Ruokavaliointerventio korkean fenolisen EVOO:n kanssa CLL:ssä

Ekstraneitsytoliiviöljy (EVOO) on Välimeren ruokavalion pääkomponentti. Oliiviöljystä on havaittu yli 200 erilaista kemiallista yhdistettä, mukaan lukien rasvahapot, sterolit, karotenoidit, terpenoidit, flavonoidit, tokoferolit ja oliivin polyfenolit. Neitsytoliiviöljy sisältää useita tärkeitä fenolikomponentteja, jotka vastaavat pääasiassa yhdisteitä tyrosoli, hydroksityrosoli, oleokantaali (OC), oleasiini (OL), ligstrosidi ja oleuropeiiniaglykonit. Näistä oliivifenoleista oleokantaali on dikarboksimetyyliglykonien dialdehydinen muoto. on eristetty EVOO:sta, sillä on laaja valikoima biologisia vaikutuksia, mukaan lukien antioksidanttiset, anti-inflammatoriset, syöpää ehkäisevät, hermostoa suojaavat ja diabeettiset vaikutukset, ja tästä syystä se on herättänyt enemmän tieteellistä huomiota.

Krooninen lymfosyyttinen leukemia (CLL), yleisimmin diagnosoitu aikuisten leukemia länsimaissa, on vastuussa noin 1/4 tapauksesta kaikista leukemioista. Sille on ominaista monoklonaalisten B-solujen kertyminen luuytimeen, perifeeriseen vereen, imukudoksiin ja pernaan, kun taas se on usein oireeton ja sen kehitys on hidasta. KLL-potilaat eivät aina tarvitse välitöntä hoitoa. Potilaiden, joilla ilmenee oireita, keskimääräinen eloonjäämisaika vaihtelee kuitenkin 18 kuukaudesta 6 vuoteen kliinisestä vaiheesta riippuen. KLL-diagnoosin kriteerit ovat monoklonaaliset B-lymfosyytit ≥ 5000 lymfosyyttiä/ml ääreisveressä vähintään 3 kuukauden ajan, prolymfosyytit ≤55 %, erilaistumisklasterin (CD)5 ja B-solun pinta-antigeenien CD 19 yhteisilmentyminen, CD 20 ja CD 23, alhaiset CD 20:n, CD 79b:n tasot ja pinta-immunoglobuliinien (sIg) alhainen ilmentyminen ja kappa- tai lambda-kevytketjun restriktio. Normaalit kliiniset menetelmät ennusteen arvioimiseksi ovat kliiniset vaiheistusjärjestelmät, jotka ovat kehittäneet Rai et al ja Binet et al.

Apoptoosin taso hematopoieesissa voi antaa tietoa mekanismista, joka on vastuussa kantasolujen ja kantasolujen lisääntymisen säätelystä. Apoptoosin toimintahäiriön on havaittu liittyvän leukemiaan. Apo-1/fas (CD 95) apoptoottisen markkerin ilmentymisen lisääntyminen myeloidisissa progenitorisoluissa CLL-potilailla ja vastaava väheneminen apoptoottisen B-solulymfooma 2:n (BCL-2) estäjän määrässä on kuvattu. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat myös, että CLL-potilaiden lymfosyyttien lisääntyminen voi johtua häiriintyneestä tasapainosta CLL-solujen proliferaation ja apoptoosin välillä, kun taas muutokset apoptoosiin liittyvässä proteiinin ilmentymisessä tunnistetaan kaikissa Binet-vaiheissa CLL:ssä. P38-tasot pienenevät (resistenssi apoptoosille) ja indusoidun myelooisen leukemian solujen erilaistumisproteiinin (Mcl-1) ja surviviinitasot kohoavat B-lymfosyyttien eloonjäämisen parantamiseksi.

Surviviini on apoptoosin proteiini-inhibiittori, joka estää kaspaaseja ja estää solukuoleman. Se ilmentyy voimakkaasti useimmissa syövissä, mukaan lukien hematologiset syövät, ja siihen liittyy huono kliininen lopputulos. Apoptoottinen markkeri CD 95 (Apo-1/fas) ja sen ligandi, CD 95, on kuolemanreseptoriligandi, joka välittää apoptoosin induktiota ylläpitääkseen immuunihomeostaasia ja jolla on kyky välittää apoptoosin induktiota syöpäsoluissa, jolloin syntyy 18 kilodaltonia. fragmentti, jota kutsutaan nimellä kaspaasilla pilkottu sytokeratiini-18 (cCK-18).

Oleokantaalin on osoitettu aiheuttavan sytotoksisuutta ja apoptoosia in vitro ihmisen akuutissa promyelosyyttisessä leukemiassa ja myeloomasoluissa. Se voi myös aiheuttaa primaarista nekroosia ja solujen apoptoosia indusoimalla lysosomaalisten kalvojen läpäisevyyttä eri syöpäsolulinjoissa.

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli öljykantaalin vahvat apoptoottiset ominaisuudet in vitro huomioon ottaen tutkia sen kykyä todellisissa kliinisissä olosuhteissa vaikuttaa hematologiseen ja biokemialliseen profiiliin; myös solujen apoptoottiset markkerit Survivin, cCK18- (kaspaasiaktiivisuusmarkkeri) ja Apo1fas/CD 95 CLL-potilailla, kun otetaan huomioon heidän sairautensa eteneminen. Tästä syystä suoritettiin ruokavaliointerventiotutkimus, jossa verrattiin öljykantaalipitoisen EVOO:n antineoplastisia vaikutuksia CLL-potilailla.

