Реконвалесцентная плазмотерапия при тяжелой инфекции COVID-19

Обоснование исследования В настоящее время специфического лечения инфекции COVID-19 не существует. Поддерживающее лечение наряду с концентрированным кислородом является единственным средством лечения. Исследователи уже открыли более 180 клинических испытаний потенциальных методов лечения COVID-19 для набора, и почти 150 могут начаться в ближайшее время. Однако на сегодняшний день ни одно клиническое исследование не было завершено и о нем не сообщалось. Судя по анекдотам (небольшая серия случаев), одними из перспективных препаратов могут быть комбинация азитромицина и гидроксихлорохина, лопинавир/ритонавир, тоцилизумаб, рамдисивир, фавиринапир и другие. Переливание ЦП является еще одним многообещающим вариантом, который ранее был опробован при вирусных инфекциях SARS-CoV, MERS-CoV, гриппе и лихорадке Эбола. Его эффективность против COVID-19 еще не изучена. Недавно опубликованная серия случаев состоит из десяти случаев, в которых прогнозируются многообещающие результаты. Поэтому необходимо срочно провести РКИ фазы II для изучения переносимости, эффективности и доза-реакция.

Случаи начали обостряться в Бангладеш, и число подтвержденных случаев уже перешагнуло тысячу отметок. Учитывая стоимость и нехватку других вышеупомянутых противовирусных и биологических препаратов, неизбежно, что многие из наших пациентов, возможно, не могли себе позволить или получить их. Однако CP можно легко собрать у выздоровевших пациентов и легко обработать для использования против активной инфекции. Это может быть эффективным и дешевым вариантом лечения для такой страны, как наша, перед лицом этой катастрофы. Поэтому проведение фазы II РКИ по переливанию ЦП требует времени.

Исследовать вопрос:

Является ли переливание CP переносимым и эффективным при лечении тяжелых пациентов с COVID-19 по сравнению со стандартным лечением?

Цели:

Общая цель:

Оценить переносимость, эффективность и доза-реакция на переливание ЦП у пациентов с тяжелым течением COVID-19.

Конкретные цели:

1. Определить подходящую эффективную дозу терапии ЦП
2. Для определения эффективности терапии с их конечной точкой
3. Изучить клиническое улучшение после переливания ЦП у пациентов с тяжелой формой COVID-19.
4. Оценить улучшение лабораторных показателей после трансфузии ЦП у пациентов с тяжелым течением COVID-19.

Дизайн исследования:

Фаза II РКИ

Место учебы:

Бангабандху Медицинский университет шейха Муджиба (BSMMU), Институт ожоговой и пластической хирургии шейха Хасины, Медицинский колледж Дакки, Медицинский колледж Мугда и Центр медицинских биотехнологий

Период обучения:

май 2020 г. - октябрь 2020 г. (Шесть месяцев)

Исследуемая популяция:

COVID=19-положительные пациенты, которым поставлен диагноз на основе ОТ-ПЦР в клинике лихорадки BSMMU или любой другой назначенной государством лаборатории и госпитализированы в DMCH, MuMC и BSMMU.

Рандомизация и слепой метод:

Рандомизация будет проводиться кем-то, не связанным с уходом за пациентами или их оценкой, с помощью таблицы случайных чисел. Распределения будут скрыты в последовательно пронумерованных, непрозрачных, запечатанных конвертах. В этом пилотном исследовании CP или стандартная помощь не будут ослеплены. Однако первичный результат (насыщение кислородом, PaO2/FiO2 и АД) будет регистрироваться с использованием объективного автоматизированного метода; исследовательский персонал не сможет повлиять на запись этих данных.

Размер образца:

Ранее подобное исследование не проводилось. Поэтому отсутствуют данные, которые можно было бы использовать для расчета размера выборки. Это пилотное исследование необходимо для получения некоторых исходных данных об эффективности и безопасности, которые позволят разработать более крупное исследование.

