Diettintervensjon med høy fenolisk EVOO i CLL

Ekstra virgin olivenolje (EVOO) er hovedkomponenten i middelhavsdietten. Mer enn 200 forskjellige kjemiske forbindelser er påvist i olivenolje, inkludert fettsyrer, steroler, karotenoider, terpenoider, flavonoider, tokoferoler og olivenpolyfenoler. Jomfruolivenolje inneholder en rekke viktige fenoliske komponenter, hovedsakelig tilsvarende forbindelsene tyrosol, hydroksytyrosol, oleocanthal (OC), oleacin (OL), ligstrosid og oleuropein-aglykoner. har blitt isolert fra EVOO, presenterer et bredt spekter av biologiske effekter, inkludert antioksidanter, anti-inflammatoriske, antikreft, nevrobeskyttende og antidiabetiske aktiviteter og har av denne grunn tiltrukket seg mer vitenskapelig oppmerksomhet.

Kronisk lymfatisk leukemi (KLL), den hyppigst diagnostiserte voksenleukemien i vestlige land, er ansvarlig for omtrent 1 av 4 tilfeller av alle leukemier. Den kjennetegnes ved akkumulering av monoklonale B-celler i benmarg, perifert blod, lymfevev og milt, mens den ofte er asymptomatisk og langsom i utviklingen. Pasienter med KLL trenger ikke alltid umiddelbar behandling. Imidlertid har pasienter som viser symptomer et omtrentlig median overlevelsesområde fra 18 måneder til 6 år avhengig av det kliniske stadiet. Kriterier for diagnostisering av KLL er monoklonale B-lymfocytter ≥5000 lymfocytter/ml i det perifere blodet i minst 3 måneder, prolymfocytter ≤55 %, co-ekspresjon av claster of differentiation (CD)5 og B-celleoverflateantigener CD 19, CD 20 og CD 23, lave nivåer av CD 20, CD 79b og lav ekspresjon av overflateimmunoglobuliner (sIg), og kappa eller lambda lettkjederestriksjon. Standard kliniske prosedyrer for å estimere prognose er de kliniske stadiesystemene utviklet av Rai et al og Binet et al.

Nivået av apoptose i hematopoiesis kan gi informasjon om mekanismen som er ansvarlig for reguleringen av progenitor- og stamcelleproliferasjon. Dysfunksjonen til apoptose har funnet å være assosiert med leukemi. En økning i ekspresjonen av Apo-1/fas (CD 95) apoptotisk markør i myeloide stamceller hos CLL-pasienter og en tilsvarende reduksjon i den apoptotiske B-celle lymfom 2 (BCL-2) hemmeren er beskrevet. Nyere studier viste også at økningen i KLL-pasienters lymfocytter kan skyldes den forstyrrede balansen mellom spredning og apoptose av CLL-celler, mens endringene i apoptoserelatert proteinuttrykk gjenkjennes under alle stadier av Binet i KLL. P38-nivåene reduseres (motstand mot apoptose) og indusert myeloid leukemi-celledifferensieringsprotein (Mcl-1) og Survivin-nivåer er forhøyet, for å øke overlevelsen av B-lymfocytter.

Survivin er en proteinhemmer av apoptose som hemmer kaspaser og blokkerer celledød. Det er sterkt uttrykt i de fleste kreftformer, inkludert hematologiske, og er assosiert med et dårlig klinisk resultat. Den apoptotiske markøren CD 95 (Apo-1/fas) og dens ligand, CD 95 er en dødsreseptorligand som medierer apoptoseinduksjon for å opprettholde immunhomeostase og har kapasitet til å mediere apoptoseinduksjon i kreftceller, og genererer en 18-kilodalton fragment kalt caspase-spaltet cytokeratin-18 (cCK-18).

Oleocanthal har vist seg å indusere cytotoksisitet og apoptose in vitro ved human akutt promyelocytisk leukemi og i myelomceller. Det kan også forårsake primær nekrose og cellulær apoptose ved å indusere lysosomal membranpermeabilitet i forskjellige kreftcellelinjer.

Målet med denne studien, tatt i betraktning de sterke apoptotiske egenskapene til oleocanthal in vitro, var å undersøke dens evne, under reelle kliniske omgivelser, til å påvirke den hematologiske og biokjemiske profilen; også de cellulære apoptotiske markørene Survivin, cCK18- (kaspaseaktivitetsmarkør) og Apo1fas/CD 95 hos CLL-pasienter etter å ha tatt hensyn til utviklingen av sykdommen deres. Av denne grunn ble det utført en diettintervensjonsstudie som sammenlignet de antineoplastiske effektene av en oleocanthal-rik EVOO hos CLL-pasienter.

