Estimat af TSD baseret på kvantificeringen af ​​Tau-proteinet i CSF

Baggrund: Den nøjagtige vurdering af dødstidspunktet er en udfordring inden for retsmedicin, da de metoder, der rutinemæssigt anvendes til at vurdere post-mortem-intervallet (PMI), langt fra er præcise. Den seneste udvikling inden for biokemiske teknikker kan give mulighed for at hjælpe med en mere præcis vurdering af dødstidspunktet. Fokus er blevet sat på studiet af de biokemiske profiler af kropsvæsker i lukkede rum, da de er længere bevaret end blod efter døden og udsat for begrænsede kemiske ændringer efter døden. Cerebrospinalvæske (CSF) er blevet betragtet som en egnet væske til at undersøge disse ændringer, da den er let at prøve og findes i store mængder.

På grund af sin nærhed til centralnervesystemet (CNS), bruges CSF i kliniske omgivelser til diagnosticering af forskellige CNS-lidelser såsom Alzheimers sygdom, hvis diagnose hovedsageligt er baseret på stigningen i koncentrationerne af Tau-protein og dets phosphorylerede isoform ( p-Tau) i CSF. En post mortem lækage af Tau i CSF er også blevet vist, hvilket afspejler progressiv neuronal død som ved Alzheimers sygdom. I denne eksplorative tværsnitsundersøgelse undersøgte vi Tau i post mortem CSF som en potentiel biomarkør for dødstidspunktet.

Mål: Hovedformålet var at vurdere sammenhængen mellem koncentrationen af ​​Tau i CSF og PMI. De sekundære mål var (1) at bestemme den inter-individuelle variabilitet af koncentrationen af ​​Tau for en samme PMI; (2) at bestemme kinetikken af ​​denne koncentration over tid i det samme individ; (3) for at bestemme variabiliteten af ​​denne koncentration i henhold til opsamlingsstedet (lumbal vs. sub-occipital).

Materialer og metoder: Undersøgelsen blev gennemgået og godkendt af den etiske komité på universitetshospitalet i Montpellier. Post mortem CSF-prøver blev indsamlet fra 80 voksne kadavere, hvis dødstidspunkt var nøjagtigt kendt, i lighuset på universitetshospitalet i Montpellier. Personer med neurologiske lidelser og hovedtraumer blev udelukket fra undersøgelsen, såvel som personer med ukendt tidligere sygehistorie eller dødsårsag. CSF-prøver blev fjernet ved cisternale og lumbale punkteringer på tidspunktet for ankomst til lighuset før nedkøling. Et par ml CSF blev opnået ved hver hane i rene, sterile polypropylenrør ved anvendelse af en 18G lumbal punkturnål. Kadaverne blev opdelt i fire grupper i henhold til PMI (n=25 i hver gruppe). Prøverne blev taget 0-6 timer (gruppe A), 6-12 timer (gruppe B), 12-18 timer (gruppe C) og 18-24 timer (gruppe D) efter døden. Derudover blev CSF-prøver indsamlet hver 3. time fra 10 kadavere i løbet af de første 15 timer post mortem. Alle kadavere blev holdt ved stuetemperatur (+20 ± 2 °C) under prøvetagning. CSF-prøver blev overført ved +4°C til laboratoriet, hvor de blev centrifugeret i 10 minutter (+4°C, 1000 g). Den klare supernatant blev opdelt i portioner og derefter opbevaret ved -80°C indtil analyse. De rektale og tympaniske temperaturer blev målt på tidspunktet for CSF-opsamling ved anvendelse af et sondetermometer.

Koncentrationer af Tau og og dens phosphorylerede isoform (p-Tau) blev målt ved konventionelle immunoassays, mens den totale proteinkoncentration blev bestemt under anvendelse af et bicinchoninsyreproteinassay.

Korrelationskoefficienten mellem koncentrationen af ​​Tau i CSF og PMI blev beregnet i hvert tilfælde. Den interindividuelle variabilitet blev vurderet ved at måle standardafvigelsen (SD) af middelkoncentrationen af ​​Tau i hver gruppe. Lineær regressionsanalyse (justeret for konfoundere) blev brugt til at vurdere, om Tau-koncentrationen var afhængig af PMI. Parret Students t-test blev brugt til at vurdere variabiliteten af ​​Tau-koncentration afhængigt af stedet for CSF-indsamling