Intervention diététique à haute teneur en EVOO phénolique dans la LLC

L'huile d'olive extra vierge (EVOO) est le composant majeur du régime méditerranéen. Plus de 200 composés chimiques différents ont été détectés dans l'huile d'olive, notamment des acides gras, des stérols, des caroténoïdes, des terpénoïdes, des flavonoïdes, des tocophérols et des polyphénols d'olive. L'huile d'olive vierge contient une variété de composants phénoliques importants, correspondant principalement aux composés tyrosol, hydroxytyrosol, oléocanthal (OC), oléacine (OL), ligstroside et oleuropéine aglycones. Parmi ces phénols d'olive, l'oléocanthal, une forme dialdéhydique de dicarboxyméthyl ligstroside aglycone qui a été isolé de l'EVOO, présente un large éventail d'effets biologiques, notamment des activités antioxydantes, anti-inflammatoires, anticancéreuses, neuroprotectrices et antidiabétiques et, pour cette raison, a attiré davantage d'attention scientifique.

La leucémie lymphoïde chronique (LLC), la leucémie adulte la plus couramment diagnostiquée dans les pays occidentaux, est responsable d'environ 1 cas sur 4 de toutes les leucémies. Elle se caractérise par l'accumulation de cellules B monoclonales dans la moelle osseuse, le sang périphérique, les tissus lymphatiques et la rate, alors qu'elle est souvent asymptomatique et lente à se développer. Les patients atteints de LLC n'ont pas toujours besoin d'un traitement immédiat. Cependant, les patients qui présentent des symptômes ont une plage de survie médiane approximative de 18 mois à 6 ans selon le stade clinique. Les critères de diagnostic de la LLC sont les lymphocytes B monoclonaux ≥5000 lymphocytes/ml dans le sang périphérique depuis au moins 3 mois, les prolymphocytes ≤55%, la co-expression du clastre de différenciation (CD)5 et des antigènes de surface des cellules B CD 19, CD 20 et CD 23, faibles niveaux de CD 20, CD 79b et faible expression des immunoglobulines de surface (sIg) et restriction des chaînes légères kappa ou lambda. Les procédures cliniques standard pour estimer le pronostic sont les systèmes de stadification clinique développés par Rai et al et Binet et al.

Le niveau d'apoptose dans l'hématopoïèse peut fournir des informations sur le mécanisme responsable de la régulation de la prolifération des cellules progénitrices et souches. Le dysfonctionnement de l'apoptose s'est avéré être associé à la leucémie. Une augmentation de l'expression du marqueur apoptotique Apo-1/fas (CD 95) dans les cellules progénitrices myéloïdes chez les patients atteints de LLC et une diminution correspondante de l'inhibiteur apoptotique du lymphome à cellules B 2 (BCL-2) ont été décrites. Des études récentes ont également montré que l'augmentation des lymphocytes des patients atteints de LLC peut être due à l'équilibre perturbé entre la prolifération et l'apoptose des cellules LLC alors que les modifications de l'expression des protéines liées à l'apoptose sont reconnues à tous les stades de Binet dans la LLC. Les niveaux de p38 sont réduits (résistance à l'apoptose) et les niveaux de protéine de différenciation cellulaire de la leucémie myéloïde induite (Mcl-1) et de survivine sont élevés, de manière à améliorer la survie des lymphocytes B.

La survivine est une protéine inhibitrice de l'apoptose qui inhibe les caspases et bloque la mort cellulaire. Elle est fortement exprimée dans la plupart des cancers, y compris hématologiques, et est associée à un mauvais résultat clinique. Le marqueur apoptotique CD 95 (Apo-1/fas) et son ligand, CD 95 est un ligand du récepteur de la mort qui médie l'induction de l'apoptose afin de maintenir l'homéostasie immunitaire et a la capacité de médier l'induction de l'apoptose dans les cellules cancéreuses, générant un 18 kilodaltons fragment appelé cytokératine-18 clivée par caspase (cCK-18).

Il a été démontré que l'oléocanthal induisait la cytotoxicité et l'apoptose in vitro dans la leucémie promyélocytaire aiguë humaine et dans les cellules de myélome. Il peut également provoquer une nécrose primaire et une apoptose cellulaire en induisant la perméabilité de la membrane lysosomale dans différentes lignées cellulaires cancéreuses.

Le but de cette étude prenant en compte les fortes propriétés apoptotiques de l'oléocanthal in vitro, était d'étudier sa capacité, dans des conditions cliniques réelles, à affecter le profil hématologique et biochimique ; également les marqueurs apoptotiques cellulaires Survivine, cCK18- (caspase activity marker) et Apo1fas/CD 95 chez les patients atteints de LLC après prise en compte de la progression de leur maladie. Pour cette raison, une étude d'intervention diététique a été menée comparant les effets antinéoplasiques d'un EVOO riche en oléocanthal chez les patients atteints de LLC.

