Stima della TSD basata sulla quantificazione della proteina Tau nel liquido cerebrospinale

Sfondo: la stima accurata dell'ora della morte è una sfida in medicina legale, poiché i metodi abitualmente utilizzati per valutare l'intervallo post mortem (PMI) sono lungi dall'essere precisi. I recenti sviluppi nelle tecniche biochimiche possono fornire l'opportunità di assistere in una stima più precisa dell'ora della morte. L'attenzione è stata posta sullo studio dei profili biochimici dei fluidi corporei a compartimento chiuso, in quanto sono conservati più a lungo del sangue dopo la morte e soggetti a cambiamenti chimici post-mortem confinati. Il liquido cerebrospinale (CSF) è stato considerato un fluido adatto per indagare su questi cambiamenti, poiché è facile da campionare e si trova in grandi quantità.

A causa della sua vicinanza al sistema nervoso centrale (SNC), il CSF viene utilizzato in ambito clinico per la diagnosi di vari disturbi del SNC come il morbo di Alzheimer, la cui diagnosi si basa principalmente sull'aumento delle concentrazioni della proteina Tau e della sua isoforma fosforilata ( p-Tau) nel CSF. È stata anche dimostrata una perdita post mortem di Tau nel liquido cerebrospinale, che riflette la progressiva morte neuronale come nel morbo di Alzheimer. In questo studio esplorativo e trasversale, abbiamo studiato Tau nel CSF post mortem come potenziale biomarcatore dell'ora della morte.

Obiettivi: L'obiettivo principale era valutare la correlazione tra la concentrazione di Tau nel CSF e il PMI. Gli obiettivi secondari erano (1) determinare la variabilità interindividuale della concentrazione di Tau per uno stesso PMI; (2) determinare la cinetica di questa concentrazione nel tempo nello stesso individuo; (3) determinare la variabilità di tale concentrazione in funzione del sito di prelievo (lombare vs suboccipitale).

Materiali e metodi: Lo studio è stato rivisto e approvato dal Comitato Etico dell'Ospedale Universitario di Montpellier. Campioni post mortem di CSF sono stati prelevati da 80 cadaveri adulti di cui si conosceva con precisione l'ora della morte, presso l'obitorio dell'Ospedale Universitario di Montpellier. Gli individui con disturbi neurologici e trauma cranico sono stati esclusi dallo studio, così come i soggetti con storia medica passata sconosciuta o causa di morte. I campioni di CSF sono stati prelevati mediante punture cisternali e lombari al momento dell'arrivo all'obitorio, prima della refrigerazione. Alcuni mL di CSF sono stati ottenuti ad ogni prelievo in tubi di polipropilene puliti e sterili, utilizzando un ago per puntura lombare 18G. I cadaveri sono stati divisi in quattro gruppi secondo il PMI (n=25 in ciascun gruppo). I campioni sono stati prelevati 0-6 ore (gruppo A), 6-12 ore (gruppo B), 12-18 ore (gruppo C) e 18-24 ore (gruppo D) dopo la morte. Inoltre, i campioni di CSF sono stati raccolti ogni 3 ore da 10 cadaveri durante le prime 15 ore post mortem. Tutti i cadaveri sono stati tenuti a temperatura ambiente (+20 ± 2°C) durante la raccolta del campione. I campioni di CSF sono stati trasferiti a +4°C al laboratorio dove sono stati centrifugati per 10 min (+4°C, 1000 g). Il surnatante limpido è stato suddiviso in aliquote quindi conservate a -80°C fino all'analisi. Le temperature rettali e timpaniche sono state misurate al momento della raccolta del CSF utilizzando un termometro a sonda.

Le concentrazioni di Tau e della sua isoforma fosforilata (p-Tau) sono state misurate mediante test immunologici convenzionali, mentre la concentrazione proteica totale è stata determinata utilizzando un test della proteina dell'acido bicinconinico.

In ogni caso è stato calcolato il coefficiente di correlazione tra la concentrazione di Tau nel CSF e il PMI. La variabilità interindividuale è stata valutata misurando la deviazione standard (SD) della concentrazione media di Tau in ciascun gruppo. L'analisi di regressione lineare (aggiustata per fattori confondenti) è stata utilizzata per valutare se la concentrazione di Tau dipendesse dal PMI. Il t-test di Student appaiato è stato utilizzato per valutare la variabilità della concentrazione di Tau a seconda del sito di raccolta del CSF