Dietní intervence s vysokým obsahem fenolů EVOO u CLL

Extra panenský olivový olej (EVOO) je hlavní složkou středomořské stravy. V olivovém oleji bylo zjištěno více než 200 různých chemických sloučenin, včetně mastných kyselin, sterolů, karotenoidů, terpenoidů, flavonoidů, tokoferolů a olivových polyfenolů. Panenský olivový olej obsahuje řadu důležitých fenolických složek, které odpovídají především sloučeninám tyrosol, hydroxytyrosol, oleocanthal (OC), oleacin (OL), ligstrosid a oleuropein aglykony. Mezi tyto olivové fenoly patří oleocanthal, dialdehydová forma dikarboxymethyl ligstrosidu aglykonu byl izolován z EVOO, vykazuje širokou škálu biologických účinků včetně antioxidačních, protizánětlivých, protirakovinných, neuroprotektivních a antidiabetických aktivit a z tohoto důvodu přitahuje více vědecké pozornosti.

Chronická lymfocytární leukémie (CLL), nejčastěji diagnostikovaná leukémie dospělých v západních zemích, je zodpovědná za přibližně 1 ze 4 případů všech leukémií. Je charakterizována akumulací monoklonálních B-buněk v kostní dřeni, periferní krvi, lymfatických tkáních a slezině, přičemž je často asymptomatická a pomalý ve svém vývoji. Pacienti s CLL ne vždy vyžadují okamžitou léčbu. Avšak pacienti, u kterých se objeví symptomy, mají přibližný medián přežití v rozmezí od 18 měsíců do 6 let v závislosti na klinickém stadiu. Kritéria pro diagnostiku CLL jsou monoklonální B lymfocyty ≥ 5000 lymfocytů/ml v periferní krvi po dobu alespoň 3 měsíců, prolymfocyty ≤ 55 %, koexprese klastru diferenciace (CD)5 a povrchových antigenů B lymfocytů CD 19, CD 20 a CD 23, nízké hladiny CD 20, CD 79b a nízká exprese povrchových imunoglobulinů (sIg) a omezení lehkého řetězce kappa nebo lambda. Standardní klinické postupy pro odhad prognózy jsou systémy klinického stagingu vyvinuté Rai et al a Binet et al.

Úroveň apoptózy v hematopoéze může poskytnout informaci o mechanismu, který je zodpovědný za regulaci proliferace progenitorových a kmenových buněk. Bylo zjištěno, že dysfunkce apoptózy je spojena s leukémií. Bylo popsáno zvýšení exprese apoptotického markeru Apo-1/fas (CD 95) v myeloidních progenitorových buňkách u pacientů s CLL a odpovídající snížení inhibitoru apoptotického B-buněčného lymfomu 2 (BCL-2). Nedávné studie také ukázaly, že nárůst lymfocytů pacientů s CLL může být způsoben narušenou rovnováhou mezi proliferací a apoptózou buněk CLL, zatímco změny v expresi proteinů související s apoptózou jsou rozpoznány během všech stádií Binetu u CLL. Hladiny p38 jsou sníženy (odolnost vůči apoptóze) a hladiny diferenciačního proteinu indukovaných myeloidních leukemických buněk (Mcl-1) a survivinu jsou zvýšené, aby se zvýšilo přežití B lymfocytů.

Survivin je proteinový inhibitor apoptózy, který inhibuje kaspázy a blokuje buněčnou smrt. Je vysoce exprimován u většiny rakovin, včetně hematologických, a je spojen se špatným klinickým výsledkem. Apoptotický marker CD 95 (Apo-1/fas) a jeho ligand CD 95 je ligand receptoru smrti, který zprostředkovává indukci apoptózy za účelem udržení imunitní homeostázy a má kapacitu zprostředkovat indukci apoptózy v rakovinných buňkách, generující 18 kilodaltonů. fragment nazvaný kaspázou štěpený cytokeratin-18 (cCK-18).

Bylo prokázáno, že oleocanthal indukuje cytotoxicitu a apoptózu in vitro u lidské akutní promyelocytární leukémie a myelomových buněk. Může také způsobit primární nekrózu a buněčnou apoptózu indukcí permeability lysozomální membrány v různých rakovinných buněčných liniích.

Cílem této studie s ohledem na silné apoptotické vlastnosti oleocanthalu in vitro bylo prozkoumat jeho schopnost v reálných klinických podmínkách ovlivňovat hematologický a biochemický profil; také buněčné apoptotické markery Survivin, cCK18- (marker aktivity kaspázy) a Apo1fas/CD 95 u pacientů s CLL po zvážení progrese jejich onemocnění. Z tohoto důvodu byla provedena dietní intervenční studie srovnávající antineoplastické účinky EVOO bohatého na oleocanthal u pacientů s CLL.

