Dieetinterventie met hoge fenolische EVOO bij CLL

Extra vierge olijfolie (EVOO) is het belangrijkste onderdeel van het mediterrane dieet. In olijfolie zijn meer dan 200 verschillende chemische verbindingen aangetroffen, waaronder vetzuren, sterolen, carotenoïden, terpenoïden, flavonoïden, tocoferolen en olijfpolyfenolen. Olijfolie van eerste persing bevat een verscheidenheid aan belangrijke fenolische componenten, die voornamelijk overeenkomen met de verbindingen tyrosol, hydroxytyrosol, oleocanthal (OC), oleacine (OL), ligstroside en oleuropein aglyconen. Onder deze olijffenolen, oleocanthal, een dialdehydische vorm van dicarboxymethylligstroside aglycon is geïsoleerd uit EVOO, vertoont een breed scala aan biologische effecten, waaronder antioxiderende, ontstekingsremmende, kankerbestrijdende, neuroprotectieve en antidiabetische activiteiten en heeft om deze reden meer wetenschappelijke aandacht getrokken.

Chronische lymfatische leukemie (CLL), de meest gediagnosticeerde leukemie bij volwassenen in westerse landen, is verantwoordelijk voor ongeveer 1 op de 4 gevallen van alle leukemieën. Het wordt gekenmerkt door de ophoping van monoklonale B-cellen in beenmerg, perifeer bloed, lymfeweefsels en milt, terwijl het vaak asymptomatisch is en zich traag ontwikkelt. Patiënten met CLL hebben niet altijd onmiddellijke therapie nodig. Patiënten die symptomen vertonen, hebben echter een geschat mediane overlevingsbereik van 18 maanden tot 6 jaar, afhankelijk van het klinische stadium. Criteria voor de diagnose van CLL zijn monoklonale B-lymfocyten ≥5000 lymfocyten/ml in het perifere bloed gedurende ten minste 3 maanden, prolymfocyten ≤55%, co-expressie van klasse van differentiatie (CD)5 en B-celoppervlakte-antigenen CD 19, CD 20 en CD 23, lage niveaus van CD 20, CD 79b en lage expressie van oppervlakte-immunoglobulinen (sIg), en kappa- of lambda-lichte-ketenbeperking. De standaard klinische procedures om de prognose te schatten zijn de klinische stadiëringssystemen ontwikkeld door Rai et al en Binet et al.

Het niveau van apoptose bij hematopoëse kan informatie verschaffen over het mechanisme dat verantwoordelijk is voor de regulatie van de proliferatie van voorlopercellen en stamcellen. Er is gevonden dat de disfunctie van apoptose verband houdt met leukemie. Een toename van de expressie van Apo-1/fas (CD 95) apoptotische marker in myeloïde voorlopercellen bij CLL-patiënten en een overeenkomstige afname van de apoptotische B-cellymfoom 2 (BCL-2)-remmer is beschreven. Recente onderzoeken toonden ook aan dat de toename van de lymfocyten van CLL-patiënten mogelijk te wijten is aan het verstoorde evenwicht tussen de proliferatie en apoptose van CLL-cellen, terwijl de veranderingen in apoptose-gerelateerde eiwitexpressie worden herkend tijdens alle stadia van Binet bij CLL. De p38-niveaus zijn verlaagd (resistentie tegen apoptose) en het geïnduceerde myeloïde leukemieceldifferentiatie-eiwit (Mcl-1) en Survivin-niveaus zijn verhoogd, om de overleving van B-lymfocyten te verbeteren.

Survivin is een eiwitremmer van apoptose die caspases remt en celdood blokkeert. Het komt sterk tot uiting in de meeste kankers, waaronder hematologische, en wordt geassocieerd met een slecht klinisch resultaat. De apoptotische marker CD 95 (Apo-1/fas) en zijn ligand, CD 95, is een doodreceptorligand die apoptose-inductie medieert om de immuunhomeostase te behouden en heeft het vermogen om apoptose-inductie in kankercellen te mediëren, waardoor een 18-kilodalton fragment genaamd caspase-gesplitste cytokeratine-18 (cCK-18).

Van oleocanthal is aangetoond dat het in vitro cytotoxiciteit en apoptose induceert bij humane acute promyelocytische leukemie en in myeloomcellen. Het kan ook primaire necrose en cellulaire apoptose veroorzaken door lysosomale membraanpermeabiliteit in verschillende kankercellijnen te induceren.

Het doel van deze studie, rekening houdend met de sterke apoptotische eigenschappen van oleocanthal in vitro, was om het vermogen ervan te onderzoeken, onder reële klinische omstandigheden, om het hematologische en biochemische profiel te beïnvloeden; ook de cellulaire apoptotische markers Survivin, cCK18- (caspase-activiteitsmarker) en Apo1fas/CD 95 bij CLL-patiënten, rekening houdend met de progressie van hun ziekte. Om deze reden werd een voedingsinterventieonderzoek uitgevoerd waarin de antineoplastische effecten van een oleocanthal-rijk EVOO bij CLL-patiënten werden vergeleken.