Materiaali ja metodit

Tässä tutkimuksessa kaudella 2017–2018 korjatuista oliiveista (Olea europaea L.) saadun 300 kaupallisen näytteen seulonta suoritettiin kvantitatiivisella NMR-spektroskopia (qNMR) -menetelmällä jotta voidaan tunnistaa öljyt, jotka voisivat täyttää seuraavat kriteerit: Ekstraneitsytöljyssä olisi korkea oleokantaali- ja oleasiinipitoisuus (D1-indeksi) ja alhainen tai jopa ei ollenkaan muiden sekoiridoidikonjugoitujen fenolien (3-8) tai vapaan tyrosolin ja hydroksityrosolin pitoisuus. Erityisesti öljyä, jossa on runsaasti Oleokantaali saatiin Lianolia Kerkyras -lajikkeen Monovarietal-öljystä, jonka toimitti "The Governor" Company Agios Matthaiosista, Korfusta, Kreikasta. Tämä öljy sisälsi: oleokantaalia 416±7 mg/kg, oleasiinia 284±10 mg/kg, tyrosolia < 10 mg/kg, hydroksityrosolia < 10 mg/kg (D1 = 700 mg/kg). On syytä mainita, että qNMR-analyysin lisäksi hydroksityrosoli- ja tyrosolipitoisuus mitattiin myös oliiviöljyn biofenolien mittaamiseen tarkoitetulla IOC-standardimenetelmällä. Valitut EVOOt säilytettiin välittömästi analyysin jälkeen ja tutkimusjakson alkuun asti 4 celsiusasteessa mahdollisten kemiallisen koostumuksen muutosten minimoimiseksi.

Koehenkilöt 21 potilasta Lakonian yleissairaalan (Kreikka) hematologisesta klinikalta otettiin mukaan ruokavalioon. CLL-diagnoosi vahvistettiin standardikriteereillä. Potilaat olivat hoitamattomia, Rai-vaiheessa 0-II.

Ruokavaliointerventio Pilottitutkimuksen alussa jokaisen potilaan anamneesista kirjattiin lääketieteelliset tutkimukset kolmannen ja kuudennen kuukauden ajan ennen ruokavaliohoitoa. Kliiniset tiedot ennen ravitsemustoimenpiteitä koskevat hematologista profiilia, biokemiallisia tutkimuksia mukaan lukien lipideeminen profiili, paastoglukoosi, maksan ja munuaisten toimintamerkkiaineet sekä tiedot veriydinbiopsiasta, neoplastisista markkereista ja immunofenotyyppistä. Myös lääkehoitoa tai muita sairauksia kirjattiin.

Pilottiravitsemusintervention alussa 21 CLL-potilaan ryhmä söi ennen ateriaa 40 ml/vrk olekantaalia ja oleasiinia sisältävää EVOO:ta (OC/OL) 6 kuukauden ajan. A-EVOO:ssa tutkituista hematologisista, biokemiallisista ja molekyylimarkkereista. Kulutetun EVOO OC/OL:n määrä valittiin aikaisemman tutkimuksen mukaan. (15) Potilaita neuvottiin jatkamaan säännöllistä ruokavaliotaan; heidän noudattamistaan ​​tutkimusprotokollasta arvioitiin kahdella 24 tunnin puhelinvedolla kahden viikon välein.

Perifeeriset verinäytteet 21 potilaasta, joilla oli CLL, kerättiin alussa, 3 kuukauden kuluttua ja 6 kuukauden kuluttua ruokavaliointervention alusta. Kokoverenkuva ja täydelliset biokemialliset testit suoritettiin paastoglukoosin, veren lipidiprofiilin sekä maksan ja munuaisten toiminnan merkkiaineiden määrittämiseksi. Seerumianalyysit suoritettiin käyttäen samaa menettelyä ja samassa laboratoriossa käyttämällä biokemiallista analysaattoria (Olympus AU-600, Olympus, Tokio, Japani).

Kaupallisesti saatavaa entsyymi-immunosorbenttimääritystä (ELISA) käytettiin toimittajan ohjeiden mukaisesti apoptoottisten markkerien M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Ruotsi), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado USA) määrittämiseen. ) ja antiapoptoottinen markkeri Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) kaikkien potilaiden plasmanäytteiksi kaikissa tutkituissa ajankohtana.

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä SPSS v.24:ää (SPSS Inc., Chicago, IL. USA) ja merkitsevyystasoksi asetettiin 0,05. Aluksi näytteestä tehtiin kuvaava analyysi iän, sukupuolen, kliinisen, biokemiallisen ja molekyylimarkkerien suhteen. Markkerien havaittiin olevan vinossa p < 0,05 merkitsevyystasolla, kun ne tarkistettiin Kolmogorov-Smirnov-testillä. Tästä syystä ei-parametrista Mann-Whitney U -testiä käytettiin selvittämään erot interventio- ja kontrolliryhmän välillä.

Intervention aikavälien väliset erot arvioitiin Friedmanin ei-parametrisella testillä, jota seurasi Dunnin testi moninkertaista vertailua varten. Lopuksi molekyylimarkkerien korrelaatiot tutkimukseen sisältyvien kliinisten parametrien kanssa tarkistettiin Spearman Rholla.