Comparación del efecto de vitrificación antes o después de la maduración in vitro
31 de enero de 2018 actualizado por: University Hospital, Clermont-Ferrand
Caracterización de un método de preservación de la fertilidad para pacientes diagnosticados de cáncer
La crioconservación de ovocitos humanos se usa habitualmente para la preservación de la fertilidad de las mujeres que estarán expuestas al efecto gonadotóxico del tratamiento del cáncer. Después de la estimulación ovárica, los ovocitos maduros se vitrifican. Sin embargo, esta estrategia no siempre se puede usar, particularmente para el cáncer sensible a las hormonas o cuando la estimulación ovárica no es posible. En estos casos, se podría considerar un enfoque que incluya ovocitos inmaduros y maduración in vitro (IVM). Si bien algunos análisis cualitativos de ovocitos vitrificados antes o después de la MIV sugieren que la vitrificación debe realizarse después de la MIV, se sabe poco sobre los efectos de la vitrificación en el citoesqueleto de actina y tubulina y la cinética de maduración de los ovocitos humanos.
Para responder a esta pregunta, el investigador realizó análisis cuantitativos comparando ovocitos maduros de tres grupos diferentes: vitrificados antes de IVM o después de IVM y ovocitos no vitrificados. Como control se utilizaron ovocitos maduros no vitrificados. Se han analizado diferentes parámetros durante la maduración y en ovocitos maduros.
Descripción general del estudio
Estado
Desconocido
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Se recolectaron ovocitos inmaduros de pacientes (≤37 años, sin endometriosis, síndrome poliquístico u otra enfermedad ovulatoria) que se sometieron a ICSI.
Además, se incluirán en este estudio los ovocitos inmaduros recolectados de pacientes diagnosticadas con cáncer.
Los ovocitos se maduraron in vitro con medio IVM y se vitrificaron en sistema cerrado ("Vitrolife").
La cinética de maduración se analizó mediante Primovision ("Vitrolife") y la actina y la organización del huso se estudiaron mediante microscopía, técnicas de inmunotinción y análisis cuantitativo.
Tipo de estudio
De observación
Inscripción (Anticipado)
100
Contactos y Ubicaciones
Esta sección proporciona los datos de contacto de quienes realizan el estudio e información sobre dónde se lleva a cabo este estudio.
Ubicaciones de estudio
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Clermont-Ferrand, Francia, 63003
- Reclutamiento
- Chu Clermont-Ferrand
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Sub-Investigador:
- Aïcha METCHAT
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Criterios de participación
Los investigadores buscan personas que se ajusten a una determinada descripción, denominada criterio de elegibilidad. Algunos ejemplos de estos criterios son el estado de salud general de una persona o tratamientos previos.
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
18 años a 37 años (Adulto)
Acepta Voluntarios Saludables
Sí
Géneros elegibles para el estudio
Femenino
Método de muestreo
Muestra no probabilística
Población de estudio
femenino
Descripción
Criterios de inclusión:
- - Tratamiento ICSI
- ovocitos inmaduros
- < 37 años
Criterio de exclusión:
- - Síndrome de ovario poliquístico
- endometriosis
- enfermedad ovulatoria
Plan de estudios
Esta sección proporciona detalles del plan de estudio, incluido cómo está diseñado el estudio y qué mide el estudio.
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Ovocitos inmaduros vitrificados antes de la Maduración In Vitro
Los ovocitos inmaduros se vitrificaron mediante vitrificación de sistema cerrado.
Después del calentamiento, se cultivaron durante 36 horas en medio IVM y se fijaron para análisis celular.
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Se recolectaron ovocitos inmaduros de pacientes (≤37 años, sin endometriosis, síndrome poliquístico u otra enfermedad ovulatoria) que se sometieron a ICSI.
Además, se incluirán en este estudio los ovocitos inmaduros recolectados de pacientes diagnosticadas con cáncer.
Los ovocitos fueron madurados in vitro con medio IVM y vitrificados en sistema cerrado (Vitrolife).
La cinética de maduración se analizó mediante Primovision (Vitrolife) y la actina y la organización del huso se estudiaron mediante microscopía, técnicas de inmunotinción y análisis cuantitativo.
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Oocitos inmaduros cultivados in vitro antes de la vitrificación
Los ovocitos inmaduros se cultivaron in vitro en medio IVM durante 36 horas.
Después de la IVM, se vitrificaron.
Después del calentamiento, se fijaron para análisis celular.
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Se recolectaron ovocitos inmaduros de pacientes (≤37 años, sin endometriosis, síndrome poliquístico u otra enfermedad ovulatoria) que se sometieron a ICSI.
Además, se incluirán en este estudio los ovocitos inmaduros recolectados de pacientes diagnosticadas con cáncer.
