Диетическое вмешательство с высоким содержанием фенола EVOO при ХЛЛ

Оливковое масло первого холодного отжима (EVOO) является основным компонентом средиземноморской диеты. В оливковом масле обнаружено более 200 различных химических соединений, включая жирные кислоты, стеролы, каротиноиды, терпеноиды, флавоноиды, токоферолы и полифенолы оливы. Оливковое масло первого отжима содержит множество важных фенольных компонентов, в основном соответствующих соединениям тирозола, гидрокситирозола, олеокантала (OC), олеацина (OL), лигстрозида и олеуропеиновых агликонов. был выделен из EVOO, обладает широким спектром биологических эффектов, включая антиоксидантное, противовоспалительное, противораковое, нейропротекторное и противодиабетическое действие, и по этой причине привлек больше внимания ученых.

Хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), наиболее часто диагностируемый лейкоз у взрослых в западных странах, является причиной примерно 1 из 4 случаев всех лейкозов. Он характеризуется накоплением моноклональных В-клеток в костном мозге, периферической крови, лимфатических тканях и селезенке, при этом часто протекает бессимптомно и медленно в своем развитии. Пациенты с ХЛЛ не всегда нуждаются в немедленной терапии. Тем не менее, пациенты, у которых появляются симптомы, имеют приблизительный средний диапазон выживаемости от 18 месяцев до 6 лет в зависимости от клинической стадии. Критериями диагностики ХЛЛ являются моноклональные В-лимфоциты ≥5000 лимфоцитов/мл в периферической крови не менее 3 мес, пролимфоциты ≤55%, коэкспрессия кластера дифференцировки (CD)5 и В-клеточных поверхностных антигенов CD 19, CD 20 и CD 23, низкие уровни CD 20, CD 79b и низкая экспрессия поверхностных иммуноглобулинов (sIg) и ограничение легкой цепи каппа или лямбда. Стандартными клиническими процедурами для оценки прогноза являются системы клинической стадии, разработанные Rai et al. и Binet et al.

Уровень апоптоза в гемопоэзе может дать информацию о механизме, ответственном за регуляцию пролиферации клеток-предшественников и стволовых клеток. Было обнаружено, что дисфункция апоптоза связана с лейкемией. Описано увеличение экспрессии маркера апоптоза Apo-1/fas (CD 95) в миелоидных клетках-предшественниках у пациентов с ХЛЛ и соответствующее снижение ингибитора апоптотической В-клеточной лимфомы 2 (BCL-2). Недавние исследования показали также, что увеличение лимфоцитов у больных ХЛЛ может быть связано с нарушением баланса между пролиферацией и апоптозом клеток ХЛЛ, тогда как изменения экспрессии связанных с апоптозом белков распознаются на всех стадиях Бине при ХЛЛ. Уровни р38 снижены (резистентность к апоптозу), а уровни белка дифференцировки клеток индуцированного миелоидного лейкоза (Mcl-1) и сурвивина повышены, чтобы повысить выживаемость В-лимфоцитов.

Сурвивин является белковым ингибитором апоптоза, который ингибирует каспазы и блокирует гибель клеток. Он высоко выражен при большинстве онкологических заболеваний, в том числе гематологических, и связан с неблагоприятным клиническим исходом. Маркер апоптоза CD 95 (Apo-1/fas) и его лиганд, CD 95, представляют собой лиганд рецептора смерти, который опосредует индукцию апоптоза для поддержания иммунного гомеостаза и обладает способностью опосредовать индукцию апоптоза в раковых клетках, генерируя 18-килодальтонную фрагмент, называемый расщепленным каспазой цитокератином-18 (cCK-18).

Было показано, что олеокантал вызывает цитотоксичность и апоптоз in vitro при остром промиелоцитарном лейкозе человека и в клетках миеломы. Он также может вызывать первичный некроз и клеточный апоптоз, индуцируя проницаемость лизосомальной мембраны в различных линиях раковых клеток.

Целью этого исследования, принимая во внимание сильные апоптотические свойства олеокантала in vitro, было изучение его способности в реальных клинических условиях влиять на гематологический и биохимический профиль; также клеточные апоптотические маркеры Survivin, cCK18- (маркер активности каспазы) и Apo1fas/CD 95 у пациентов с ХЛЛ с учетом прогрессирования их заболевания. По этой причине было проведено исследование диетического вмешательства, в котором сравнивались противоопухолевые эффекты богатого олеоканталом EVOO у пациентов с ХЛЛ.