Materiaal en methoden

In de huidige studie werd een screening van 300 commerciële monsters (geselecteerd uit een database van >3000 monsters), verkregen van olijven (Olea europaea L.) geoogst in het seizoen 2017-2018, uitgevoerd door de kwantitatieve NMR-spectroscopie (qNMR)-methode in om oliën te identificeren die aan de volgende criteria zouden kunnen voldoen: De extra vierge olie zou een hoog oleocanthal- en oleacinegehalte (D1-index) hebben en een laag of zelfs geen gehalte aan andere secoiridoid geconjugeerde fenolen (3-8) of vrij tyrosol en hydroxytyrosol. Oleocanthal werd verkregen uit Monovarietal-olie van de variëteit Lianolia Kerkyras, geleverd door "The Governor" Company uit Agios Matthaios, Corfu, Griekenland. Deze olie bevatte: Oleocanthal 416±7 mg/Kg, oleacine 284±10 mg/Kg, Tyrosol < 10 mg/Kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg). Er moet worden vermeld dat naast de qNMR-analyse, het hydroxytyrosol- en tyrosolgehalte ook werd gemeten met de standaard IOC-methode voor het meten van biofenolen in olijfolie. Geselecteerde EVOO onmiddellijk na hun analyse en tot het begin van de studieperiode werden bewaard bij 4 graden Celsius om mogelijke veranderingen in de chemische samenstelling te minimaliseren.

Proefpersonen Eenentwintig patiënten van de hematologische kliniek van het Algemeen Ziekenhuis van Lakonia (Griekenland) werden ingeschreven om deel te nemen aan de dieetinterventie. De CLL-diagnose werd bevestigd door standaardcriteria. Patiënten waren onbehandeld, in Rai-stadium 0 tot II.

Dieetinterventie Aan het begin van de pilotstudie werden medische onderzoeken van de geschiedenis van elke patiënt geregistreerd gedurende de derde en zesde maand vóór de dieetinterventie. Het klinische dossier vóór de dieetinterventie betreft het hematologische profiel, biochemische onderzoeken waaronder het lipidemisch profiel, nuchtere glucose, lever- en nierfunctiemarkers, evenals gegevens over bloedmergbiopsie, neoplastische markers en immunofenotype. Medicamenteuze behandeling of comorbiditeit werden ook geregistreerd.

Aan het begin van de proefdieetinterventie consumeerde een groep van 21 patiënten met CLL voor hun maaltijden gedurende 6 maanden 40 ml EVOO, rijk aan olecanthal en oleacine (OC/OL), om het effect van de voedingsconsumptie te onderzoeken. van de A-EVOO op de bestudeerde hematologische, biochemische en moleculaire merkers. De hoeveelheid van de geconsumeerde EVOO OC/OL werd gekozen op basis van een eerdere studie. (15) Patiënten werd geadviseerd hun normale dieet voort te zetten; hun naleving van het onderzoeksprotocol werd beoordeeld door twee 24-uurs telefonische terugroepacties om de twee weken.

Perifere bloedmonsters van de 21 patiënten met CLL werden verzameld aan het begin, na 3 maanden en na 6 maanden vanaf het begin van de dieetinterventie. Volbloedtelling en volledige biochemische tests werden uitgevoerd voor nuchtere glucose, bloedlipidenprofiel en markers van lever- en nierfunctie. Serumanalyses werden uitgevoerd met dezelfde procedure en in hetzelfde laboratorium met behulp van een biochemische analysator (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japan).

Een in de handel verkrijgbare enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) werd gebruikt volgens de instructies van de leverancier om de apoptotische markers M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Zweden), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) te testen. ) en de antiapoptotische marker Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) in plasmamonsters van alle patiënten op alle bestudeerde tijdstippen.

Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. VS) en het significantieniveau werd vastgesteld op 0,05. Aanvankelijk werd een beschrijvende analyse van het monster uitgevoerd in termen van leeftijd, geslacht, klinische, biochemische en moleculaire markers. De markers bleken scheef te staan ​​op significantieniveau p < 0,05 bij controle met behulp van de Kolmogorov-Smirnov-test. Daarom werd de niet-parametrische Mann-Whitney U-test gebruikt om de verschillen tussen de interventie- en de controlegroep te achterhalen.

De verschillen tussen de tijdsintervallen van de interventie werden beoordeeld met de niet-parametrische test van Friedman, gevolgd door de test van Dunn voor meervoudige vergelijking. Ten slotte werden de correlaties van de moleculaire markers met de klinische parameters die in het onderzoek waren opgenomen, gecontroleerd met Spearman Rho.