Diætintervention med høj phenolisk EVOO i CLL

Ekstra jomfru olivenolie (EVOO) er hovedbestanddelen af ​​middelhavskosten. Mere end 200 forskellige kemiske forbindelser er blevet påvist i olivenolie, herunder fedtsyrer, steroler, carotenoider, terpenoider, flavonoider, tocopheroler og olivenpolyfenoler. Jomfruolivenolie indeholder en række vigtige phenolkomponenter, hovedsageligt svarende til forbindelserne tyrosol, hydroxytyrosol, oleocanthal (OC), oleacin (OL), ligstrosid og oleuropein-aglyconer. Blandt disse olivenphenoler, oleocanthal, en dialdehydisk form af ligstroside-aglyconmethyl, som er blevet isoleret fra EVOO, præsenterer en bred vifte af biologiske effekter, herunder antioxidant, anti-inflammatorisk, anticancer, neurobeskyttende og antidiabetiske aktiviteter og har af denne grund tiltrukket sig mere videnskabelig opmærksomhed.

Kronisk lymfatisk leukæmi (CLL), den hyppigst diagnosticerede voksenleukæmi i vestlige lande, er ansvarlig for omkring 1 ud af 4 tilfælde af alle leukæmier. Det er karakteriseret ved ophobning af monoklonale B-celler i knoglemarv, perifert blod, lymfevæv og milt, mens det ofte er asymptomatisk og langsomt i sin udvikling. Patienter med CLL behøver ikke altid øjeblikkelig behandling. Patienter, der viser symptomer, har dog en omtrentlig median overlevelsesintervall fra 18 måneder til 6 år afhængigt af det kliniske stadium. Kriterier for diagnosticering af CLL er monoklonale B-lymfocytter ≥5000 lymfocytter/ml i det perifere blod i mindst 3 måneder, prolymfocytter ≤55%, co-ekspression af claster of differentiation (CD)5 og B-celle overfladeantigener CD 19, CD 20 og CD 23, lave niveauer af CD 20, CD 79b og lav ekspression af overfladeimmunoglobuliner (sIg) og kappa eller lambda let kæde restriktion. De kliniske standardprocedurer til at estimere prognose er de kliniske iscenesættelsessystemer udviklet af Rai et al og Binet et al.

Niveauet af apoptose i hæmatopoiesis kan give information om den mekanisme, der er ansvarlig for reguleringen af ​​progenitor- og stamcellers proliferation. Dysfunktionen af ​​apoptose har vist sig at være forbundet med leukæmi. En stigning i ekspressionen af ​​Apo-1/fas (CD 95) apoptotisk markør i myeloide progenitorceller hos CLL-patienter og et tilsvarende fald i den apoptotiske B-celle lymfom 2 (BCL-2) hæmmer er blevet beskrevet. Nylige undersøgelser viste også, at stigningen i CLL-patienters lymfocytter kan skyldes den forstyrrede balance mellem proliferation og apoptose af CLL-celler, mens ændringerne i apoptose-relateret proteinekspression genkendes under alle stadier af Binet i CLL. P38-niveauerne er reduceret (resistens mod apoptose), og induceret myeloid leukæmi-celledifferentieringsprotein (Mcl-1) og Survivin-niveauer er forhøjet for at øge overlevelsen af ​​B-lymfocytter.

Survivin er en proteinhæmmer af apoptose, som hæmmer caspaser og blokerer celledød. Det er stærkt udtrykt i de fleste kræftformer, herunder hæmatologiske, og er forbundet med et dårligt klinisk resultat. Den apoptotiske markør CD 95 (Apo-1/fas) og dens ligand, CD 95 er en dødsreceptorligand, der medierer apoptoseinduktion for at opretholde immunhomeostase og har kapacitet til at mediere apoptoseinduktion i cancerceller, hvilket genererer en 18-kilodalton fragment betegnet caspase-spaltet cytokeratin-18 (cCK-18).

Oleocanthal har vist sig at inducere cytotoksicitet og apoptose in vitro i human akut promyelocytisk leukæmi og i myelomceller. Det kan også forårsage primær nekrose og cellulær apoptose ved at inducere lysosomal membranpermeabilitet i forskellige cancercellelinjer.

Formålet med denne undersøgelse, under hensyntagen til de stærke apoptotiske egenskaber af oleocanthal in vitro, var at undersøge dets evne til, under reelle kliniske omgivelser, at påvirke den hæmatologiske og biokemiske profil; også de cellulære apoptotiske markører Survivin, cCK18- (caspaseaktivitetsmarkør) og Apo1fas/CD 95 hos CLL-patienter efter at have taget hensyn til progressionen af ​​deres sygdom. Af denne grund blev der gennemført en diætinterventionsundersøgelse, der sammenlignede de antineoplastiske virkninger af en oleocanthal-rig EVOO hos CLL-patienter.