Материал и методы

В настоящем исследовании методом количественной ЯМР-спектроскопии (кЯМР) в Для определения масел, которые могли бы соответствовать следующим критериям: масло первого отжима должно иметь высокое содержание олеокантала и олеацина (индекс D1) и низкое содержание или даже полное отсутствие других секоиридоидных конъюгированных фенолов (3-8) или свободного тирозола и гидрокситирозола. В частности, масло, богатое Олеокантал был получен из моносортового масла сорта Лианолия Керкирас, предоставленного компанией «Губернатор» из Агиос Маттаиос, Корфу, Греция. Это масло содержало: олеокантал 416 ± 7 мг/кг, олеацин 284 ± 10 мг/кг, тирозол < 10 мг/кг, гидрокситирозол < 10 мг/кг (D1 = 700 мг/кг). Следует отметить, что помимо анализа qNMR содержание гидрокситирозола и тирозола также измеряли стандартным методом IOC для измерения биофенолов оливкового масла. Отобранные ЭВОО сразу после их анализа и до начала периода исследования хранили при температуре 4°С, чтобы свести к минимуму возможные изменения химического состава.

Субъекты Двадцать один пациент из гематологической клиники Главного госпиталя Лаконии (Греция) участвовали в диетическом вмешательстве. Диагноз ХЛЛ был подтвержден по стандартным критериям. Пациенты не получали лечения, в стадии Rai от 0 до II.

Диетическое вмешательство В начале экспериментального исследования медицинские осмотры истории каждого пациента записывались за третий и шестой месяц до диетического вмешательства. Клинические записи до диетического вмешательства касаются гематологического профиля, биохимических исследований, в том числе липидемического профиля, уровня глюкозы натощак, маркеров функции печени и почек, а также данных, касающихся биопсии костного мозга, неопластических маркеров и иммунофенотипа. Также регистрировались медикаментозное лечение или сопутствующие заболевания.

В начале пилотного диетического вмешательства группа из 21 пациента с ХЛЛ принимала перед едой 40 мл/день EVOO, богатого олеканталом и олеацином (OC/OL), в течение 6 месяцев, чтобы изучить влияние диетического потребления. А-ЭВОО на изучаемые гематологические, биохимические и молекулярные маркеры. Количество потребляемого EVOO OC/OL было выбрано в соответствии с предыдущим исследованием. (15) Пациентам было рекомендовано продолжать свою обычную диету; их приверженность протоколу исследования оценивалась по двум 24-часовым телефонным отзывам каждые две недели.

Образцы периферической крови у 21 пациента с ХЛЛ были собраны в начале, через 3 месяца и через 6 месяцев после начала диетического вмешательства. Были проведены общий анализ крови и полные биохимические тесты для определения уровня глюкозы натощак, липидного профиля крови и маркеров функции печени и почек. Анализы сыворотки проводились по той же методике и в той же лаборатории с использованием биохимического анализатора (Olympus AU-600, Olympus, Токио, Япония).

Иммуноферментный анализ (ELISA) использовали в соответствии с инструкциями поставщика для определения маркеров апоптоза M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Швеция), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Колорадо, США). ) и антиапоптотического маркера Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) в образцы плазмы всех пациентов во все изучаемые моменты времени.

Статистический анализ проводили с использованием SPSS v.24 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс. США), а уровень значимости был установлен на уровне 0,05. Первоначально был проведен описательный анализ образца с точки зрения возраста, пола, клинических, биохимических и молекулярных маркеров. Было обнаружено, что маркеры имеют асимметрию на уровне значимости p < 0,05 при проверке с помощью теста Колмогорова-Смирнова. Поэтому для выявления различий между экспериментальной и контрольной группой был использован непараметрический U-критерий Манна-Уитни.

Различия между временными интервалами вмешательства оценивали с помощью непараметрического критерия Фридмана с последующим критерием Данна для множественного сравнения. Наконец, корреляции молекулярных маркеров с клиническими параметрами, включенными в исследование, проверяли с помощью Ро Спирмена.