Инструменты исследования

1. Общая анкета для оценки социально-демографических данных.
2. Контрольный список клинических результатов
3. Контрольный список результатов расследования.

Меры переменных

1. Социально-демографические переменные

   • Возраст
   • Пол Мужской Женский)
   • Жилая площадь (городская/сельская)
   • Занятие

2. Клинические переменные:

   • Симптомы
   • Систолическое артериальное давление (в мм рт.ст.)
   • Диастолическое артериальное давление (в мм рт.ст.)
   • Температура
   • Частота дыхания
   • Частота сердцебиения
   • ГКС

3. Лабораторные переменные

   • CXR
   • Си-Би-Си
   • СРБ
   • С. Ферритин
   • SGPT
   • СГОТ
   • Титр антител

Процедура сбора аферетической плазмы

1. Скрининг перед сдачей крови: Прежде всего, 3 мл крови будут взяты из периферических вен, предпочтительно с тыльной поверхности руки, и будут храниться в пробирке с ЭДТА для дальнейшего тестирования. Группа крови будет подтверждена с помощью известных антисывороток. Скрининговый тест на 5 заболеваний (HBs Ag, анти-ВГС, ВИЧ, сифилис и малярия) будет тестироваться аппаратным методом. Автоматический анализатор подсчитает общий анализ крови. Если все останется благоприятным, последует следующий шаг.
2. Оценка безопасности: масса тела и рост донора будут измеряться обычным методом (стандартная цифровая шкала веса и роста). Для предотвращения отравления цитратами или гипокальциемических осложнений (подергивания, онемение, тошнота, легкое затруднение дыхания и т. д.) каждому донору перед началом процедуры будет дано 500 мг карбоната кальция. Артериальное давление и пульс будут контролироваться каждые 10 минут в целях предосторожности на протяжении всей процедуры. Вес, рост и параметры CBC будут указаны в аппарате для афереза ​​для настройки. Для венепункции выбирается видимая и легко пальпируемая противолоктевая вена. Перед пункцией вены над местом венепункции создается давление не менее 50–60 мм рт. ст. для поддержания устойчивого давления. Когда все будет готово, процедура начнется с прокола одной иглой целевой вены.

Этапы переливания реконвалесцентной плазмы (КП) Перед введением КП пациенту будут регистрироваться артериальное давление, пульс, температура, частота дыхания. Его можно вводить через центральный венозный катетер или через периферический канал. Если выбран участок периферической вены, то должна быть подтверждена игла не менее 21 г. Группа крови и перекрестная совместимость должны быть подтверждены до начала переливания. При отсутствии возможности канцелярской ошибки можно начинать переливание ЦП со скоростью 100 мл/час.

Анализ безопасности:

Если у пациента была лихорадка, необходимо вести температурный график. Когда температура поднимется выше 2 градусов по Фаренгейту от исходного уровня, переливание следует прекратить и дать жаропонижающее в соответствии с массой тела. После 10-минутной паузы можно начинать переливание. Если пациент чувствует чрезмерный зуд в определенной области или по всему телу, ему будет назначена инъекция хлорфенирамина малеата. Стероид будет сохранен для лечения тяжелой дыхательной недостаточности или неконтролируемого зуда. Артериальное давление, пульс и дыхание будут регулярно контролироваться каждые 30 минут.