Matériel et méthodes

Dans la présente étude, un criblage de 300 échantillons commerciaux (sélectionnés parmi une base de données de> 3000 échantillons), obtenus à partir d'olives (Olea europaea L.) récoltées au cours de la saison 2017-2018, a été réalisé par la méthode de spectroscopie RMN quantitative (qNMR) dans afin d'identifier les huiles qui pourraient remplir les critères suivants : L'huile extravierge aurait une teneur élevée en oléocanthal et en oléacine (indice D1) et une teneur faible, voire nulle, en d'autres phénoliques conjugués secoiridoïdes (3-8) ou en tyrosol et hydroxytyrosol libres. L'oléocanthal a été obtenu à partir d'huile monovariétale de la variété Lianolia Kerkyras fournie par la société "The Governor" d'Agios Matthaios, Corfou, Grèce. Cette huile contenait : Oléocanthal 416 ± 7 mg/Kg, Oléacine 284 ± 10 mg/Kg, Tyrosol < 10 mg/Kg, Hydroxytyrosol < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg). Il convient de mentionner qu'en dehors de l'analyse qNMR, la teneur en hydroxytyrosol et en tyrosol a également été mesurée par la méthode standard IOC pour la mesure des biophénols d'huile d'olive. Les EVOO sélectionnés immédiatement après leur analyse et jusqu'au début de la période d'étude ont été stockés à 4 degrés Celsius afin de minimiser les éventuelles altérations de la composition chimique.

Sujets Vingt et un patients de la clinique hématologique de l'hôpital général de Laconie (Grèce) ont été recrutés pour participer à l'intervention diététique. Le diagnostic de LLC a été confirmé par les critères standards. Les patients n'étaient pas traités, au stade Rai 0 à II.

Intervention diététique Au début de l'étude pilote, des examens médicaux des antécédents de chaque patient ont été enregistrés pendant les troisième et sixième mois avant l'intervention diététique. Le dossier clinique avant l'intervention diététique porte sur le profil hématologique, les examens biochimiques notamment, le profil lipidémique, la glycémie à jeun, les marqueurs des fonctions hépatique et rénale, ainsi que des données concernant la biopsie médullaire, les marqueurs néoplasiques et l'immunophénotype. Des traitements médicamenteux ou des comorbidités ont également été enregistrés.

Au début de l'intervention diététique pilote, un groupe de 21 patients atteints de LLC a consommé avant leurs repas, 40 ml/jour d'EVOO riche en olécanthal et oléacine (OC/OL) pendant 6 mois, afin d'explorer l'effet de la consommation alimentaire de l'A-EVOO sur les marqueurs hématologiques, biochimiques et moléculaires étudiés. La quantité d'EVOO OC/OL consommée a été choisie selon une étude précédente. (15) Il a été conseillé aux patients de poursuivre leur régime alimentaire habituel ; leur adhésion au protocole de l'étude a été évaluée par deux rappels téléphoniques de 24 h toutes les deux semaines.

Des échantillons de sang périphérique des 21 patients atteints de LLC ont été prélevés au début, après 3 mois et 6 mois après le début de l'intervention diététique. Une numération sanguine totale et des tests biochimiques complets ont été effectués pour la glycémie à jeun, le profil lipidique sanguin et les marqueurs des fonctions hépatique et rénale. Les analyses de sérum ont été effectuées en utilisant la même procédure et dans le même laboratoire avec l'utilisation d'un analyseur biochimique (Olympus AU-600, Olympus, Tokyo, Japon).

Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) disponible dans le commerce a été utilisé selon les instructions du fournisseur pour doser les marqueurs apoptotiques M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Suède), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA ) et le marqueur anti-apoptotique Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) dans des échantillons de plasma de tous les patients à tous les moments étudiés.

L'analyse statistique a été réalisée à l'aide de SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. États-Unis) et le seuil de signification a été fixé à 0,05. Dans un premier temps, une analyse descriptive de l'échantillon a été réalisée en termes d'âge, de sexe, de marqueurs cliniques, biochimiques et moléculaires. Les marqueurs se sont avérés biaisés à un niveau de signification p <0,05 lorsqu'ils ont été vérifiés à l'aide du test de Kolmogorov-Smirnov. Par conséquent, le test U de Mann-Whitney non paramétrique a été utilisé pour déterminer les différences entre le groupe d'intervention et le groupe témoin.

Les différences entre les intervalles de temps de l'intervention ont été évaluées avec le test non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn pour comparaison multiple. Enfin, les corrélations des marqueurs moléculaires avec les paramètres cliniques inclus dans l'étude et ont été vérifiées avec Spearman Rho.