Uppskattning av TSD baserat på kvantifieringen av Tau-proteinet i CSF

Bakgrund: Den korrekta uppskattningen av tidpunkten för dödsfallet är en utmaning inom rättsmedicin, eftersom de metoder som rutinmässigt används för att bedöma post-mortem-intervallet (PMI) är långt ifrån exakta. Den senaste utvecklingen inom biokemiska tekniker kan ge möjlighet att hjälpa till med en mer exakt uppskattning av tidpunkten för dödsfallet. Fokus har lagts på studiet av de biokemiska profilerna av kroppsvätskor med slutna fack, eftersom de är längre bevarade än blod efter döden och utsatta för begränsade kemiska förändringar efter döden. Cerebrospinalvätska (CSF) har ansetts vara en lämplig vätska för att undersöka dessa förändringar, eftersom det är lätt att ta prov och hittas i stora mängder.

På grund av dess närhet till det centrala nervsystemet (CNS) används CSF i kliniska miljöer för diagnos av olika CNS-störningar såsom Alzheimers sjukdom, vars diagnos huvudsakligen baseras på ökningen av koncentrationerna av Tau-protein och dess fosforylerade isoform ( p-Tau) i CSF. Ett post mortem läckage av Tau in i CSF har också visats, vilket återspeglar progressiv neuronal död som vid Alzheimers sjukdom. I denna explorativa tvärsnittsstudie undersökte vi Tau i post mortem CSF som en potentiell biomarkör för tidpunkten för döden.

Mål: Huvudsyftet var att bedöma korrelationen mellan koncentrationen av Tau i CSF och PMI. De sekundära målen var (1) att bestämma den interindividuella variationen av koncentrationen av Tau för samma PMI; (2) att bestämma kinetiken för denna koncentration över tid hos samma individ; (3) för att bestämma variabiliteten av denna koncentration beroende på uppsamlingsplatsen (ländrygg kontra sub-occipital).

Material och metoder: Studien granskades och godkändes av etikkommittén vid universitetssjukhuset i Montpellier. Post mortem CSF-prover samlades in från 80 vuxna kadaver vars dödstid var exakt känd, vid bårhuset på universitetssjukhuset i Montpellier. Individer med neurologiska störningar och huvudtrauma exkluderades från studien, såväl som personer med okänd tidigare medicinsk historia eller dödsorsak. CSF-prover togs bort genom cisternala och lumbala punkteringar vid tiden för ankomsten till bårhuset, före kylning. Några ml CSF erhölls vid varje kran i rena, sterila polypropenrör, med användning av en 18G lumbalpunktionsnål. Kadaverna delades in i fyra grupper enligt PMI (n=25 i varje grupp). Proverna togs 0-6 timmar (grupp A), 6-12 timmar (grupp B), 12-18 timmar (grupp C) och 18-24 timmar (grupp D) efter döden. Dessutom samlades CSF-prover var tredje timme från 10 kadaver under de första 15 timmarna post mortem. Alla kadaver hölls vid rumstemperatur (+20 ± 2°C) under provtagningen. CSF-prover överfördes vid +4°C till laboratoriet där de centrifugerades i 10 minuter (+4°C, 1000 g). Den klara supernatanten delades upp i alikvoter och förvarades sedan vid -80°C fram till analys. De rektala och tympaniska temperaturerna mättes vid tidpunkten för CSF-uppsamling med användning av en sondtermometer.

Koncentrationer av Tau och och dess fosforylerade isoform (p-Tau) mättes med konventionella immunanalyser, medan den totala proteinkoncentrationen bestämdes med användning av en bicinchoninsyraproteinanalys.

Korrelationskoefficienten mellan koncentrationen av Tau i CSF och PMI beräknades i varje fall. Den interindividuella variabiliteten bedömdes genom att mäta standardavvikelsen (SD) för medelkoncentrationen av Tau i varje grupp. Linjär regressionsanalys (justerad för konfounders) användes för att bedöma om Tau-koncentrationen var beroende av PMI. Parad Students t-test användes för att bedöma variationen av Tau-koncentration beroende på platsen för CSF-insamling