基于脑脊液中 Tau 蛋白定量的 TSD 估计

背景：准确估计死亡时间是法医学中的一个挑战，因为通常用于评估死后间隔 (PMI) 的方法远非精确。 生化技术的最新发展可能有助于更精确地估计死亡时间。 重点放在研究封闭隔室体液的生化特征上，因为它们比死后的血液保存时间更长，并且受限于死后化学变化。 脑脊液 (CSF) 已被认为是研究这些变化的合适液体，因为它易于取样且数量大。

由于靠近中枢神经系统 (CNS)，CSF 在临床环境中用于诊断各种中枢神经系统疾病，例如阿尔茨海默氏病，其诊断主要基于 Tau 蛋白及其磷酸化亚型浓度的增加（ p-Tau) 在脑脊液中。 还显示了死后 Tau 泄漏到 CSF 中，反映了与阿尔茨海默病一样的进行性神经元死亡。 在这项探索性横断面研究中，我们调查了死后脑脊液中的 Tau 作为死亡时间的潜在生物标志物。

目的：主要目的是评估 CSF 中 Tau 浓度与 PMI 之间的相关性。 次要目标是 (1) 确定相同 PMI 的 Tau 浓度的个体间变异性； (2) 确定该浓度在同一个体中随时间变化的动力学； (3) 根据收集部位（腰椎与枕下）确定该浓度的变异性。

材料和方法：该研究经蒙彼利埃大学医院伦理委员会审查和批准。 在蒙彼利埃大学医院太平间，从 80 具准确知道死亡时间的成年尸体中采集了死后脑脊液样本。 患有神经系统疾病和头部外伤的个体以及过去病史或死因不明的受试者被排除在研究之外。 CSF 样本在到达太平间时通过脑池和腰椎穿刺取出，然后冷藏。 使用 18G 腰椎穿刺针在干净、无菌的聚丙烯管中的每个水龙头处获得几毫升脑脊液。 根据PMI将尸体分为四组（每组n = 25）。 在死亡后 0-6 小时（A 组）、6-12 小时（B 组）、12-18 小时（C 组）和 18-24 小时（D 组）采集样本。 此外，在第一个 15 小时的验尸过程中，每 3 小时从 10 具尸体中收集 CSF 样本。 在样本采集期间，所有尸体都保持在室温 (+20 ± 2°C) 下。 CSF 样品在 +4°C 下转移到实验室，在那里离心 10 分钟（+4°C，1000 g）。 将澄清的上清液分成等分试样，然后储存在 -80°C 直至分析。 在收集 CSF 时使用探针温度计测量直肠和鼓膜温度。

Tau 及其磷酸化亚型 (p-Tau) 的浓度通过常规免疫测定法测量，而总蛋白浓度使用二辛可宁酸蛋白测定法测定。

在每种情况下计算 CSF 中 Tau 浓度与 PMI 之间的相关系数。 通过测量每组中 Tau 平均浓度的标准偏差 (SD) 来评估个体间变异性。 线性回归分析（针对混杂因素进行了调整）用于评估 Tau 浓度是否依赖于 PMI。 配对学生 t 检验用于评估 Tau 浓度的变异性，具体取决于 CSF 采集地点