Thérapie plasmatique convalescente en cas d'infection grave au COVID-19

Justification de l'étude Actuellement, aucun traitement spécifique n'est disponible contre l'infection au COVID-19. Un traitement de soutien avec de l'oxygène concentré est le seul moyen de traitement. Les chercheurs ont déjà ouvert plus de 180 essais cliniques de traitements potentiels au COVID-19 pour le recrutement, et près de 150 pourraient commencer bientôt. Cependant, à ce jour, aucun essai d'intervention clinique n'a été achevé et rapporté. Sur la base d'anecdotes (petites séries de cas), certains des médicaments prometteurs pourraient être l'association azithromycine - hydroxychloroquine, le lopinavir/ritonavir, le tocilizumab, le ramdisivir, le favirinapir et d'autres. La transfusion de PC est une autre option prometteuse, qui avait déjà été essayée dans le cas du SRAS-CoV, du MERS-CoV, de la grippe et de l'infection virale Ebola. Son efficacité contre le COVID-19 n'a pas encore été explorée. Une série de cas récemment publiée se compose de dix cas qui prévoient des résultats prometteurs. Par conséquent, un ECR de phase II pour explorer la tolérabilité, l'efficacité et la dose-réponse doit être exploré de toute urgence.

Les cas ont commencé à s'intensifier au Bangladesh et le nombre de cas confirmés a déjà dépassé le millier de points. Compte tenu du coût et de la pénurie des autres antiviraux et biologiques mentionnés ci-dessus, il est inévitable que bon nombre de nos patients ne puissent pas se le permettre ou l'obtenir. Cependant, le CP peut être facilement collecté auprès des patients récupérés et peut facilement être traité pour l'utiliser contre une infection active. Cela pourrait être une option de traitement efficace et bon marché pour un pays comme le nôtre pour faire face à cette catastrophe. Par conséquent, la réalisation d'un ECR de phase II sur la transfusion de PC est une demande de temps.

Question de recherche:

La transfusion de CP est-elle tolérable et efficace pour traiter les patients atteints de COVID-19 sévère par rapport au traitement standard ?

Objectifs:

Objectif général:

Évaluer la tolérabilité, l'efficacité et la dose-réponse de la transfusion de PC chez les patients atteints de COVID-19 sévère

Objectifs spécifiques:

1. Pour identifier la dose efficace appropriée de thérapie CP
2. Pour identifier l'efficacité de la thérapie avec leur point final
3. Examiner l'amélioration clinique après la transfusion de PC chez les patients atteints de COVID-19 sévère
4. Évaluer l'amélioration du laboratoire après la transfusion de PC chez les patients atteints de COVID-19 sévère

Étudier le design:

ECR de phase II

Lieu d'étude:

Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU), Sheikh Hasina Burn & Plastic Surgery Institute, Dhaka Medical College, Mugda Medical College and Center for Medical Biotechnology

Période d'étude:

Mai 2020 - Octobre 2020 (Six mois)

Population étudiée :

COVID = 19 patients positifs qui sont diagnostiqués sur la base de la RT-PCR à la clinique de fièvre BSMMU ou par tout autre laboratoire désigné par le gouvernement et admis au DMCH, MuMC et BSMMU.

Randomisation et méthode en aveugle :

La randomisation sera effectuée par une personne non associée aux soins ou à l'évaluation des patients au moyen d'une table de nombres aléatoires. Les allocations seront dissimulées dans des enveloppes numérotées séquentiellement, opaques et cachetées. Dans cette étude pilote, le CP ou les soins standard ne seront pas en aveugle. Cependant, le résultat principal (saturations en oxygène, PaO2/FiO2 et TA) sera enregistré à l'aide d'une méthode automatisée objective ; le personnel de l'étude ne pourra pas influencer l'enregistrement de ces données.

Taille de l'échantillon:

Aucune étude similaire n'a été réalisée auparavant. Par conséquent, aucune donnée n'est disponible qui pourrait être utilisée pour générer un calcul de la taille de l'échantillon. Cette étude pilote est nécessaire pour fournir des données initiales sur l'efficacité et l'innocuité qui permettront la conception d'une étude plus vaste.

Instruments de recherche

1. Questionnaire général d'évaluation des données sociodémographiques.
2. Une liste de contrôle des résultats cliniques
3. Une liste de contrôle des résultats de l'enquête.

