Toipilasplasmahoidon teho vaikeasti sairailla COVID-19-potilailla

Lahjoittajille:

Mikrotiitterilevyt päällystetään yön yli 4 °C:ssa 4 μg/ml rekombinantti SARS-CoV-2 RBD (reseptoria sitova domeeni) -proteiineilla (50 μl per kuoppa). Levyt pestään 3 kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS), joka sisältää 0,1 tilavuusprosenttia Tween-20:tä (PBST) ja estetään estoliuoksella (PBS, joka sisältää 2 % paino/tilavuus rasvatonta kuivamaitoa) 2 tunnin ajan 37 °C:ssa. C. Levyt pestään sitten PBST:llä. Seeruminäytteet laimennetaan 200-kertaisiksi PBS:ään alkupitoisuutena, ja seerumin sarjalaimennoksia lisätään kuoppiin ja inkuboidaan 37 °C:ssa 60 minuuttia. Kolmen pesun jälkeen jokaiselle levylle lisätään 100 μl piparjuuriperoksidaasilla konjugoitua vuohen anti-ihmis-IgG- (IgG-vasta-ainetiitterin havaitsemiseen) ja IgM-vasta-aine- (IgM-vasta-ainetiitterin havaitsemiseen) vasta-aineliuosta, vastaavasti, ja inkuboidaan 37 °C:ssa. 60 minuuttia. Viiden pesun jälkeen lisätään 100 µl tetrametyylibentsidiinisubstraattia huoneenlämpötilassa pimeässä. 15 minuutin kuluttua reaktio pysäytetään 2MH2S04-liuoksella (rikkihappo). Absorbanssi mitataan 450 nm:ssä. Kaikki näytteet ajetaan kolmena kappaleena. IgG-tiitterit määritetään päätepistelaimennuksella.

Seerumin neutralointimääritys Vero-solut (104) kylvetään 24 tuntia ennen infektiota 96-kuoppaiselle levylle. Infektiopäivänä solut pestään kahdesti. Potilaiden seeruminäytteitä inkuboidaan 56 °C:ssa 30 minuuttia ja laimennetaan sitten 2-kertaisesti soluviljelyalustaan ​​(modifioitu kotkaelatusaine). Alikvootit (40 μL) laimennettuja seeruminäytteitä (2-kertaisesti 2056-kertaisesti) lisätään 50 μl:aan soluviljelyalustaa, joka sisältää 50-kertaisen viruskannan kudosviljelyn infektoivan annoksen (TCID50) 96-kuoppaiselle levylle ja inkuboitiin 37 °C:ssa 2 tuntia CO2:ssa 5 % tilavuus/tilavuus. Virusvasta-aineseos lisätään soluihin 96-kuoppalevyillä ja levyjä inkuboidaan 37 °C:ssa mikroskooppisella tutkimuksella sytopaattisen vaikutuksen varalta 5 päivän inkubaation jälkeen. Seerumin suurin laimennos, joka osoitti SARS-CoV-2:ta estävää aktiivisuutta, kirjataan neutraloivaksi vasta-ainetiitteriksi. Määritykset suoritetaan kolmena rinnakkaisena negatiivisilla kontrollinäytteillä terveiltä vapaaehtoisilta.

Vastaanottajille:

Jokaisen vastaanottajan seerumi hankitaan ja entsyymikytkentäinen immunosorbenttimääritys (ELISA) ja neutraloivat vasta-ainetiitterit testataan päivää ennen toipilasplasmansiirtoa. Muutokset reseptorisitoutumisdomeenispesifisessä IgG-tiitterissä ja neutraloivien vasta-aineiden tiittereissä ennen ja jälkeen toipilaan plasmansiirron potilailla saadaan päivinä 0, päivänä 1, päivänä 3 ja päivänä 7, jos mahdollista.

Kaikki mukana olevat potilaat satunnaistettaisiin saamaan joko tavanomaista lääketieteellistä hoitoa (tukihoitoa) satunnaisen luovuttajan plasmalla verrattuna toipilaan plasmaan ja tavanomaiseen lääketieteelliseen hoitoon. Kliiniset tiedot kaikista mukana olevista potilaista, mukaan lukien oireet esittelyssä, aika sairaalaan saapumiseen ja keuhkooireiden kehittyminen tallennetaan. Yksityiskohdat rinnakkaissairauksista mitattuna Charlsonin rinnakkaissairauksien indeksillä ja Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II (APACHE II) -indeksillä. Yksityiskohdat poikkileikkauskuvauksesta, rintakehän röntgenkuvauksesta, bakteeri- tai sieni-yhteisinfektioista ja antibioottihoidosta kirjataan. Komplikaatioiden kehittyminen, mukaan lukien akuutti munuaisvaurio, akuutti sepelvaltimotauti, sydänlihastulehdus, akuutti hengitysvaikeusoireyhtymä ja sairaalainfektio, kirjataan. Korkeavirtaushapen, ei-invasiivisen ja invasiivisen ventilaation käyttö noudattaa standardiohjeita ja kirjataan. Yksityiskohdat antiviraalisesta hoidosta, mukaan lukien suun kautta otettava oseltamiviiri, hydroksiklorokiini ja suonensisäisten steroidien käyttö, kirjataan kaikille potilaille.