Kostintervention med hög fenolisk EVOO vid KLL

Extra virgin olivolja (EVOO) är huvudkomponenten i medelhavskosten. Mer än 200 olika kemiska föreningar har upptäckts i olivolja, inklusive fettsyror, steroler, karotenoider, terpenoider, flavonoider, tokoferoler och olivpolyfenoler. Jungfruolja innehåller en mängd viktiga fenoliska komponenter, huvudsakligen motsvarande föreningarna tyrosol, hydroxityrosol, oleocanthal (OC), oleacin (OL), ligstrosid och oleuropeinaglykoner. Bland dessa olivfenoler, oleocanthal, en dialdehydform av ligstrosid-aglykonmetyl, vilken har isolerats från EVOO, presenterar ett brett utbud av biologiska effekter inklusive antioxidant, antiinflammatorisk, anticancer, neuroprotektiva och antidiabetiska aktiviteter och har av denna anledning väckt mer vetenskaplig uppmärksamhet.

Kronisk lymfatisk leukemi (KLL), den vanligaste diagnostiserade vuxenleukemi i västländer, är ansvarig för cirka 1 av 4 fall av alla leukemier. Det kännetecknas av ackumulering av monoklonala B-celler i benmärg, perifert blod, lymfvävnader och mjälte, medan det ofta är asymptomatiskt och långsamt i sin utveckling. Patienter med KLL behöver inte alltid omedelbar behandling. Patienter som uppträder symtom har dock ett ungefärligt medianöverlevnadsintervall från 18 månader till 6 år beroende på det kliniska skedet. Kriterier för diagnos av KLL är monoklonala B-lymfocyter ≥5 000 lymfocyter/ml i det perifera blodet i minst 3 månader, prolymfocyter ≤55 %, samuttryck av differentieringsklaster (CD)5 och B-cellsytantigener CD 19, CD 20 och CD 23, låga nivåer av CD 20, CD 79b och lågt uttryck av ytimmunoglobuliner (sIg), och kappa eller lambda lätt kedja restriktion. De vanliga kliniska procedurerna för att uppskatta prognos är de kliniska stadieindelningssystemen utvecklade av Rai et al och Binet et al.

Nivån av apoptos i hematopoiesis kan ge information om mekanismen som är ansvarig för regleringen av progenitor- och stamcellsproliferation. Dysfunktionen av apoptos har visat sig vara associerad med leukemi. En ökning av uttrycket av Apo-1/fas (CD 95) apoptotisk markör i myeloida progenitorceller hos KLL-patienter och en motsvarande minskning av den apoptotiska B-cellslymfom 2 (BCL-2)-hämmaren har beskrivits. Nyligen genomförda studier visade också att ökningen av KLL-patienters lymfocyter kan bero på den störda balansen mellan proliferation och apoptos av KLL-celler medan förändringarna i apoptosrelaterat proteinuttryck känns igen under alla stadier av Binet i KLL. P38-nivåerna reduceras (resistens mot apoptos) och inducerat myeloid leukemicelldifferentieringsprotein (Mcl-1) och Survivin-nivåerna är förhöjda, för att förbättra överlevnaden av B-lymfocyter.

Survivin är en proteinhämmare av apoptos som hämmar kaspaser och blockerar celldöd. Det är starkt uttryckt i de flesta cancerformer, inklusive hematologiska, och är associerat med ett dåligt kliniskt resultat. Den apoptotiska markören CD 95 (Apo-1/fas) och dess ligand, CD 95 är en dödsreceptorligand som förmedlar apoptosinduktion för att upprätthålla immunhomeostas och har kapacitet att förmedla apoptosinduktion i cancerceller, vilket genererar en 18-kilodalton fragment benämnt kaspasklyvd cytokeratin-18 (cCK-18).

Oleocanthal har visat sig inducera cytotoxicitet och apoptos in vitro vid human akut promyelocytisk leukemi och i myelomceller. Det kan också orsaka primär nekros och cellulär apoptos genom att inducera lysosomal membranpermeabilitet i olika cancercellinjer.

Syftet med denna studie med hänsyn till de starka apoptotiska egenskaperna hos oleocanthal in vitro, var att undersöka dess förmåga, under verkliga kliniska miljöer, att påverka den hematologiska och biokemiska profilen; även de cellulära apoptotiska markörerna Survivin, cCK18- (kaspasaktivitetsmarkör) och Apo1fas/CD 95 hos KLL-patienter efter att ha tagit hänsyn till progressionen av deras sjukdom. Av denna anledning genomfördes en kostinterventionsstudie som jämförde de antineoplastiska effekterna av en oleokanthalrik EVOO hos KLL-patienter.

