CLL 中高酚类 EVOO 的饮食干预

特级初榨橄榄油 (EVOO) 是地中海饮食的主要成分。 在橄榄油中检测到 200 多种不同的化合物，包括脂肪酸、甾醇、类胡萝卜素、萜类化合物、类黄酮、生育酚和橄榄多酚。 初榨橄榄油中含有多种重要的酚类成分，主要对应化合物有酪醇、羟基酪醇、油橄榄素（OC）、油酸（OL）、麻黄素苷和橄榄苦苷苷元。在这些橄榄酚中，油橄榄素是二羧甲基李子苷苷元的二醛形式，它已从 EVOO 中分离出来，具有广泛的生物学作用，包括抗氧化、抗炎、抗癌、神经保护和抗糖尿病活性，因此引起了更多的科学关注。

慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 是西方国家最常诊断的成人白血病，约占所有白血病病例的四分之一。 它的特点是单克隆B细胞在骨髓、外周血、淋巴组织和脾脏中聚集，但往往无症状，发展缓慢。 CLL 患者并不总是需要立即治疗。 然而，出现症状的患者的中位生存期大约为 18 个月至 6 年，具体取决于临床分期。 CLL的诊断标准是外周血单克隆B淋巴细胞≥5000淋巴细胞/ml至少3个月，幼淋巴细胞≤55%，分化簇（CD）5和B细胞表面抗原CD 19共表达， CD 20 和 CD 23、低水平的 CD 20、CD 79b 和低表达的表面免疫球蛋白 (sIg)，以及 kappa 或 lambda 轻链限制。 估计预后的标准临床程序是由 Rai 等人和 Binet 等人开发的临床分期系统。

造血细胞凋亡水平可能提供有关负责调节祖细胞和干细胞增殖的机制的信息。 已发现细胞凋亡的功能障碍与白血病有关。 已经描述了 CLL 患者骨髓祖细胞中 Apo-1/fas (CD 95) 凋亡标志物表达的增加和凋亡 B 细胞淋巴瘤 2 (BCL-2) 抑制剂的相应减少。 最近的研究还表明，CLL 患者淋巴细胞的增加可能是由于 CLL 细胞的增殖和凋亡之间的平衡被打破，而细胞凋亡相关蛋白表达的变化在 CLL 的所有 Binet 阶段都得到认可。 p38水平降低（抗细胞凋亡），诱导髓系白血病细胞分化蛋白（Mcl-1）和Survivin水平升高，从而增强B淋巴细胞的存活。

Survivin 是一种细胞凋亡蛋白抑制剂，可抑制半胱天冬酶并阻止细胞死亡。 它在大多数癌症（包括血液癌症）中高度表达，并且与不良临床结果相关。 凋亡标志物 CD 95 (Apo-1/fas) 及其配体 CD 95 是一种死亡受体配体，介导细胞凋亡诱导以维持免疫稳态，并具有介导癌细胞凋亡诱导的能力，产生 18 千道尔顿称为 caspase-cleaved cytokeratin-18 (cCK-18) 的片段。

Oleocanthal 已显示在人类急性早幼粒细胞白血病和骨髓瘤细胞中诱导细胞毒性和细胞凋亡。 它还可能通过在不同癌细胞系中诱导溶酶体膜通透性而引起原发性坏死和细胞凋亡。

本研究的目的是考虑到油橄榄在体外的强凋亡特性，旨在研究其在真实临床环境下影响血液学和生化特征的能力；在考虑到 CLL 患者的疾病进展后，还有细胞凋亡标志物 Survivin、cCK18-（caspase 活性标志物）和 Apo1fas/CD 95。 出于这个原因，进行了一项饮食干预研究，比较了富含油橄榄的 EVOO 对 CLL 患者的抗肿瘤作用。

材料与方法

在当前的研究中，通过定量核磁共振光谱 (qNMR) 方法对从 2017-2018 季节收获的橄榄 (Olea europaea L.) 中获得的 300 个商业样品（从超过 3000 个样品的数据库中选择）进行了筛选为了确定可以满足以下标准的油： 特级初榨油的油橄榄素和油酸含量高（D1 指数），其他环环烯醚萜共轭酚类化合物 (3-8) 或游离酪醇和羟基酪醇的含量低甚至没有Oleocanthal 获自希腊科孚岛 Agios Matthaios 的“The Governor”公司提供的 Lianolia Kerkyras 品种的单品种油。 该油含有：油橄榄素 416±7 mg/Kg，油酸 284±10 mg/Kg，酪醇 < 10 mg/Kg，羟基酪醇 < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg)。 值得一提的是，除了 qNMR 分析外，羟基酪醇和酪醇含量也通过用于测量橄榄油生物酚的标准 IOC 方法测量。 选择的 EVOO 在分析后立即储存在 4 摄氏度，直到研究开始，以尽量减少化学成分可能发生的变化。

受试者 来自拉科尼亚综合医院（希腊）血液科的 21 名患者被招募参加饮食干预。 CLL 诊断由标准标准确认。 患者未经治疗，处于 Rai 0 至 II 期。

饮食干预 在试点研究开始时，在饮食干预前的第三个月和第六个月记录每位患者病史的医学检查。 饮食干预前的临床记录涉及血液学特征、生化检查，包括血脂特征、空腹血糖、肝肾功能标志物，以及有关骨髓活检、肿瘤标志物和免疫表型的数据。 还记录了药物治疗或合并症。

在试点饮食干预开始时，一组 21 名 CLL 患者饭前食用 40 毫升/天富含油橄榄素和油酸 (OC/OL) 的 EVOO，持续 6 个月，以探索饮食摄入的影响A-EVOO 对所研究的血液学、生化和分子标记物的影响。 根据先前的研究选择消耗的 EVOO OC/OL 的量。 (15)建议患者继续正常饮食；每两周通过两次 24 小时电话召回评估他们对研究方案的遵守情况。

在饮食干预开始时、3 个月后和 6 个月后收集 21 名 CLL 患者的外周血样本。 对空腹血糖、血脂谱和肝肾功能标志物进行了全血细胞计数和完整的生化测试。 使用相同的程序并在同一实验室使用生化分析仪（Olympus AU-600，Olympus，Tokyo，Japan）进行血清分析。

根据供应商的说明使用市售的酶联免疫吸附测定 (ELISA) 来测定凋亡标志物 M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Sweden)、Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) ) 和抗细胞凋亡标记 Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) 在所有研究时间点进入所有患者的血浆样本。

使用 SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. USA)，显着性水平设定为 0.05。 最初根据年龄、性别、临床、生化和分子标记对样本进行描述性分析。 当使用 Kolmogorov-Smirnov 检验检查时，发现标记在 p < 0.05 显着性水平上存在偏差。 因此，使用非参数 Mann-Whitney U 检验来找出干预组和对照组之间的差异。

使用 Friedman 非参数检验评估干预时间间隔之间的差异，然后使用 Dunn 检验进行多重比较。最后，分子标记与研究中包括的临床参数的相关性，并使用 Spearman Rho 检查。