Materialer og metoder

I den nåværende studien ble en screening av 300 kommersielle prøver (valgt fra en database med >3000 prøver), hentet fra oliven (Olea europaea L.) høstet i sesongen 2017-2018, utført ved hjelp av kvantitativ NMR-spektroskopi (qNMR)-metoden i for å identifisere oljer som kan oppfylle følgende kriterier: Den ekstra virgin oljen vil ha høyt oleocanthal- og oleacininnhold (D1-indeks) og lavt eller til og med intet innhold i andre secoiridoid-konjugerte fenoler (3-8) eller fri tyrosol og hydroksytyrosol, spesielt olje rik på Oleocanthal ble oppnådd fra Monovarietal-olje av Lianolia Kerkyras-varianten levert av "The Governor" Company fra Agios Matthaios, Korfu, Hellas. Denne oljen inneholdt: Oleocanthal 416±7 mg/Kg, oleacin 284±10 mg/Kg, Tyrosol < 10 mg/Kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg). Det bør nevnes at bortsett fra qNMR-analysen, ble hydroksytyrosol- og tyrosolinnholdet også målt med standard IOC-metoden for måling av olivenoljebiofenoler. Utvalgte EVOO umiddelbart etter deres analyse og frem til begynnelsen av studieperioden ble lagret ved 4 grader for å minimere mulige endringer i kjemisk sammensetning.

Forsøkspersoner 21 pasienter fra den hematologiske klinikken ved det generelle sykehuset i Lakonia (Hellas) ble registrert for å delta i diettintervensjonen. KLL-diagnose ble bekreftet av standardkriterier. Pasientene var ubehandlet, i Rai stadium 0 til II.

Diettintervensjon Ved begynnelsen av pilotstudien ble medisinske undersøkelser av hver pasients historie registrert i tredje og sjette måned før diettintervensjonen. Den kliniske journalen før diettintervensjonen gjelder den hematologiske profilen, biokjemiske undersøkelser inkludert lipidemisk profil, fastende glukose, lever- og nyrefunksjonsmarkører, samt data om blodmargsbiopsi, neoplastiske markører og immunfenotype. Medikamentell behandling eller komorbiditeter ble også registrert.

Ved starten av pilotdiettintervensjonen konsumerte en gruppe på 21 pasienter med KLL før måltidene, 40 ml/dag av EVOO rik på olecanthal og oleacin (OC/OL) i 6 måneder, for å utforske effekten av kostinntaket. av A-EVOO på de studerte hematologiske, biokjemiske og molekylære markørene. Mengden av konsumert EVOO OC/OL ble valgt i henhold til en tidligere studie. (15) Pasienter ble rådet til å fortsette sitt vanlige kosthold; deres overholdelse av studieprotokollen ble vurdert ved to 24-timers telefontilbakekallinger annenhver uke.

Perifere blodprøver fra de 21 pasientene med KLL ble samlet ved starten, etter 3 måneder og etter 6 måneder fra starten av kosttilskuddet. Fullblodtelling og fullstendige biokjemiske tester ble utført for fastende glukose, blodlipidprofil og markører for lever- og nyrefunksjon. Serumanalyser ble utført ved bruk av samme prosedyre og på samme laboratorium med bruk av en biokjemisk analysator (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan).

En kommersielt tilgjengelig enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) ble brukt i henhold til instruksjonene fra leverandøren for å analysere de apoptotiske markørene M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Sverige), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA). ) og den antiapoptotiske markøren Survivin (OriGene Technologies, Inc. USA) i plasmaprøver av alle pasientene på alle de studerte tidspunktene.

Statistisk analyse ble utført ved bruk av SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. USA) og signifikansnivået ble satt til 0,05. Innledningsvis ble det utført en beskrivende analyse av prøven med hensyn til alder, kjønn, kliniske, biokjemiske og molekylære markører. Markørene ble funnet å være skjeve ved p < 0,05 signifikansnivå når de ble kontrollert ved bruk av Kolmogorov-Smirnov-testen. Derfor ble ikke-parametrisk Mann-Whitney U-test brukt for å finne ut forskjellene mellom intervensjonen og kontrollgruppen.

Forskjellene mellom intervensjonens tidsintervaller ble vurdert med Friedman ikke-parametrisk test etterfulgt av Dunns test for multippel sammenligning. Til slutt ble korrelasjonene til de molekylære markørene med de kliniske parameterne inkludert i studien og ble sjekket med Spearman Rho.