Diétás beavatkozás magas fenoltartalmú EVOO-val CLL-ben

Az extra szűz olívaolaj (EVOO) a mediterrán étrend fő összetevője. Az olívaolajban több mint 200 különböző kémiai vegyületet mutattak ki, köztük zsírsavakat, szterolokat, karotinoidokat, terpenoidokat, flavonoidokat, tokoferolokat és olíva-polifenolokat. A szűz olívaolaj számos fontos fenolos komponenst tartalmaz, amelyek főként a tirozol, hidroxi-tiroszol, oleokantál (OC), oleacin (OL), ligstrozid és oleuropein aglikonok vegyületei. Ezek közül az olívafenolok közül az oleokantál, a dikarboximetil-glikonok dialdehid formája. Az EVOO-ból izolálták, számos biológiai hatást mutat, beleértve az antioxidáns, gyulladáscsökkentő, rákellenes, neuroprotektív és antidiabetikus hatásokat, és ezért több tudományos figyelmet keltett.

A krónikus limfocitás leukémia (CLL), a nyugati országokban leggyakrabban diagnosztizált felnőttkori leukémia, az összes leukémia körülbelül 4-ből 1-ért felelős. Jellemzője a monoklonális B-sejtek felhalmozódása a csontvelőben, a perifériás vérben, a nyirokszövetekben és a lépben, miközben gyakran tünetmentes és lassan fejlődik. A CLL-ben szenvedő betegek nem mindig igényelnek azonnali kezelést. A tüneteket mutató betegek átlagos túlélési ideje azonban a klinikai stádiumtól függően 18 hónap és 6 év között van. A CLL diagnózisának kritériumai a monoklonális B-limfociták ≥5000 limfocita/ml a perifériás vérben legalább 3 hónapig, a prolimfociták ≤55%, a differenciálódási klaszter (CD)5 és a B-sejt felszíni antigének CD 19 együttes expressziója, CD 20 és CD 23, CD 20, CD 79b alacsony szintje és felszíni immunglobulinok (sIg) alacsony expressziója, valamint kappa vagy lambda könnyűlánc restrikció. A prognózis becslésére szolgáló standard klinikai eljárások a Rai és munkatársai, valamint Binet és munkatársai által kifejlesztett klinikai staging rendszerek.

Az apoptózis szintje a vérképzésben információt szolgáltathat arról a mechanizmusról, amely felelős a progenitor és az őssejtek proliferációjának szabályozásáért. Megállapították, hogy az apoptózis diszfunkciója összefügg a leukémiával. Az Apo-1/fas (CD 95) apoptotikus marker expressziójának növekedését írták le a mieloid progenitor sejtekben CLL-betegekben, és ennek megfelelően csökken az apoptotikus B-sejtes limfóma 2 (BCL-2) inhibitora. A legújabb tanulmányok azt is kimutatták, hogy a CLL-betegek limfocitáinak növekedése a CLL-sejtek proliferációja és apoptózisa közötti egyensúly megbomlásának tudható be, miközben az apoptózissal összefüggő fehérjeexpresszió változásait a CLL-ben a Binet minden szakaszában felismerik. A p38 szintek csökkennek (rezisztencia az apoptózissal szemben), valamint az indukált mieloid leukémia sejtdifferenciálódási fehérje (Mcl-1) és a Survivin szintje emelkedik, hogy fokozza a B limfociták túlélését.

A survivin az apoptózis fehérje inhibitora, amely gátolja a kaszpázokat és blokkolja a sejthalált. Erősen kifejeződik a legtöbb rákban, beleértve a hematológiai betegségeket is, és rossz klinikai eredménnyel jár. A CD 95 (Apo-1/fas) apoptotikus marker és liganduma, a CD 95 egy halálreceptor ligandum, amely az apoptózis indukcióját közvetíti az immunhomeosztázis fenntartása érdekében, és képes apoptózis indukciót közvetíteni rákos sejtekben, így 18 kilodaltont hoz létre. a kaszpázzal hasított citokeratin-18 (cCK-18) elnevezésű fragmentum.

Kimutatták, hogy az oleocanthal citotoxicitást és apoptózist indukál in vitro humán akut promielocitás leukémiában és mielóma sejtekben. Primer nekrózist és celluláris apoptózist is okozhat a lizoszómális membrán permeabilitásának indukálásával különböző rákos sejtvonalakban.

A tanulmány célja, figyelembe véve az oleokanthal erős apoptotikus tulajdonságait in vitro, annak vizsgálata, hogy valódi klinikai körülmények között képes-e befolyásolni a hematológiai és biokémiai profilt; a Survivin, a cCK18- (kaszpázaktivitás marker) és az Apo1fas/CD 95 celluláris apoptotikus markerek is CLL-es betegekben, figyelembe véve a betegség progresszióját. Emiatt egy diétás intervenciós vizsgálatot végeztek, amely egy oleokantálisban gazdag EVOO daganatellenes hatását hasonlította össze CLL-es betegekben.

