A lábadozó plazmaterápia hatékonysága súlyosan beteg COVID-19 betegeknél

Adományozóknak:

A mikrotiterlemezeket egy éjszakán át 4 °C-on bevonjuk 4 μg/ml rekombináns SARS-CoV-2 RBD (receptorkötő domén) fehérjével (50 μL lyukanként). A lemezeket háromszor mossuk foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), amely 0,1 térfogat% Tween-20-at (PBST) tartalmaz, és blokkolóoldattal blokkoljuk (2 tömeg% zsírmentes száraz tejet tartalmazó PBS) 2 órán át 37 °C-on. C. A lemezeket ezután PBST-vel mossuk. A szérummintákat 200-szorosra hígítjuk PBS-sel kezdeti koncentrációként, és háromszoros sorozathígításokat adunk a lyukakhoz, és 37 °C-on 60 percig inkubáljuk. Három mosás után 100 μl torma-peroxidázzal konjugált kecske anti-humán IgG (IgG antitest titer kimutatására) és IgM (IgM antitest titer kimutatására) antitest oldatot adunk minden lemezre, és 37 °C-on inkubáljuk. 60 perc. 5 mosás után 100 μl tetrametilbenzidin szubsztrátot adunk hozzá szobahőmérsékleten, sötétben. 15 perc elteltével a reakciót 2MH2SO4-oldattal (kénsavas) leállítjuk. Az abszorbanciát 450 nm-en mérjük. Minden mintát három példányban futtatunk. Az IgG-titereket végponthígítással határozzuk meg.

Szérumneutralizációs vizsgálat A Vero sejteket (104) 24 órával a fertőzés előtt oltjuk be egy 96 lyukú lemezre. A fertőzés napján a sejteket kétszer mossuk. A betegek szérummintáit 56 °C-on 30 percig inkubáljuk, majd kétszeresére hígítjuk sejttenyésztő tápközegben (módosított sas táptalaj). A hígított szérumminták alikvotjait (40 μL) (2-szerestől 2056-szorosig) adjuk 50 µl sejttenyésztő táptalajhoz, amely a vírustörzs szövettenyésztési fertőző dózisának (TCID50) 50-szeresét tartalmazza egy 96 lyukú lemezen, és 37 °C-on 2 órán át 5 térfogat%-os CO2-ban inkubáltuk. Vírusantitest keveréket adnak a sejtekhez 96 lyukú lemezeken, és a lemezeket 37 °C-on inkubálják a citopatikus hatás mikroszkópos vizsgálatával 5 napos inkubáció után. A SARS-CoV-2 gátlási aktivitását mutató szérum legmagasabb hígítása kerül rögzítésre semlegesítő antitest-titerként. A vizsgálatokat három párhuzamosban, egészséges önkéntesekből származó negatív kontrollmintákkal végezzük.

Címzetteknek:

Minden egyes recipiens szérumát begyűjtik, és az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) és a neutralizáló antitest-titereket egy nappal a lábadozó plazma transzfúzió előtt tesztelik. A receptorkötő doménspecifikus IgG-titer és a neutralizáló antitest-titer változásait a lábadozó plazmatranszfúzió előtt és után a betegeknél a 0., 1., 3. és 7. napon lehet mérni.

Az összes bevont beteget véletlenszerűen besorolják, hogy vagy standard orvosi terápiát (szupportív terápiát) kapjanak véletlenszerű donor plazmával, szemben a lábadozó plazmával és standard orvosi terápiával. Az összes bevont beteg klinikai információi, beleértve a tünetek megjelenésekor, a kórházba való bejutás idejét és a tüdőtünetek kialakulását. rögzíteni kell. A társbetegségek részletei a Charlson-komorbiditási index és az Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II (APACHE II) alapján. Rögzítésre kerül a keresztmetszeti képalkotás, a mellkasröntgen, a bakteriális vagy gombás társfertőzések és az antibiotikum-kezelés részletei. A szövődmények kialakulását, beleértve az akut vesekárosodást, az akut koszorúér-szindrómát, a szívizomgyulladást, az akut respiratorikus distressz szindrómát és a nozokomiális fertőzést, rögzítik. A nagy áramlású oxigén, a non-invazív és invazív lélegeztetés használata szabványos irányelveket követ, és rögzítésre kerül. A vírusellenes kezelés részleteit, beleértve az orális oszeltamivirt, hidroxiklorokint és az intravénás szteroidok alkalmazását, minden beiratkozott betegnél feljegyezzük.