CLL에서 높은 페놀 EVOO를 사용한 식이 중재

엑스트라 버진 올리브 오일(EVOO)은 지중해 식단의 주요 구성 요소입니다. 지방산, 스테롤, 카로티노이드, 테르페노이드, 플라보노이드, 토코페롤 및 올리브 폴리페놀을 포함하여 200개 이상의 다양한 화합물이 올리브 오일에서 검출되었습니다. 버진 올리브 오일은 주로 티로솔, 하이드록시티로솔, 올레오칸탈(OC), 올레아신(OL), 리그스트로사이드 및 올러유러핀 아글리콘 화합물에 해당하는 다양한 중요한 페놀 성분을 함유하고 있습니다. EVOO에서 분리되어 항산화, 항염증, 항암, 신경보호, 항당뇨 작용 등 다양한 생물학적 효과를 나타내어 더욱 과학적인 관심을 받고 있습니다.

서양 국가에서 가장 흔히 진단되는 성인 백혈병인 만성 림프구성 백혈병(CLL)은 모든 백혈병의 4건 중 약 1건을 담당합니다. 골수, 말초 혈액, 림프 조직 및 비장에 단클론성 B 세포가 축적되는 것이 특징인 반면, 종종 무증상이고 발달 속도가 느립니다. CLL 환자에게 항상 즉각적인 치료가 필요한 것은 아닙니다. 그러나 증상이 나타나는 환자는 임상 병기에 따라 대략적인 중앙 생존 범위가 18개월에서 6년 사이입니다. CLL 진단 기준은 최소 3개월 동안 말초 혈액에서 단클론 B 림프구 ≥5000 림프구/ml, 전림프구 ≤55%, 분화 클러스터(CD)5 및 B 세포 표면 항원 CD 19의 동시 발현, CD 20 및 CD 23, 낮은 수준의 CD 20, CD 79b 및 낮은 표면 면역글로불린(sIg) 발현, 및 카파 또는 람다 경쇄 제한. 예후를 추정하기 위한 표준 임상 절차는 Rai 등 및 Binet 등이 개발한 임상 병기 결정 시스템입니다.

조혈에서 세포 사멸 수준은 전구 세포 및 줄기 세포의 증식 조절을 담당하는 메커니즘에 대한 정보를 제공할 수 있습니다. 아폽토시스의 기능 장애는 백혈병과 관련이 있는 것으로 밝혀졌습니다. CLL 환자의 골수 전구 세포에서 Apo-1/fas(CD 95) 세포사멸 마커의 발현 증가와 이에 상응하는 세포사멸 B 세포 림프종 2(BCL-2) 억제제의 감소가 설명되었습니다. 최근 연구에 따르면 CLL 환자의 림프구 증가는 CLL 세포의 증식과 세포사멸 사이의 균형이 흐트러졌기 때문일 수 있는 반면, 세포사멸 관련 단백질 발현의 변화는 CLL의 모든 단계에서 Binet이 인식되는 것으로 나타났습니다. p38 수준이 감소되고(세포사멸에 대한 저항성) 유도된 골수성 백혈병 세포 분화 단백질(Mcl-1) 및 Survivin 수준이 상승하여 B 림프구의 생존을 향상시킵니다.

Survivin은 caspases를 억제하고 세포 사멸을 차단하는 apoptosis의 단백질 억제제입니다. 그것은 혈액암을 포함한 대부분의 암에서 높게 발현되며 불량한 임상 결과와 관련이 있습니다. 아폽토시스 마커 CD 95(Apo-1/fas) 및 그 리간드인 CD 95는 면역 항상성을 유지하기 위해 아폽토시스 유도를 매개하는 사멸 수용체 리간드이며, 암세포에서 아폽토시스 유도를 매개할 수 있는 능력을 가지고 있어 18kdalton을 생성합니다. caspase-cleaved cytokeratin-18 (cCK-18)이라고 불리는 단편.

올레오칸탈은 인간 급성 전골수성 백혈병 및 골수종 세포에서 시험관 내에서 세포독성 및 세포사멸을 유도하는 것으로 나타났습니다. 또한 다른 암 세포주에서 리소좀 막 투과성을 유도하여 원발성 괴사 및 세포 사멸을 유발할 수 있습니다.

시험관 내에서 올레오칸탈의 강력한 세포사멸 특성을 고려한 이 연구의 목적은 실제 임상 환경에서 혈액학적 및 생화학적 프로필에 영향을 미치는 능력을 조사하는 것이었습니다. 또한 질병의 진행을 고려한 후 CLL 환자의 세포 사멸 마커 Survivin, cCK18-(카스파제 활성 마커) 및 Apo1fas/CD 95. 이러한 이유로 CLL 환자에서 oleocanthal이 풍부한 EVOO의 항종양 효과를 비교하는 식이 중재 연구가 수행되었습니다.

