重症 COVID-19 患者恢复期血浆疗法的疗效

对于捐助者：

微量滴定板将在 4°C 下用 4 μg/mL 重组 SARS-CoV-2 RBD（受体结合域）蛋白（每孔 50 μL）包被过夜。 板将用含有 0.1% vol/vol Tween-20(PBST) 的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 洗涤 3 次，并用封闭液（含有 2% wt/vol 脱脂奶粉的 PBS）在 37° 下封闭 2 小时C。 然后用 PBST 洗涤板。 将血清样品稀释到 PBS 中作为初始浓度的 200 倍，并将血清的连续 3 倍稀释液添加到孔中，并在 37°C 下孵育 60 分钟。 3次洗涤后，每板分别加入100 μL辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG（用于IgG抗体滴度检测）和IgM（用于IgM抗体滴度检测）抗体溶液，37℃孵育60分钟。 洗涤 5 次后，室温避光加入 100 μL 四甲基联苯胺底物。 15 分钟后，用 2MH2SO4 溶液（硫酸）终止反应。 将在 450nm 处测量吸光度。 所有样品将一式三份运行。 IgG 滴度将通过终点稀释来确定。

血清中和试验 Vero 细胞 (104) 将在感染前 24 小时接种在 96 孔板中。 在感染当天，细胞将被清洗两次。 来自患者的血清样本将在 56°C 下孵育 30 分钟，然后在细胞培养基（改良的鹰培养基）中稀释 2 倍。 将等分试样 (40 μL) 的稀释血清样品（从 2 倍到 2056 倍）添加到 50 μL 细胞培养基中，该培养基含有 50 倍于 96 孔板中病毒株的组织培养感染剂量 (TCID50)，并且在 37 °C 的 CO2 5% vol/vol 中孵育 2 小时。 将病毒抗体混合物添加到 96 孔板中的细胞中，并将板在 37°C 下孵育，孵育 5 天后用显微镜检查细胞病变效应。 显示 SARS-CoV-2 抑制活性的血清的最高稀释度将记录为中和抗体滴度。 将使用来自健康志愿者的阴性对照样品一式三份进行测定。

对于收件人：

将获得每位接受者的血清，并在恢复期血浆输注前一天测试酶联免疫吸附测定 (ELISA) 和中和抗体滴度。 如果可能，将在第0天、第1天、第3天和第7天获得患者恢复期血浆输注前后受体结合域特异性IgG滴度和中和抗体滴度的变化。

所有纳入的患者将被随机分配接受随机供体血浆与恢复期血浆的标准药物治疗（支持疗法）和标准药物治疗被记录下来。 通过 Charlson 合并症指数和急性生理学和慢性健康评估 II (APACHE II) 衡量的合并症的详细信息。 将记录横断面成像、胸部 X 光、细菌或真菌合并感染的详细信息以及抗生素治疗的详细信息。 将记录包括急性肾损伤、急性冠脉综合征、心肌炎、急性呼吸窘迫综合征和院内感染在内的并发症的发展。 高流量氧气、无创和有创通气的使用将遵循标准指南并进行记录。 将记录所有入组患者的抗病毒治疗详情，包括口服奥司他韦、羟氯喹和静脉注射类固醇。