Los ovocitos fueron madurados in vitro con medio IVM y vitrificados en sistema cerrado (Vitrolife).
La cinética de maduración se analizó mediante Primovision (Vitrolife) y la actina y la organización del huso se estudiaron mediante microscopía, técnicas de inmunotinción y análisis cuantitativo.
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Ovocitos frescos
Los ovocitos inmaduros se cultivaron in vitro en medio IVM durante 36 horas y posteriormente se fijaron para análisis celular.
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Se recolectaron ovocitos inmaduros de pacientes (≤37 años, sin endometriosis, síndrome poliquístico u otra enfermedad ovulatoria) que se sometieron a ICSI.
Además, se incluirán en este estudio los ovocitos inmaduros recolectados de pacientes diagnosticadas con cáncer.
Los ovocitos fueron madurados in vitro con medio IVM y vitrificados en sistema cerrado (Vitrolife).
La cinética de maduración se analizó mediante Primovision (Vitrolife) y la actina y la organización del huso se estudiaron mediante microscopía, técnicas de inmunotinción y análisis cuantitativo.
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Análisis de la cinética de maduración de ovocitos vitrificados en etapa de Profase-I en comparación con ovocitos frescos
Periodo de tiempo: en el día 1
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Después de la recuperación de los ovocitos, los ovocitos inmaduros serán vitrificados (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) en un sistema cerrado (Rapid-I®, Vitrolife) y descongelados para su maduración in vitro unos días después.
El proceso meiótico será analizado mediante tecnología time lapse (Primovision®, Vitrolife).
Esto permitirá anotar el tiempo de maduración desde la reanudación hasta la extrusión del cuerpo polar de los ovocitos.
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en el día 1
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Análisis del citoesqueleto de actina y tubulina en la etapa Metafase-II
Periodo de tiempo: en el día 1
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Los ovocitos en etapa de metafase II de ambos protocolos se utilizarán para experimentos de inmunofluorescencia para teñir la actina, la tubulina y los cromosomas.
Se tomarán imágenes de los ovocitos utilizando un microscopio confocal para realizar imágenes de alta resolución y análisis cuantitativo de imágenes.
Se irá cuantificando la longitud, posición y orientación del segundo huso meiótico.
La red de actina y los cromosomas se analizarán cuantitativamente.
Todas las mediciones se compararán con ovocitos frescos de Metafase-II utilizados como grupo de control.
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en el día 1
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Análisis de la segregación cromosómica durante la primera división meiótica.
Periodo de tiempo: en el día 1
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La primera división asimétrica es altamente propensa a errores.
Para investigar si los cromosomas se segregan con precisión después de la vitrificación, realizaremos hibridación fluorescente in situ para pintar cada cromosoma después de la propagación cromosómica a partir de ovocitos en etapa de metafase II de ambas condiciones.
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en el día 1
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Análisis de la distribución de gránulos corticales en ovocitos en etapa Metafase-II.
Periodo de tiempo: en el día 1
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Se utilizará una tinción con Lectina para marcar gránulos corticales de ovocitos maduros de ambos protocolos para observar si la vitrificación modifica su distribución espacial.
Para analizar esta tinción, utilizaremos el método de análisis de imagen cuantitativo.
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en el día 1
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Análisis de las estabilidades de los factores maternos.
Periodo de tiempo: en el día 1
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Los factores maternos almacenados en el citoplasma del ovocito durante la ovogénesis como proteínas y transcritos son esenciales para el desarrollo embrionario temprano.
Para saber si el stock de factores maternos se ve disminuido por el procedimiento de vitrificación, realizaremos la transcripción inversa combinada con PCR en tiempo real para cuantificar las cantidades de transcripción de los genes candidatos seleccionados de las bases de datos de ovocitos humanos.
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en el día 1
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Colaboradores e Investigadores
Aquí es donde encontrará personas y organizaciones involucradas en este estudio.
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Colaboradores
Fechas de registro del estudio
Estas fechas rastrean el progreso del registro del estudio y los envíos de resultados resumidos a ClinicalTrials.gov. Los registros del estudio y los resultados informados son revisados por la Biblioteca Nacional de Medicina (NLM) para asegurarse de que cumplan con los estándares de control de calidad específicos antes de publicarlos en el sitio web público.
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
1 de enero de 2017
Finalización primaria (Actual)
1 de enero de 2018
Finalización del estudio (Anticipado)
31 de diciembre de 2019
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
24 de enero de 2018
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
24 de enero de 2018
Publicado por primera vez (Actual)
31 de enero de 2018
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Actual)
1 de febrero de 2018
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
31 de enero de 2018
Última verificación
1 de enero de 2018
Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Otros números de identificación del estudio
- CHU-372
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
No
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
No
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