严重 COVID-19 感染的恢复期血浆疗法

研究的基本原理 目前尚无针对 COVID-19 感染的特定治疗方法。 支持治疗和浓氧是唯一的治疗方法。 研究人员已经开展了 180 多项潜在 COVID-19 治疗的临床试验以供招募，并且将近 150 项可能很快开始。 然而，迄今为止，尚未完成和报告任何临床干预试验。 根据轶事（小型案例系列），一些有前途的药物可能是阿奇霉素 - 羟氯喹组合、洛匹那韦/利托那韦、托珠单抗、拉姆地西韦、法维力那韦等。 CP 输血是另一种有前途的选择，之前曾在 SARS-CoV、MERS-CoV、流感和埃博拉病毒感染中尝试过。 它对 COVID-19 的有效性尚未得到探索。 最近发布的案例系列包含十个预测有希望结果的案例。 因此，迫切需要探索一项探讨耐受性、疗效和剂量反应的II期RCT。

孟加拉国的病例开始升级，确诊病例数已突破千分之一。 考虑到上述其他抗病毒和生物制剂的成本和短缺，我们的许多患者不可避免地可能买不起或买不到。 然而，CP 可以很容易地从康复患者身上收集，并且可以很容易地进行处理以用于抵抗活动性感染。 对于像我们这样的国家来说，这可能是一种有效且廉价的治疗选择，以应对这场灾难。 因此，对 CP 输注进行 II 期 RCT 是时间的要求。

研究问题：

与标准治疗相比，CP 输血在治疗重症 COVID-19 患者方面是否可以耐受且有效？

目标：

总体目标：

评估重症 COVID-19 患者 CP 输注的耐受性、疗效和剂量反应

具体的目标：

1. 确定 CP 治疗的适当有效剂量
2. 确定治疗的疗效及其终点
3. 检查重症 COVID-19 患者 CP 输注后的临床改善
4. 评估重症 COVID-19 患者 CP 输注后的实验室改善情况

学习规划：

II期随机对照试验

学习地点：

Bangabandhu Sheikh Mujib 医科大学 (BSMMU)、Sheikh Hasina 烧伤整形外科研究所、达卡医学院、Mugda 医学院和医学生物技术中心

学习时段：

2020年5月-2020年10月（六个月）

研究人群：

COVID=19 名在 BSMMU 发热门诊或任何其他政府指定实验室根据 RT-PCR 诊断并在 DMCH、MuMC 和 BSMMU 收治的阳性患者。

随机化和盲法：

随机化将由与患者的护理或评估无关的人员通过随机数字表进行。 分配将隐藏在按顺序编号、不透明、密封的信封中。 在此试点研究中，CP 或标准护理不会被设盲。 但是，将使用客观的自动化方法记录主要结果（氧饱和度、PaO2/FiO2 和 BP）；研究人员将无法影响这些数据的记录。

样本量：

之前没有进行过类似的研究。 因此，没有可用于生成样本量计算的可用数据。 这项试点研究需要提供一些关于有效性和安全性的初步数据，以便设计更大规模的研究。

研究仪器

1. 评估社会人口数据的一般问卷。
2. 临床发现清单
3. 调查结果清单。

变量的测量

1. 社会人口变量

   • 年龄
   • 性别（男/女）
   • 生活区（城市/农村）
   • 职业

2. 临床变量：

   • 症状
   • 收缩压（毫米汞柱）
   • 舒张压（毫米汞柱）
   • 温度
   • 呼吸频率
   • 心率
   • 全球控制系统

3. 实验室变量

   • 客户关系研究
   • 加拿大广播公司
   • 协调研究计划
   • S.铁蛋白
   • SGPT
   • SGOT
   • 抗体滴度

单采血浆的收集程序

1. 捐献前筛查：首先从外周静脉部位抽取3ml血液，最好是手背，保存在EDTA试管中用于进一步检测。 血型将通过使用已知的抗血清来确认。 5种疾病（HBs Ag 、抗HCV、HIV、梅毒和疟疾）的筛查测试将通过设备方法进行测试。 自动分析仪将计算全血细胞计数。 如果一切顺利，将进行下一步。
2. 安全性评估： 将通过常规方法（标准数字体重和身高秤）测量供体的体重和身高。 为防止柠檬酸盐毒性或低血钙并发症（抽搐、麻木、恶心、轻度呼吸困难等），在开始手术前，将向每位供体提供 500 毫克碳酸钙。 将每隔 10 分钟监测一次血压和脉搏，以在整个过程中采取预防措施。 重量、身高和 CBC 参数将在单采机中给出以供设置。 将选择可见且易于触及的对肘静脉进行静脉穿刺。 在穿刺静脉之前，至少在静脉穿刺区域上方施加 50-60 毫米的汞压力，以保持持续压力。 一切准备就绪后，将通过在目标静脉中穿刺单针开始手术。

