientinnen (≤ 37 Jahre alt, ohne Endometriose, polyzystisches Syndrom oder andere Ovulationserkrankungen) entnommen, die sich einer ICSI unterzogen hatten.
Darüber hinaus werden unreife Eizellen von Patienten mit diagnostizierter Krebserkrankung in diese Studie einbezogen.
Eizellen wurden in vitro mit IVM-Medium gereift und in einem geschlossenen System („Vitrolife“) vitrifiziert.
Die Reifungskinetik wurde mit Primovision („Vitrolife“) und Aktin analysiert, und die Spindelorganisation wurde mit Mikroskopie, Immunfärbungstechniken und quantitativer Analyse untersucht.
Studientyp
Beobachtungs
Einschreibung (Voraussichtlich)
100
Kontakte und Standorte
Dieser Abschnitt enthält die Kontaktdaten derjenigen, die die Studie durchführen, und Informationen darüber, wo diese Studie durchgeführt wird.
Studienorte
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-
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Clermont-Ferrand, Frankreich, 63003
- Rekrutierung
- Chu Clermont-Ferrand
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Unterermittler:
- Aïcha METCHAT
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-
Teilnahmekriterien
Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
18 Jahre bis 37 Jahre (Erwachsene)
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Ja
Studienberechtigte Geschlechter
Weiblich
Probenahmeverfahren
Nicht-Wahrscheinlichkeitsprobe
Studienpopulation
weiblich
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- - ICSI-Behandlung
- Unreife Eizellen
- < 37 Jahre alt
Ausschlusskriterien:
- - Polyckistisches Ovarialsyndrom
- Endometriose
- Ovulationskrankheit
Studienplan
Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
|---|---|
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Unreife Eizellen, die vor der In-vitro-Reifung vitrifiziert wurden
Unreife Eizellen wurden mittels geschlossener Vitrifizierung vitrifiziert.
Nach dem Erwärmen wurden sie 36 Stunden lang in IVM-Medium kultiviert und für die Zellanalyse fixiert
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Unreife Eizellen wurden von Patientinnen (≤ 37 Jahre alt, ohne Endometriose, polyzystisches Syndrom oder andere Ovulationserkrankungen) entnommen, die sich einer ICSI unterzogen hatten.
Darüber hinaus werden unreife Eizellen von Patienten mit diagnostizierter Krebserkrankung in diese Studie einbezogen.
Die Eizellen wurden in vitro mit IVM-Medium gereift und in einem geschlossenen System (Vitrolife) vitrifiziert.
Die Reifungskinetik wurde mit Primovision (Vitrolife) und Aktin analysiert, und die Spindelorganisation wurde mit Mikroskopie, Immunfärbungstechniken und quantitativer Analyse untersucht.
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Unreife Eizellen, die vor der Vitrifizierung in vitro kultiviert wurden
Unreife Eizellen wurden 36 Stunden lang in vitro in IVM-Medium kultiviert.
Nach der IVM wurden sie vitrifiziert.
Nach dem Erwärmen wurden sie für die Zellanalyse fixiert.
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Unreife Eizellen wurden von Patientinnen (≤ 37 Jahre alt, ohne Endometriose, polyzystisches Syndrom oder andere Ovulationserkrankungen) entnommen, die sich einer ICSI unterzogen hatten.
Darüber hinaus werden unreife Eizellen von Patienten mit diagnostizierter Krebserkrankung in diese Studie einbezogen.
Die Eizellen wurden in vitro mit IVM-Medium gereift und in einem geschlossenen System (Vitrolife) vitrifiziert.
Die Reifungskinetik wurde mit Primovision (Vitrolife) und Aktin analysiert, und die Spindelorganisation wurde mit Mikroskopie, Immunfärbungstechniken und quantitativer Analyse untersucht.
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Frische Eizellen
Unreife Eizellen wurden 36 Stunden lang in vitro in IVM-Medium kultiviert und anschließend für die Zellanalyse fixiert.
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Unreife Eizellen wurden von Patientinnen (≤ 37 Jahre alt, ohne Endometriose, polyzystisches Syndrom oder andere Ovulationserkrankungen) entnommen, die sich einer ICSI unterzogen hatten.
