Intervención Dietética Con AOVE Alto Fenólico en LLC

El aceite de oliva virgen extra (AOVE) es el principal componente de la dieta mediterránea. Se han detectado más de 200 compuestos químicos diferentes en el aceite de oliva, incluidos ácidos grasos, esteroles, carotenoides, terpenoides, flavonoides, tocoferoles y polifenoles de oliva. El aceite de oliva virgen contiene una variedad de componentes fenólicos importantes, principalmente correspondientes a los compuestos tirosol, hidroxitirosol, oleocantal (OC), oleacina (OL), ligastrosida y agliconas de oleuropeína. ha sido aislado del AOVE, presenta una amplia gama de efectos biológicos que incluyen actividades antioxidantes, antiinflamatorias, anticancerígenas, neuroprotectoras y antidiabéticas y por esta razón ha atraído más atención científica.

La leucemia linfocítica crónica (LLC), la leucemia en adultos diagnosticada con mayor frecuencia en los países occidentales, es responsable de aproximadamente 1 de cada 4 casos de todas las leucemias. Se caracteriza por la acumulación de células B monoclonales en la médula ósea, sangre periférica, tejidos linfáticos y bazo, siendo a menudo asintomática y de desarrollo lento. Los pacientes con LLC no siempre requieren tratamiento inmediato. Sin embargo, los pacientes que presentan síntomas tienen una mediana de supervivencia aproximada que oscila entre los 18 meses y los 6 años, según el estadio clínico. Los criterios para el diagnóstico de LLC son linfocitos B monoclonales ≥5000 linfocitos/ml en sangre periférica durante al menos 3 meses, prolinfocitos ≤55 %, coexpresión del claster de diferenciación (CD)5 y antígenos de superficie de células B CD 19, CD 20 y CD 23, niveles bajos de CD 20, CD 79b y baja expresión de inmunoglobulinas de superficie (sIg), y restricción de cadenas ligeras kappa o lambda. Los procedimientos clínicos estándar para estimar el pronóstico son los sistemas de estadificación clínica desarrollados por Rai et al y Binet et al.

El nivel de apoptosis en la hematopoyesis puede proporcionar información sobre el mecanismo responsable de la regulación de la proliferación de células madre y progenitoras. Se ha encontrado que la disfunción de la apoptosis está asociada con la leucemia. Se ha descrito un aumento en la expresión del marcador apoptótico Apo-1/fas (CD 95) en células progenitoras mieloides en pacientes con LLC y una disminución correspondiente en el inhibidor del linfoma 2 de células B apoptóticas (BCL-2). Estudios recientes también mostraron que el aumento de los linfocitos de los pacientes con LLC puede deberse al equilibrio alterado entre la proliferación y la apoptosis de las células de la LLC, mientras que los cambios en la expresión de proteínas relacionadas con la apoptosis se reconocen durante todas las etapas de Binet en la LLC. Los niveles de p38 se reducen (resistencia a la apoptosis) y la proteína de diferenciación celular de leucemia mieloide inducida (Mcl-1) y los niveles de survivina se elevan, para mejorar la supervivencia de los linfocitos B.

Survivin es una proteína inhibidora de la apoptosis que inhibe las caspasas y bloquea la muerte celular. Se expresa en gran medida en la mayoría de los cánceres, incluidos los hematológicos, y se asocia con un mal resultado clínico. El marcador apoptótico CD 95 (Apo-1/fas) y su ligando, CD 95, es un ligando del receptor de muerte que interviene en la inducción de la apoptosis para mantener la homeostasis inmunitaria y tiene la capacidad de mediar en la inducción de la apoptosis en células cancerosas, generando un 18-kilodalton fragmento denominado citoqueratina-18 escindida por caspasa (cCK-18).

Se ha demostrado que el oleocanthal induce citotoxicidad y apoptosis in vitro en leucemia promielocítica aguda humana y en células de mieloma. También puede causar necrosis primaria y apoptosis celular al inducir la permeabilidad de la membrana lisosomal en diferentes líneas celulares de cáncer.

Teniendo en cuenta las fuertes propiedades apoptóticas del oleocantal in vitro, el objetivo de este estudio fue investigar su capacidad, en entornos clínicos reales, para afectar el perfil hematológico y bioquímico; también los marcadores apoptóticos celulares Survivin, cCK18- (marcador de actividad de caspasa) y Apo1fas/CD 95 en pacientes con LLC después de considerar la progresión de su enfermedad. Por este motivo se realizó un estudio de intervención dietética comparando los efectos antineoplásicos de un AOVE rico en oleocantal en pacientes con LLC.