Процедура измерения титра антител

Титр антител IgG к SARS-CoV-2 будет проверен с помощью ELISA в соответствии со следующим протоколом:

1. Сначала образцы сыворотки/плазмы (10 мкл) разводили до 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 и 1:640 путем серийного разведения.
2. 100 мкл разбавителей образцов будут добавлены в каждую лунку (кроме контрольной и контрольной), предварительно покрытые антигенами SARS-CoV-2.
3. Затем добавляют 10 мкл образца. 100 мкл контролей будут добавлены непосредственно в назначенную лунку. Все образцы будут запускаться в двух экземплярах.
4. Планшет накрывают крышкой планшета и инкубируют в течение 30 минут при 37°C.
5. В конце инкубации каждую лунку промывают 5 раз разбавленным промывочным буфером.
6. В каждую лунку, кроме контрольной, добавляют по 100 мкл конъюгата.
7. Инкубация 20 минут при 37°С.
8. В конце инкубации каждую лунку промывают 5 раз разбавленным промывочным буфером.
9. В каждую лунку добавляют 50 мкл раствора субстрата А и 50 мкл раствора субстрата В. Инкубация в течение 10 минут при 37°С без света.
10. В каждую лунку добавляют по 50 мкл стоп-раствора.
11. Планшет-ридер будет откалиброван с лункой бланка, а поглощение будет считано при 450 нм.
12. Значение ОП образца было ≥значения отсечки ОП, что указывает на положительный результат на антитела IgG.
13. Титр антител IgG будет определяться конечным разведением.

Из-за отсутствия плазмиды COVID-19 в Бангладеш и глобальной нехватки 2 мл сыворотки будут сохранены от каждого донора, а затем отправлены в здание Питера Медавара для исследования патогенов Оксфордского университета. Исследовательские сотрудники в Оксфорде проведут определение титра нейтрализующих антител, и позже исследователи сопоставят их с каждым донором. Расходы на определение титра нейтрализующих антител возьмут на себя коллеги из Оксфорда.

Статистический анализ:

Для анализа будет использоваться Graphpad Prism v 7.0. Демографические факторы и клинические характеристики будут суммированы с количеством (%) для категориальных переменных и медианой (межквартильный размах [IQR]) для непрерывных переменных, поскольку ни один из них не должен был иметь нормальное распределение. Основной анализ будет проводиться на основе намерения лечить. В качестве основного результата исследователи сравнивают среднее между тремя группами, используя однофакторный тест ANOVA. Исследователи также проведут апостериорный анализ в Prism для оценки (логарифмический критерий Мантеля-Кокса) времени до устойчивого насыщения > 93% и PaO2/FiO2 <200 мм рт. точка. Для непараметрических вторичных результатов все группы будут сравниваться с использованием теста Крускала-Уоллиса; в случае значимости исследователи планировали провести попарные сравнения с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Для параметрических результатов исследователи сравнили отношения шансов между парами.

Услуги и процедуры:

ОТ-ПЦР и другие тесты, связанные с исследованием, будут проводиться в БГМУ. Клиника лихорадки БГМУ уже вылечила более 1200 пациентов с положительным результатом на COVID-19. Потенциальные доноры будут отслеживаться из этого пула пациентов. Доноры, которые согласятся и дадут согласие, будут отправлены в отделение трансфузионной медицины SHBPSI. Будет собрано 5 мл плазмы и отправлено в лабораторию CMBT для определения титра антител на основе ELISA. Если титр соответствует желаемому уровню (1:320 и выше), то на следующий день будет взято 200 мл или 400 мл аферезной плазмы (в зависимости от наличия и согласия донора). Также будет собрано 5 мл сыворотки для отправки в здание Питера Медавара для исследования патогенов Оксфордского университета для проверки титра нейтрализующих антител. Это будет отправлено позже и сопоставлено с донором. Образцы будут отправлены в соответствии с соглашением о передаче материалов (MTA). Доктор Фазле Рабби Чоудхури, со-PI этого проекта, имеет необходимое разрешение на отправку образцов за границу. На заключительном этапе CP будет передан клинической бригаде в DMCH и MuMCH в соответствии с их запросом на переливание. Клиническая бригада обеспечит сбор лабораторных образцов до и после переливания ЦП и запишет данные в регистрационную форму. Команда лабораторной медицины БГМУ будет поддерживать клиническую команду в проведении лабораторных испытаний.