재료 및 방법

현재 연구에서는 2017-2018 시즌에 수확된 올리브(Olea europaea L.)에서 얻은 300개의 상업용 샘플(>3000 샘플 데이터베이스 중에서 선택)의 스크리닝을 정량적 NMR 분광법(qNMR) 방법으로 수행했습니다. 다음 기준을 충족할 수 있는 오일을 식별하기 위해 엑스트라 버진 오일은 높은 올레오칸탈 및 올레아신 함량(D1 지수)을 가지며 다른 세코이리도이드 접합 페놀(3-8) 또는 유리 티로솔 및 하이드록시티로솔의 함량이 낮거나 전혀 없습니다. 올레오칸탈은 그리스 코르푸의 아기오스 마타이오스(Agios Matthaios)로부터 "더 거버너" 컴퍼니("The Governor" Company)에 의해 제공되는 리아놀리아 케르키라스 품종의 단일 변종 오일로부터 입수하였다. 이 오일은 올레오칸탈 416±7mg/Kg, 올레아신 284±10mg/Kg, 티로솔 < 10mg/Kg, 하이드록시티로솔 < 10mg/Kg(D1 = 700mg/Kg)을 함유하고 있습니다. qNMR 분석과는 별개로 hydroxytyrosol 및 tyrosol 함량도 올리브 오일 바이오페놀 측정을 위한 표준 IOC 방법으로 측정되었음을 언급해야 합니다. 선택된 EVOO는 분석 직후와 연구 기간이 시작될 때까지 화학적 조성의 가능한 변경을 최소화하기 위해 섭씨 4도에서 보관되었습니다.

피험자 Lakonia 종합 병원(그리스)의 혈액 클리닉의 21명의 환자가 식이 중재에 참여하도록 등록되었습니다. CLL 진단은 표준 기준으로 확인되었습니다. Rai 단계 0에서 II까지 환자들은 치료받지 않았습니다.

식이 개입 파일럿 연구 시작 시 각 환자의 병력에 대한 건강 검진을 식이 개입 전 3개월 및 6개월 동안 기록했습니다. 식이 중재 이전의 임상 기록은 혈액학적 프로필, 지질 프로필, 공복 혈당, 간 및 신장 기능 마커를 포함한 생화학적 검사뿐만 아니라 혈액 골수 생검, 신생물 마커 및 면역 표현형에 관한 데이터와 관련됩니다. 약물 치료 또는 합병증도 기록되었습니다.

파일럿 식이 중재 시작 시 CLL 환자 21명으로 구성된 그룹이 6개월 동안 올레칸탈 및 올레아신(OC/OL)이 풍부한 EVOO 40ml/일을 식사 전에 섭취하여 식이 소비의 효과를 조사했습니다. 연구된 혈액학, 생화학 및 분자 마커에 대한 A-EVOO의 소비된 EVOO OC/OL의 양은 이전 연구에 따라 선택되었습니다. (15) 환자에게 규칙적인 식사를 계속하도록 조언했습니다. 그들의 연구 프로토콜 준수 여부는 2주마다 2회의 24시간 전화 리콜로 평가되었습니다.

21명의 CLL 환자로부터 말초 혈액 샘플을 식이 개입 시작 후 시작, 3개월 후 및 6개월 후에 수집했습니다. 공복 혈당, 혈중 지질 프로필, 간 및 신장 기능 지표에 대해 전혈구 수 및 전체 생화학 검사를 수행했습니다. 혈청 분석은 생화학적 분석기(Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan)를 사용하여 동일한 실험실에서 동일한 절차를 사용하여 수행되었습니다.

시중에서 구할 수 있는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 공급업체의 지침에 따라 사용하여 세포사멸 마커 M30 Apoptosense-cCK18(VLVbio Hästholmsvägen, Sweden), Apo-1/Fas/CD 95(Novus Biologicals, Colorado USA)를 분석했습니다. ) 및 항아폽토시스 마커 Survivin(OriGene Technologies, Inc USA)을 연구된 모든 시점에서 모든 환자의 혈장 샘플에 넣었다.

통계 분석은 SPSS v.24(SPSS Inc., Chicago, IL. USA), 유의수준은 0.05로 설정하였다. 처음에는 연령, 성별, 임상, 생화학적 및 분자 마커 측면에서 샘플의 기술 분석이 수행되었습니다. 마커는 Kolmogorov-Smirnov 테스트를 사용하여 확인할 때 p < 0.05 유의 수준에서 왜곡된 것으로 나타났습니다. 따라서 비모수적 Mann-Whitney U 테스트를 사용하여 중재와 대조군 간의 차이점을 알아냈습니다.

개입 시간 간격의 차이는 Friedman 비모수 검정에 이어 Dunn의 다중 비교 검정으로 평가했습니다. 마지막으로 분자 마커와 연구에 포함된 임상 매개 변수의 상관 관계를 Spearman Rho로 확인했습니다.