Material y métodos

En el presente estudio, se realizó un cribado de 300 muestras comerciales (seleccionadas entre una base de datos de >3000 muestras), obtenidas de aceitunas (Olea europaea L.) cosechadas en la temporada 2017-2018, mediante el método de espectroscopia de RMN cuantitativa (qNMR) en para identificar aceites que pudieran cumplir los siguientes criterios: El aceite extravirgen tendría un alto contenido en oleocantal y oleacina (índice D1) y bajo o incluso nulo contenido en otros fenoles conjugados secoiridoides (3-8) o tirosol libre e hidroxitirosol Específicamente Aceite rico en El oleocanthal se obtuvo a partir de aceite monovarietal de la variedad Lianolia Kerkyras proporcionado por "The Governor" Company de Agios Matthaios, Corfú, Grecia. Este aceite contenía: Oleocantal 416±7 mg/Kg, oleacina 284±10 mg/Kg, Tirosol < 10 mg/Kg, Hidroxitirosol < 10 mg/Kg (D1 = 700 mg/Kg). Cabe mencionar que, además del análisis qNMR, también se midió el contenido de hidroxitirosol y tirosol mediante el método estándar IOC para la medición de biofenoles del aceite de oliva. Los AOVE seleccionados inmediatamente después de su análisis y hasta el inicio del periodo de estudio se almacenaron a 4 grados centígrados para minimizar posibles alteraciones en la composición química.

Sujetos Veintiún pacientes de la clínica hematológica del Hospital General de Lakonia (Grecia) se inscribieron para participar en la intervención dietética. El diagnóstico de LLC se confirmó con los criterios estándar. Los pacientes no recibieron tratamiento, en estadio Rai 0 a II.

Intervención dietética Al inicio del estudio piloto se registraron los exámenes médicos de la historia de cada paciente durante el tercer y sexto mes antes de la intervención dietética. La historia clínica antes de la intervención dietética se refiere al perfil hematológico, exámenes bioquímicos que incluyen, perfil lipidémico, glucosa en ayunas, marcadores de función hepática y renal, así como datos sobre biopsia de médula ósea, marcadores neoplásicos e inmunofenotipo. También se registró el tratamiento farmacológico o las comorbilidades.

Al inicio de la intervención dietética piloto un grupo de 21 pacientes con LLC consumió antes de las comidas, 40 ml/día de AOVE rico en olecantal y oleacina (OC/OL) durante 6 meses, con el fin de explorar el efecto del consumo dietético. del AOVE sobre los marcadores hematológicos, bioquímicos y moleculares estudiados. La cantidad de AOVE consumido OC/OL se eligió según un estudio previo. (15) Se aconsejó a los pacientes que continuaran con su dieta regular; su adherencia al protocolo de estudio se evaluó mediante dos llamadas telefónicas de 24 horas cada dos semanas.

Se recogieron muestras de sangre periférica de los 21 pacientes con LLC al inicio, a los 3 meses ya los 6 meses desde el inicio de la intervención dietética. Se realizaron hemogramas y pruebas bioquímicas completas para glucosa en ayunas, perfil de lípidos en sangre y marcadores de función hepática y renal. Los análisis de suero se realizaron utilizando el mismo procedimiento y en el mismo laboratorio con el uso de un analizador bioquímico (Olympus AU-600, Olympus, Tokio, Japón).

Se utilizó un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) comercialmente disponible de acuerdo con las instrucciones del proveedor para analizar los marcadores apoptóticos M30 Apoptosense-cCK18 (VLVbio Hästholmsvägen, Suecia), Apo-1/Fas/CD 95 (Novus Biologicals, Colorado, EE. UU. ) y el marcador antiapoptótico Survivin (OriGene Technologies, Inc USA) en muestras de plasma de todos los pacientes en todos los puntos de tiempo estudiados.

El análisis estadístico se realizó con SPSS v.24 (SPSS Inc., Chicago, IL. UU.) y el nivel de significación se fijó en 0,05. Inicialmente se realizó un análisis descriptivo de la muestra en cuanto a edad, sexo, marcadores clínicos, bioquímicos y moleculares. Se encontró que los marcadores estaban sesgados a un nivel de significación de p < 0,05 cuando se verificaron mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Por lo tanto, se utilizó la prueba no paramétrica U de Mann-Whitney para averiguar las diferencias entre el grupo de intervención y el de control.

Las diferencias entre los intervalos de tiempo de la intervención se evaluaron con la prueba no paramétrica de Friedman seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn. Finalmente, las correlaciones de los marcadores moleculares con los parámetros clínicos incluidos en el estudio se comprobaron con Spearman Rho.