Ernährungsintervention mit hochphenolischem EVOO bei CLL

Natives Olivenöl extra (EVOO) ist der Hauptbestandteil der mediterranen Ernährung. In Olivenöl wurden mehr als 200 verschiedene chemische Verbindungen nachgewiesen, darunter Fettsäuren, Sterole, Carotinoide, Terpenoide, Flavonoide, Tocopherole und Olivenpolyphenole. Natives Olivenöl enthält eine Vielzahl wichtiger phenolischer Komponenten, die hauptsächlich den Verbindungen Tyrosol, Hydroxytyrosol, Oleocanthal (OC), Oleacin (OL), Ligstrosid und Oleuropein-Aglykonen entsprechen wurde aus EVOO isoliert, weist ein breites Spektrum an biologischen Wirkungen auf, darunter antioxidative, entzündungshemmende, krebshemmende, neuroprotektive und antidiabetische Aktivitäten, und hat aus diesem Grund mehr wissenschaftliche Aufmerksamkeit auf sich gezogen.

Chronische lymphatische Leukämie (CLL), die am häufigsten diagnostizierte Leukämie bei Erwachsenen in westlichen Ländern, ist für etwa 1 von 4 Fällen aller Leukämien verantwortlich. Sie ist durch die Akkumulation von monoklonalen B-Zellen im Knochenmark, peripheren Blut, Lymphgewebe und Milz gekennzeichnet, während sie oft asymptomatisch und langsam in ihrer Entwicklung ist. Patienten mit CLL benötigen nicht immer eine sofortige Therapie. Patienten, bei denen Symptome auftreten, haben jedoch je nach klinischem Stadium eine ungefähre mittlere Überlebenszeit von 18 Monaten bis 6 Jahren. Kriterien für die Diagnose einer CLL sind monoklonale B-Lymphozyten ≥5000 Lymphozyten/ml im peripheren Blut für mindestens 3 Monate, Prolymphozyten ≤55%, Koexpression von Differenzierungsclaster (CD)5 und B-Zell-Oberflächenantigenen CD 19, CD 20 und CD 23, geringe Konzentrationen von CD 20, CD 79b und geringe Expression von Oberflächen-Immunglobulinen (sIg) und Restriktion der leichten Kappa- oder Lambda-Kette. Die klinischen Standardverfahren zur Einschätzung der Prognose sind die von Rai et al. und Binet et al. entwickelten klinischen Staging-Systeme.

Der Grad der Apoptose in der Hämatopoese kann Informationen über den Mechanismus liefern, der für die Regulation der Proliferation von Vorläufer- und Stammzellen verantwortlich ist. Es wurde festgestellt, dass die Dysfunktion der Apoptose mit Leukämie assoziiert ist. Eine Zunahme der Expression des apoptotischen Markers Apo-1/fas (CD 95) in myeloiden Vorläuferzellen bei CLL-Patienten und eine entsprechende Abnahme des apoptotischen B-Zell-Lymphom-2 (BCL-2)-Inhibitors wurde beschrieben. Jüngste Studien zeigten auch, dass die Zunahme der Lymphozyten von CLL-Patienten auf das gestörte Gleichgewicht zwischen der Proliferation und Apoptose von CLL-Zellen zurückzuführen sein kann, während die Veränderungen in der Apoptose-bezogenen Proteinexpression während aller Stadien von Binet bei CLL erkannt werden. Die p38-Spiegel sind reduziert (Resistenz gegen Apoptose) und das Zelldifferenzierungsprotein der induzierten myeloischen Leukämie (Mcl-1) und die Survivin-Spiegel sind erhöht, um das Überleben von B-Lymphozyten zu verbessern.

Survivin ist ein Protein-Inhibitor der Apoptose, der Caspasen hemmt und den Zelltod blockiert. Es wird bei den meisten Krebsarten, einschließlich hämatologischer, stark exprimiert und ist mit einem schlechten klinischen Ergebnis verbunden. Der Apoptosemarker CD 95 (Apo-1/fas) und sein Ligand CD 95 ist ein Todesrezeptorligand, der die Apoptoseinduktion vermittelt, um die Immunhomöostase aufrechtzuerhalten, und die Fähigkeit hat, die Apoptoseinduktion in Krebszellen zu vermitteln, wodurch ein 18-Kilodalton erzeugt wird Fragment mit der Bezeichnung Caspase-gespaltenes Cytokeratin-18 (cCK-18).

Es wurde gezeigt, dass Oleocanthal Zytotoxizität und Apoptose in vitro bei humaner akuter Promyelozytenleukämie und in Myelomzellen induziert. Es kann auch primäre Nekrose und zelluläre Apoptose verursachen, indem es in verschiedenen Krebszelllinien eine lysosomale Membranpermeabilität induziert.

Das Ziel dieser Studie unter Berücksichtigung der starken apoptotischen Eigenschaften von Oleocanthal in vitro war es, seine Fähigkeit zu untersuchen, unter realen klinischen Bedingungen das hämatologische und biochemische Profil zu beeinflussen; auch die zellulären Apoptosemarker Survivin, cCK18- (Caspase-Aktivitätsmarker) und Apo1fas/CD 95 bei CLL-Patienten unter Berücksichtigung ihres Krankheitsverlaufs. Aus diesem Grund wurde eine diätetische Interventionsstudie durchgeführt, in der die antineoplastischen Wirkungen eines oleocanthalreichen EVOO bei CLL-Patienten verglichen wurden.