Materiály a metody

V současné studii byl metodou kvantitativní NMR spektroskopie (qNMR) proveden screening 300 komerčních vzorků (vybraných z databáze >3000 vzorků), získaných z oliv (Olea europaea L.) sklizených v sezóně 2017-2018. za účelem identifikace olejů, které by mohly splňovat následující kritéria: Extrapanenský olej by měl vysoký obsah oleokanthalu a oleacinu (index D1) a nízký nebo dokonce žádný obsah jiných sekoiridoidních konjugovaných fenolických látek (3-8) nebo volného tyrosolu a hydroxytyrosolu, konkrétně oleje bohatého na Oleocanthal byl získán z Monovarietálního oleje odrůdy Lianolia Kerkyras od společnosti "The Governor" Company z Agios Matthaios, Korfu, Řecko. Tento olej obsahoval: oleocanthal 416±7 mg/kg, oleacin 284±10 mg/kg, tyrosol < 10 mg/kg, hydroxytyrosol < 10 mg/kg (Dl = 700 mg/kg). Je třeba zmínit, že kromě qNMR analýzy byl také měřen obsah hydroxytyrosolu a tyrosolu standardní metodou IOC pro měření biofenolů olivového oleje. Vybrané EVOO byly ihned po jejich analýze a do začátku období studie skladovány při 4 stupních Celsia, aby se minimalizovaly možné změny chemického složení.

Subjekty Do dietní intervence bylo zařazeno 21 pacientů z hematologické kliniky Všeobecné nemocnice v Lakonii (Řecko). Diagnóza CLL byla potvrzena standardními kritérii. Pacienti byli neléčení, ve stadiu Rai 0 až II.

Dietní intervence Na začátku pilotní studie byla zaznamenána lékařská vyšetření anamnézy každého pacienta třetí a šestý měsíc před dietní intervencí. Klinický záznam před dietní intervencí se týká hematologického profilu, biochemických vyšetření včetně lipidemického profilu, glykémie nalačno, markerů funkce jater a ledvin, jakož i údajů týkajících se biopsie krevní dřeně, neoplastických markerů a imunofenotypu. Byla také zaznamenána medikamentózní léčba nebo komorbidity.

Na začátku pilotní dietní intervence konzumovala skupina 21 pacientů s CLL před jídlem 40 ml/den EVOO bohatého na olecanthal a oleacin (OC/OL) po dobu 6 měsíců, aby se prozkoumal účinek dietní konzumace A-EVOO o studovaných hematologických, biochemických a molekulárních markerech. Množství spotřebovaného EVOO OC/OL bylo zvoleno podle předchozí studie. (15) Pacientům bylo doporučeno pokračovat v pravidelné dietě; jejich dodržování protokolu studie bylo hodnoceno dvěma 24hodinovými telefonickými odvoláními každé dva týdny.

Vzorky periferní krve od 21 pacientů s CLL byly odebrány na začátku, po 3 měsících a po 6 měsících od zahájení dietní intervence. Byl proveden celkový krevní obraz a kompletní biochemické testy na glykémii nalačno, krevní lipidový profil a markery funkce jater a ledvin. Analýzy séra byly provedeny za použití stejného postupu a ve stejné laboratoři s použitím biochemického analyzátoru (Olympus AU-600, Olympus, Tokio, Japonsko).

Pro stanovení apoptotických markerů M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Švédsko), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) byl podle pokynů dodavatele použit komerčně dostupný enzymatický imunosorbentní test (ELISA). ) a antiapoptotický marker Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) do vzorků plazmy všech pacientů ve všech studovaných časových bodech.

Statistická analýza byla provedena pomocí SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. USA) a hladina významnosti byla stanovena na 0,05. Nejprve byla provedena popisná analýza vzorku z hlediska věku, pohlaví, klinických, biochemických a molekulárních markerů. Bylo zjištěno, že markery jsou zkreslené na hladině významnosti p < 0,05 při kontrole pomocí Kolmogorova-Smirnovova testu. Ke zjištění rozdílů mezi intervencí a kontrolní skupinou byl proto použit neparametrický Mann-Whitney U test.

Rozdíly mezi časovými intervaly intervence byly hodnoceny Friedmanovým neparametrickým testem následovaným Dunnovým testem pro vícenásobné srovnání Nakonec byly korelace molekulárních markerů s klinickými parametry zahrnutými do studie a byly zkontrolovány pomocí Spearman Rho.