CSF에서 타우 단백질의 정량화에 기초한 TSD 추정

배경: 사후 간격(PMI)을 평가하는 데 일상적으로 사용되는 방법이 정확하지 않기 때문에 사망 시간의 정확한 추정은 법의학에서 어려운 과제입니다. 생화학 기술의 최근 발전은 사망 시간을 보다 정확하게 추정하는 데 도움이 될 수 있는 기회를 제공할 수 있습니다. 폐쇄 구획 체액의 생화학적 프로필 연구에 중점을 두었는데, 이는 사망 후 혈액보다 더 오래 보존되고 한정된 사후 화학적 변화를 받기 때문입니다. 뇌척수액(CSF)은 샘플링하기 쉽고 대량으로 발견되기 때문에 이러한 변화를 조사하기에 적합한 유체로 간주되었습니다.

CSF는 중추신경계(CNS)에 가깝기 때문에 알츠하이머병과 같은 다양한 CNS 장애의 진단을 위한 임상 환경에서 사용되며 진단은 주로 Tau 단백질과 인산화된 isoform의 농도 증가에 기반합니다. p-Tau) CSF에서. 알츠하이머병에서와 같이 진행성 신경세포 사멸을 반영하는 CSF로의 Tau의 사후 누출도 나타났습니다. 이 탐색적 단면 연구에서 우리는 사망 시간의 잠재적인 바이오마커로서 사후 CSF에서 타우를 조사했습니다.

목표: 주요 목표는 CSF의 타우 농도와 PMI 사이의 상관관계를 평가하는 것이었습니다. 2차 목표는 (1) 동일한 PMI에 대한 타우 농도의 개인 간 가변성을 결정하는 것입니다. (2) 동일한 개체에서 시간 경과에 따른 이 농도의 동역학을 결정하기 위해; (3) 수집 부위(요추 대 후두부)에 따른 이 농도의 가변성을 결정하기 위해.

재료 및 방법: 본 연구는 Montpellier 대학병원 윤리위원회의 검토 및 승인을 받았습니다. 몽펠리에 대학병원 영안실에서 사망 시간이 정확히 알려진 80구의 성인 사체에서 사후 CSF 샘플을 수집했습니다. 신경계 장애 및 두부 외상이 있는 개인과 과거 병력 또는 사망 원인이 알려지지 않은 피험자는 연구에서 제외되었습니다. CSF 샘플은 영안실에 도착했을 때 냉장 보관하기 전에 수조 및 요추 천자에 의해 제거되었습니다. 18G 요추 천자 바늘을 사용하여 깨끗하고 살균된 폴리프로필렌 튜브에서 각 탭에서 몇 mL의 CSF를 얻었습니다. 사체는 PMI에 따라 4개의 그룹으로 나뉘었다(각 그룹에서 n=25). 샘플은 사망 후 0-6시간(그룹 A), 6-12시간(그룹 B), 12-18시간(그룹 C) 및 18-24시간(그룹 D)에 채취되었습니다. 또한 CSF 샘플은 사후 첫 15시간 동안 10구의 사체에서 3시간마다 수집되었습니다. 모든 시체는 샘플 수집 중에 실온(+20 ± 2°C)에 보관되었습니다. CSF 샘플을 +4°C에서 실험실로 옮겨 10분 동안 원심분리했습니다(+4°C, 1000g). 투명한 상청액을 분취량으로 나눈 다음 분석할 때까지 -80°C에서 보관했습니다. 프로브 온도계를 사용하여 CSF 수집시 직장 및 고막 온도를 측정했습니다.

Tau 및 인산화 동형(p-Tau)의 농도는 기존의 면역분석법으로 측정한 반면 총 단백질 농도는 비신코닌산 단백질 분석법을 사용하여 측정했습니다.

CSF의 타우 농도와 PMI 사이의 상관 계수는 각각의 경우에 계산되었습니다. 개인 간 변동성은 각 그룹의 타우 평균 농도의 표준 편차(SD)를 측정하여 평가했습니다. 타우 농도가 PMI에 의존하는지 여부를 평가하기 위해 선형 회귀 분석(교란 요인에 대해 조정됨)을 사용했습니다. Paired Student's t-test를 사용하여 CSF 수집 부위에 따른 타우 농도의 가변성을 평가했습니다.