Material und Methoden

In der aktuellen Studie wurde ein Screening von 300 kommerziellen Proben (ausgewählt aus einer Datenbank mit >3000 Proben), die aus Oliven (Olea europaea L.) der Saison 2017-2018 stammen, mit der Methode der quantitativen NMR-Spektroskopie (qNMR) durchgeführt um Öle zu identifizieren, die die folgenden Kriterien erfüllen könnten: Das extranative Öl hätte einen hohen Gehalt an Oleocanthal und Oleacin (D1-Index) und einen niedrigen oder sogar keinen Gehalt an anderen Secoiridoid-konjugierten Phenolen (3-8) oder freiem Tyrosol und Hydroxytyrosol Oleocanthal wurde aus Monovarietal-Öl der Sorte Lianolia Kerkyras erhalten, das von der "The Governor" Company aus Agios Matthaios, Korfu, Griechenland, bereitgestellt wurde. Dieses Öl enthielt: Oleocanthal 416 ± 7 mg/kg, Oleacin 284 ± 10 mg/kg, Tyrosol < 10 mg/kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/kg (D1 = 700 mg/kg). Es sollte erwähnt werden, dass neben der qNMR-Analyse der Gehalt an Hydroxytyrosol und Tyrosol auch nach der IOC-Standardmethode zur Messung von Olivenöl-Biophenolen gemessen wurde. Ausgewählte EVOO wurden unmittelbar nach ihrer Analyse und bis zum Beginn des Studienzeitraums bei 4 Grad Celsius gelagert, um mögliche Veränderungen in der chemischen Zusammensetzung zu minimieren.

Subjekte Einundzwanzig Patienten aus der hämatologischen Klinik des Allgemeinen Krankenhauses von Lakonia (Griechenland) wurden zur Teilnahme an der diätetischen Intervention eingeschrieben. Die CLL-Diagnose wurde durch Standardkriterien bestätigt. Die Patienten waren unbehandelt, im Rai-Stadium 0 bis II.

Ernährungsintervention Zu Beginn der Pilotstudie wurden medizinische Untersuchungen der Krankengeschichte jedes Patienten für den dritten und sechsten Monat vor der Ernährungsintervention aufgezeichnet. Die klinischen Aufzeichnungen vor der diätetischen Intervention betreffen das hämatologische Profil, biochemische Untersuchungen einschließlich lipidämisches Profil, Nüchternglukose, Leber- und Nierenfunktionsmarker sowie Daten zu Blutmarkbiopsien, neoplastischen Markern und Immunphänotyp. Auch eine medikamentöse Behandlung oder Komorbiditäten wurden erfasst.

Zu Beginn der diätetischen Pilotintervention konsumierte eine Gruppe von 21 Patienten mit CLL vor ihren Mahlzeiten 40 ml/Tag EVOO, das reich an Olecanthal und Oleacin (OC/OL) war, für 6 Monate, um die Wirkung der diätetischen Einnahme zu untersuchen des A-EVOO zu den untersuchten hämatologischen, biochemischen und molekularen Markern. Die Menge des konsumierten EVOO OC/OL wurde nach einer früheren Studie gewählt. (15) Den Patienten wurde geraten, ihre normale Diät fortzusetzen; Ihre Einhaltung des Studienprotokolls wurde alle zwei Wochen durch zwei telefonische Rückrufe rund um die Uhr beurteilt.

Periphere Blutproben von den 21 Patienten mit CLL wurden zu Beginn, nach 3 Monaten und nach 6 Monaten nach Beginn der diätetischen Intervention gesammelt. Vollblutbild und vollständige biochemische Tests wurden für Nüchternglukose, Blutfettprofil und Marker der Leber- und Nierenfunktion durchgeführt. Serumanalysen wurden unter Verwendung des gleichen Verfahrens und im gleichen Labor unter Verwendung eines biochemischen Analysators (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan) durchgeführt.

Ein im Handel erhältlicher Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) wurde gemäß den Anweisungen des Lieferanten verwendet, um die apoptotischen Marker M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Schweden), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) zu testen ) und den antiapoptotischen Marker Survivin (OriGene Technologies, Inc. USA) in Plasmaproben aller Patienten zu allen untersuchten Zeitpunkten.

Die statistische Analyse wurde mit SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL) durchgeführt. USA) und das Signifikanzniveau wurde auf 0,05 gesetzt. Zunächst erfolgte eine deskriptive Analyse der Probe hinsichtlich Alter, Geschlecht, klinischer, biochemischer und molekularer Marker. Es wurde festgestellt, dass die Marker auf einem Signifikanzniveau von p < 0,05 verzerrt waren, wenn sie mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test überprüft wurden. Daher wurden nicht-parametrische Mann-Whitney-U-Tests verwendet, um die Unterschiede zwischen der Interventions- und der Kontrollgruppe herauszufinden.

Die Unterschiede zwischen den Zeitintervallen der Intervention wurden mit dem nicht-parametrischen Friedman-Test gefolgt von Dunns Test für multiple Vergleiche bewertet. Schließlich wurden die Korrelationen der molekularen Marker mit den in die Studie eingeschlossenen klinischen Parametern und mit Spearman Rho überprüft.