Darüber hinaus werden unreife Eizellen von Patienten mit diagnostizierter Krebserkrankung in diese Studie einbezogen.
Die Eizellen wurden in vitro mit IVM-Medium gereift und in einem geschlossenen System (Vitrolife) vitrifiziert.
Die Reifungskinetik wurde mit Primovision (Vitrolife) und Aktin analysiert, und die Spindelorganisation wurde mit Mikroskopie, Immunfärbungstechniken und quantitativer Analyse untersucht.
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Analyse der Reifungskinetik von im Prophase-I-Stadium vitrifizierten Eizellen im Vergleich zu frischen Eizellen
Zeitfenster: am Tag 1
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Nach der Eizellentnahme werden unreife Eizellen in einem geschlossenen System (Rapid-I®, Vitrolife) vitrifiziert (Rapid Vit Ovozyten®, Vitrolife) und einige Tage später für die In-vitro-Reifung aufgetaut.
Der meiotische Prozess wird mithilfe der Zeitraffertechnologie (Primovision®, Vitrolife) analysiert.
Dies ermöglicht es, die Reifungszeit von der Wiederaufnahme bis zur Extrusion der Eizellen aus dem Polkörper zu bestimmen.
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am Tag 1
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Analyse des Aktin- und Tubulin-Zytoskeletts im Metaphase-II-Stadium
Zeitfenster: am Tag 1
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Eizellen im Metaphase-II-Stadium aus beiden Protokollen werden für Immunfluoreszenzexperimente zur Färbung von Aktin, Tubulin und Chromosomen verwendet.
Eizellen werden mit einem konfokalen Mikroskop abgebildet, um eine hochauflösende Bildgebung und eine quantitative Bildanalyse durchzuführen.
Die Länge, Position und Ausrichtung der zweiten meiotischen Spindel werden quantifiziert.
Das Aktinnetzwerk und die Chromosomen werden quantitativ analysiert.
Alle Messungen werden mit frischen Metaphase-II-Oozyten verglichen, die als Kontrollgruppe dienen.
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am Tag 1
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Analyse der Chromosomensegregation während der ersten meiotischen Teilung.
Zeitfenster: am Tag 1
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Die erste asymmetrische Division ist sehr fehleranfällig.
Um zu untersuchen, ob die Chromosomen nach der Vitrifizierung korrekt getrennt sind, führen wir eine Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung durch, um jedes Chromosom nach der Chromosomenausbreitung aus Eizellen im Metaphase-II-Stadium beider Erkrankungen zu bemalen
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am Tag 1
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Analyse der kortikalen Granulatverteilung in Eizellen im Metaphase-II-Stadium.
Zeitfenster: am Tag 1
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Eine Färbung mit Lektin wird verwendet, um kortikale Körnchen reifer Eizellen aus beiden Protokollen zu markieren, um zu beobachten, ob die Vitrifizierung ihre räumliche Verteilung verändert.
Um diese Färbung zu analysieren, verwenden wir eine quantitative Bildanalysemethode.
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am Tag 1
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Analyse mütterlicher Faktorstabilitäten.
Zeitfenster: am Tag 1
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Mütterliche Faktoren, die während der Oogenese als Proteine und Transkripte im Zytoplasma der Eizelle gespeichert werden, sind für die frühe Embryonalentwicklung essentiell.
Um herauszufinden, ob der Bestand an mütterlichen Faktoren durch das Vitrifizierungsverfahren verringert wird, führen wir eine Reverse Transkription in Kombination mit einer Echtzeit-PCR durch, um die Transkriptionsmengen von Kandidatengenen zu quantifizieren, die aus Datenbanken menschlicher Eizellen ausgewählt wurden.
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am Tag 1
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Mitarbeiter und Ermittler
Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.
Mitarbeiter
Studienaufzeichnungsdaten
Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
1. Januar 2017
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
1. Januar 2018
Studienabschluss (Voraussichtlich)
31. Dezember 2019
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
24. Januar 2018
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
24. Januar 2018
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
31. Januar 2018
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
1. Februar 2018
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
31. Januar 2018
Zuletzt verifiziert
1. Januar 2018
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Andere Studien-ID-Nummern
- CHU-372
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Nein
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Nein
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