Anyag és módszerek

A jelen tanulmányban a 2017-2018-as szezonban betakarított olajbogyókból (Olea europaea L.) származó, 300 kereskedelmi minta (a >3000 mintát tartalmazó adatbázisból kiválasztva) szűrését végeztük kvantitatív NMR spektroszkópia (qNMR) módszerrel. Azon olajok azonosítása érdekében, amelyek megfelelhetnek a következő kritériumoknak: Az extraszűz olaj magas oleokantál és oleacin tartalommal (D1 index) és alacsony vagy egyáltalán nem tartalmaz más szekoiridoid konjugált fenolokat (3-8) vagy szabad tirozolt és hidroxitirozolt, különösen olajban gazdag Az oleokantált a Lianolia Kerkyras fajta Monovarietal olajából nyerték, amelyet az Agios Matthaios, Korfu, Görögország "The Governor" Company szállított. Ez az olaj a következőket tartalmazta: 416±7 mg/kg oleocanthal, 284±10 mg/kg oleacin, < 10 mg/kg tirozol, < 10 mg/kg hidroxitirozol (D1 = 700 mg/kg). Meg kell említeni, hogy a qNMR analízis mellett a hidroxi-tirozol és tirozol tartalmat is az olívaolaj biofenolok mérésére szolgáló standard IOC módszerrel mértük. A kiválasztott EVOO-kat közvetlenül az elemzésük után és a vizsgálati időszak kezdetéig 4 Celsius fokon tároltuk, hogy minimalizáljuk a kémiai összetétel esetleges változásait.

Alanyok A Lakoniai Általános Kórház (Görögország) hematológiai klinikájáról huszonegy beteget vontak be az étrendi beavatkozásba. A CLL diagnózisát standard kritériumok igazolták. A betegek kezeletlenek voltak, a Rai 0-tól II.

Diétás beavatkozás A kísérleti vizsgálat kezdetén minden beteg anamnézisének orvosi vizsgálatát rögzítettük a beavatkozás előtti harmadik és hatodik hónapban. A diétás beavatkozás előtti klinikai adatok a hematológiai profilra, a biokémiai vizsgálatokra, beleértve a lipidémiás profilt, az éhomi glükózt, a máj- és vesefunkció markereket, valamint a vérvelő-biopsziára, a daganatos markerekre és az immunfenotípusra vonatkozó adatokra vonatkoznak. Feljegyezték a gyógyszeres kezelést vagy a társbetegségeket is.

A kísérleti diétás beavatkozás kezdetén egy 21 fős CLL-betegből álló csoport étkezés előtt napi 40 ml olecanthalban és oleacinban gazdag EVOO-t (OC/OL) fogyasztott 6 hónapon keresztül, hogy feltárja a diétás fogyasztás hatását. Az A-EVOO vizsgálata a vizsgált hematológiai, biokémiai és molekuláris markerekről. Az elfogyasztott EVOO OC/OL mennyiségét egy korábbi vizsgálat alapján választottuk meg. (15) A betegeknek azt tanácsolták, hogy folytassák rendszeres étrendjüket; a vizsgálati protokollhoz való ragaszkodásukat kéthetente két 24 órás telefonos visszahívással értékelték.

A 21 CLL-es beteg perifériás vérmintáját vettük az étrendi beavatkozás kezdetén, 3 hónap után és 6 hónap elteltével. Teljes vérképet és teljes biokémiai vizsgálatokat végeztek az éhomi glükóz, a vér lipidprofilja, valamint a máj- és vesefunkció markereinek meghatározására. A szérumelemzéseket ugyanazzal az eljárással és ugyanabban a laboratóriumban végeztük biokémiai analizátor (Olympus AU-600, Olympus, Tokió, Japán) használatával.

Kereskedelmi forgalomban kapható enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) használtunk a szállító utasításai szerint az M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Svédország), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) apoptotikus markerek vizsgálatára. ) és a Survivin (OriGene Technologies, Inc. USA) antiapoptotikus markert az összes beteg plazmamintájába az összes vizsgált időpontban.

A statisztikai elemzést az SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL) segítségével végeztük. USA), és a szignifikancia szintet 0,05-ben határoztuk meg. Kezdetben a minta leíró elemzését végezték el a kor, nem, klinikai, biokémiai és molekuláris markerek tekintetében. A markerek torzultak p < 0,05 szignifikancia szinten, ha Kolmogorov-Smirnov teszttel ellenőriztük. Ezért nem-paraméteres Mann-Whitney U tesztet alkalmaztunk a beavatkozás és a kontrollcsoport közötti különbségek felderítésére.

A beavatkozás időintervallumai közötti különbségeket Friedman nem-paraméteres teszttel, majd többszörös összehasonlítás céljából Dunn-teszttel értékeltük. Végül a molekuláris markerek összefüggéseit a vizsgálatban szereplő klinikai paraméterekkel ellenőriztük, és Spearman Rho-val ellenőriztük.