Material och metoder

I den aktuella studien utfördes en screening av 300 kommersiella prover (utvalda från en databas med >3000 prover), erhållna från oliver (Olea europaea L.) skördade under säsongen 2017-2018, med metoden kvantitativ NMR-spektroskopi (qNMR) i för att identifiera oljor som skulle kunna uppfylla följande kriterier: Extravirgin olja skulle ha högt innehåll av oleocanthal och oleacin (D1-index) och lågt eller till och med inget innehåll i andra sekoiridoidkonjugerade fenoler (3-8) eller fri tyrosol och hydroxityrosol Specifikt olja rik på Oleocanthal erhölls från Monovarietal olja av Lianolia Kerkyras sort tillhandahållen av "The Governor" Company från Agios Matthaios, Korfu, Grekland. Denna olja innehöll: Oleocanthal 416±7 mg/Kg, oleacin 284±10 mg/Kg, Tyrosol < 10 mg/Kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/Kg (Dl = 700 mg/Kg). Det bör nämnas att förutom qNMR-analysen, mättes även hydroxityrosol- och tyrosolhalten med standard IOC-metoden för mätning av olivoljebiofenoler. Utvalda EVOO omedelbart efter analysen och fram till början av studieperioden lagrades vid 4 grader Celsius för att minimera eventuella förändringar i kemisk sammansättning.

Försökspersoner Tjugoen patienter från den hematologiska kliniken på Lakoniens allmänna sjukhus (Grekland) registrerades för att delta i kostinterventionen. KLL-diagnos bekräftades av standardkriterier. Patienterna var obehandlade, i Rai stadium 0 till II.

Dietintervention I början av pilotstudien registrerades medicinska undersökningar av varje patients historia under tredje och sjätte månaden före dietinterventionen. Den kliniska journalen före dietinterventionen gäller den hematologiska profilen, biokemiska undersökningar inklusive lipidemisk profil, fasteglukos, lever- och njurfunktionsmarkörer, samt data om blodmärgsbiopsi, neoplastiska markörer och immunfenotyp. Läkemedelsbehandling eller samsjukligheter registrerades också.

I början av pilotdietinterventionen konsumerade en grupp på 21 patienter med KLL före sina måltider, 40 ml/dag av EVOO rik på olecanthal och oleacin (OC/OL) under 6 månader, för att undersöka effekten av dietkonsumtionen av A-EVOO om de studerade hematologiska, biokemiska och molekylära markörerna. Mängden förbrukad EVOO OC/OL valdes enligt en tidigare studie. (15) Patienterna rekommenderades att fortsätta sin vanliga kost; deras efterlevnad av studieprotokollet bedömdes genom två 24-timmars telefonåterkallelser varannan vecka.

Perifera blodprover från de 21 patienterna med KLL samlades in i början, efter 3 månader och efter 6 månader från början av kostinterventionen. Helblodsräkning och fullständiga biokemiska tester utfördes för fasteglukos, blodlipidprofil och markörer för lever- och njurfunktion. Serumanalyser utfördes med samma procedur och vid samma labb med användning av en biokemisk analysator (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan).

En kommersiellt tillgänglig enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) användes enligt instruktionerna från leverantören för att analysera de apoptotiska markörerna M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Sverige), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) ) och den antiapoptotiska markören Survivin (OriGene Technologies, Inc. USA) i plasmaprover från alla patienter vid alla studerade tidpunkter.

Statistisk analys utfördes med användning av SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. USA) och signifikansnivån sattes till 0,05. Inledningsvis gjordes en beskrivande analys av provet med avseende på ålder, kön, kliniska, biokemiska och molekylära markörer. Markörerna visade sig vara skeva vid p < 0,05 signifikansnivå när de kontrollerades med Kolmogorov-Smirnov-testet. Därför användes icke-parametriskt Mann-Whitney U-test för att ta reda på skillnaderna mellan interventionen och kontrollgruppen.

Skillnaderna mellan interventionens tidsintervall bedömdes med Friedmans icke-parametriska test följt av Dunns test för multipel jämförelse. Slutligen kontrollerades korrelationerna mellan de molekylära markörerna och de kliniska parametrarna som ingick i studien och kontrollerades med Spearman Rho.