Materialer og metoder

I den aktuelle undersøgelse blev en screening af 300 kommercielle prøver (udvalgt blandt en database på >3000 prøver), opnået fra oliven (Olea europaea L.) høstet i sæsonen 2017-2018, udført ved hjælp af kvantitativ NMR-spektroskopi (qNMR) metode i for at identificere olier, som kunne opfylde følgende kriterier: Den ekstra jomfruolie ville have højt indhold af oleocanthal og oleacin (D1-indeks) og lavt eller endda intet indhold i andre secoiridoid-konjugerede phenoler (3-8) eller fri tyrosol og hydroxytyrosol Specifikt olie rig på Oleocanthal blev opnået fra Monovarietal olie af Lianolia Kerkyras sort leveret af "The Governor" Company fra Agios Matthaios, Corfu, Grækenland. Denne olie indeholdt: Oleocanthal 416±7 mg/Kg, oleacin 284±10 mg/Kg, Tyrosol < 10 mg/Kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg). Det skal nævnes, at bortset fra qNMR-analysen blev hydroxytyrosol- og tyrosolindholdet også målt ved standard IOC-metoden til måling af olivenoliebiophenoler. Udvalgte EVOO umiddelbart efter deres analyse og indtil begyndelsen af ​​undersøgelsesperioden blev opbevaret ved 4 grader Celsius for at minimere mulige ændringer i den kemiske sammensætning.

Forsøgspersoner Enogtyve patienter fra hæmatologisk klinik på det generelle hospital i Lakonia (Grækenland) blev tilmeldt til at deltage i diætinterventionen. CLL-diagnose blev bekræftet af standardkriterier. Patienterne var ubehandlede i Rai-stadie 0 til II.

Diætintervention Ved begyndelsen af ​​pilotundersøgelsen blev medicinske undersøgelser af hver patients historie registreret i tredje og sjette måned før diætinterventionen. Den kliniske journal før diætinterventionen vedrører den hæmatologiske profil, biokemiske undersøgelser, herunder lipidemisk profil, fastende glukose, lever- og nyrefunktionsmarkører, samt data vedrørende blodmarvsbiopsi, neoplastiske markører og immunfænotype. Lægemiddelbehandling eller komorbiditeter blev også registreret.

I begyndelsen af ​​pilotdiætinterventionen indtog en gruppe på 21 patienter med CLL før deres måltider, 40 ml/dag af EVOO rig på olecanthal og oleacin (OC/OL) i 6 måneder for at udforske effekten af ​​kostens indtagelse. af A-EVOO om de undersøgte hæmatologiske, biokemiske og molekylære markører. Mængden af ​​den forbrugte EVOO OC/OL blev valgt ifølge en tidligere undersøgelse. (15) Patienterne blev rådet til at fortsætte deres almindelige kost; deres overholdelse af undersøgelsesprotokollen blev vurderet ved to 24-timers telefontilbagekaldelser hver anden uge.

Perifere blodprøver fra de 21 patienter med CLL blev indsamlet ved begyndelsen, efter 3 måneder og efter 6 måneder fra begyndelsen af ​​diætinterventionen. Der blev udført fuldblodtælling og komplette biokemiske tests for fastende glukose, blodlipidprofil og markører for lever- og nyrefunktion. Serumanalyser blev udført ved hjælp af samme procedure og på samme laboratorium med brug af en biokemisk analysator (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan).

Et kommercielt tilgængeligt enzymbundet immunosorbent-assay (ELISA) blev brugt i henhold til leverandørens instruktioner til at analysere de apoptotiske markører M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Sverige), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA). ) og den antiapoptotiske markør Survivin (OriGene Technologies, Inc. USA) i plasmaprøver fra alle patienter på alle de undersøgte tidspunkter.

Statistisk analyse blev udført under anvendelse af SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. USA) og signifikansniveauet blev sat til 0,05. Indledningsvis blev der udført en beskrivende analyse af prøven med hensyn til alder, køn, kliniske, biokemiske og molekylære markører. Markørerne viste sig at være skæve ved p < 0,05 signifikansniveau, når de blev kontrolleret ved hjælp af Kolmogorov-Smirnov-testen. Derfor blev den ikke-parametriske Mann-Whitney U-test brugt til at finde ud af forskellene mellem interventionen og kontrolgruppen.

Forskellene mellem tidsintervallerne for interventionen blev vurderet med Friedman ikke-parametrisk test efterfulgt af Dunns test for multipel sammenligning. Endelig blev korrelationerne mellem de molekylære markører med de kliniske parametre inkluderet i undersøgelsen og blev kontrolleret med Spearman Rho.