恢复期血浆（CP）输注步骤 在给患者输注CP之前，会记录血压、脉搏、体温、呼吸频率。 它可以通过中心静脉导管或外周通道给药。 如果选择外周静脉部位，则至少应确认 21g 针头。 开始输血前应确认血型和交叉配血。 当没有笔误的机会时，可以开始以 100 毫升/小时的速度输注 CP。

安全评估：

如果患者发烧，则应保留温度图表。 当体温从基线升高 2 华氏度以上时，应停止输血，并根据体重给予退热药。 暂停 10 分钟后，即可开始输液。 如果患者感到特定区域或全身过度瘙痒，则将给予注射剂马来酸氯苯那敏。 类固醇将被保留用于治疗严重的呼吸窘迫或无法控制的瘙痒。 每隔 30 分钟定期监测血压、脉搏和呼吸。

抗体滴度测定步骤

SARS-CoV-2 IgG 抗体效价将根据以下方案通过 ELISA 进行检测：

1. 首先将血清/血浆样品 (10 μL) 通过连续稀释稀释至 1:40、1:80、1:160、1:320 和 1:640。
2. 将100μl样品稀释剂加入到预先涂有SARS-CoV-2抗原的每个孔中（空白和对照孔除外）。
3. 然后加入 10μl 标本。 将 100μl 对照直接添加到指定的孔中。 所有样品将一式两份运行。
4. 板将盖上板盖并在 37°C 下孵育 30 分钟。
5. 孵育结束时，每个孔将用稀释的洗涤缓冲液洗涤 5 次。
6. 除空白外，每孔加入 100μl 结合物。
7. 在 37°C 下孵育 20 分钟。
8. 孵育结束时，每个孔将用稀释的洗涤缓冲液洗涤 5 次。
9. 每孔加入 50μl 底物溶液 A 和 50μl 底物溶液 B。 在 37°C 避光孵育 10 分钟。
10. 每孔加入 50μl 终止液。
11. 酶标仪将用空白孔校准，并在 450nm 处读取吸光度。
12. 样品OD值≥cutoff OD值表示IgG抗体阳性。
13. IgG 抗体滴度将通过终点稀释来确定。

由于孟加拉国缺乏 COVID-19 质粒和全球短缺，每个捐赠者的 2 ml seum 将被保存，然后运往牛津大学 peter Medawar 大楼进行病原体研究。 牛津大学的研究合作者将进行中和抗体滴度测定，随后研究人员会将它们与每位捐赠者进行匹配。 中和抗体滴度测试的费用将由牛津同事管理。

统计分析：

Graphpad Prism v 7.0 将用于分析。 人口统计学因素和临床特征将通过分类变量的计数 (%) 和连续变量的中位数（四分位数间距 [IQR]）进行总结，因为预计没有一个是正态分布的。 主要分析将在意向治疗的基础上进行。 对于主要结果，研究人员将使用单向方差分析比较三组之间的平均值。 研究人员还将在 Prism 评估（对数秩 Mantel-Cox 检验）持续饱和度 >93% 和 PaO2/FiO2<200 mm Hg 的时间进行事后分析，这些时间在注册期间、注册后 3 天和 7 天进行一次检查观点。 对于非参数次要结果，将使用 Kruskal-Wallis 检验比较所有组；如果显着，研究人员随后计划使用非参数 Mann-Whitney 检验进行成对比较。 对于参数结果，研究人员比较了两对之间的比值比。

设施和程序：

RT-PCR 和其他与研究相关的测试将在 BSMMU 进行。 BSMMU 发热门诊已经治疗了 1200 多例 COVID-19 阳性病例。 将从该患者库中跟踪潜在的捐赠者。 同意并表示同意的捐赠者将被送到 SHBPSI 的输血医学部门。 将收集 5 毫升血浆并送到 CMBT 实验室进行基于 ELISA 的抗体滴度。 如果滴度达到所需水平（1:320 及以上），则将在第二天收集 200 毫升或 400 毫升单采血浆（取决于供体的可用性和同意）。 还将采集5ml血清送入牛津大学Peter Medawar病原体研究所进行中和抗体滴度检测。 这将在稍后发送并与捐赠者匹配。 样品将根据材料转让协议 (MTA) 进行运输。 该项目的共同负责人 Fazle Rabbi Chowdhury 博士拥有向海外运送样品的必要许可。 在最后阶段，CP 将根据输血需求移交给 DMCH 和 MuMCH 的临床团队。 临床团队将确保 CP 输注前后的实验室样本采集，并将数据记录在病例记录表中。 BSMMU 的实验室医学团队将支持临床团队进行实验室测试。