Mesures de variables

1. Variables sociodémographiques

   • Âge
   • Genre Homme Femme)
   • Superficie habitable (urbaine/rurale)
   • Profession

2. Variables cliniques :

   • Symptômes
   • Pression artérielle systolique (en mmHg)
   • Pression artérielle diastolique (en mmHg)
   • Température
   • Fréquence respiratoire
   • Rythme cardiaque
   • CGV

3. Variables de laboratoire

   • CXR
   • Radio-Canada
   • PCR
   • S. ferritine
   • SGPT
   • SGOT
   • Titre d'anticorps

Procédure de collecte de plasma aphérétique

1. Dépistage avant le don : Tout d'abord, 3 ml de sang seront prélevés du site veineux périphérique, de préférence du dos de la main, et seront conservés dans un tube EDTA pour des tests supplémentaires. Le groupe sanguin sera confirmé en utilisant des antisérums connus. Le test de dépistage de 5 maladies (Ag HBs, Anti VHC, VIH, Syphilis et Paludisme) sera testé par la méthode du dispositif. Un analyseur automatisé comptera la formule sanguine complète. Si tout reste favorable, la prochaine étape sera suivie.
2. Évaluation de la sécurité : Le poids corporel et la taille du donneur seront mesurés par une méthode conventionnelle (balance numérique standard de poids et de taille). Pour prévenir la toxicité du citrate ou les complications hypocalcémiques (contractions, engourdissements, nausées, difficultés respiratoires légères, etc.), 500 mg de carbonate de calcium seront administrés à chaque donneur avant de commencer la procédure. La tension artérielle et le pouls seront surveillés toutes les 10 minutes par précaution tout au long de la procédure. Le poids, la taille et le paramètre CBC seront donnés dans la machine d'aphérèse pour la configuration. La veine anti-cubitale visible et facilement palpable sera sélectionnée pour la ponction veineuse. Avant de ponctionner la veine, une pression d'au moins 50 à 60 mm Hg sera appliquée au-dessus de la zone de ponction veineuse pour maintenir une pression soutenue. Lorsque tout est prêt, la procédure sera lancée en ponctionnant une seule aiguille dans une veine ciblée.

Étapes de la transfusion de plasma convalescent (CP) Avant de donner le CP au patient, la pression artérielle, le pouls, la température, la fréquence respiratoire seront enregistrés. Il peut être administré par cathéter veineux central ou par voie périphérique. Si le site veineux périphérique est choisi, une aiguille d'au moins 21 g doit être confirmée. Le groupe sanguin et la compatibilité croisée doivent être confirmés avant de commencer la transfusion. Lorsqu'il n'y a aucun risque d'erreur d'écriture, la transfusion CP peut être démarrée au débit de 100 ml/heure.

Évaluation de sécurité:

Si le patient souffrait de fièvre, un tableau de température doit être conservé. Lorsque la température sera élevée au-dessus de 2 degrés Fahrenheit par rapport à la ligne de base, la transfusion doit être arrêtée et un antipyrétique doit être administré en fonction du poids corporel. Après une pause de 10 minutes, la transfusion peut commencer. Si le patient ressent des démangeaisons excessives sur une zone spécifique ou sur tout le corps, le maléate de chlorphéniramine injectable lui sera administré. Le stéroïde serait conservé pour gérer une détresse respiratoire sévère ou des démangeaisons incontrôlables. La pression artérielle, le pouls et la respiration seront surveillés régulièrement toutes les 30 minutes.

La procédure de mesure du titre d'anticorps

Le titre d'anticorps IgG SARS-CoV-2 sera testé par ELISA selon le protocole suivant :

1. Au début, les échantillons de sérum/plasma (10 μL) ont été dilués à 1 :40, 1 :80, 1 :160, 1 :320 et 1 :640 par dilution en série.
2. 100 μl de diluants d'échantillon seront ajoutés dans chaque puits (à l'exception du blanc et du puits de contrôle) qui sont pré-revêtus d'antigènes SARS-CoV-2.
3. Ensuite, 10 μl d'échantillon seront ajoutés. Des contrôles de 100 μl seront ajoutés directement au puits assigné. Tous les échantillons seront analysés en double.
4. La plaque sera recouverte du couvre-plaque et sera incubée pendant 30 minutes à 37°C.
5. A la fin de l'incubation, chaque puits sera lavé 5 fois avec du tampon de lavage dilué.
6. 100μl de conjugué seront ajoutés dans chaque puits sauf le blanc.
7. Incubation 20 minutes à 37°C.
8. A la fin de l'incubation, chaque puits sera lavé 5 fois avec du tampon de lavage dilué.
9. 50 μl de solution de substrat A et 50 μl de solution de substrat B seront ajoutés dans chaque puits. Incubation 10 minutes à 37°C à l'abri de la lumière.
10. 50 μl de solution d'arrêt seront ajoutés dans chaque puits.
11. Le lecteur de plaque sera calibré avec le puits blanc et l'absorbance sera lue à 450 nm.
12. La valeur OD de l'échantillon était ≥ la valeur OD seuil indiquera un anticorps IgG positif.
13. Le titre d'anticorps IgG sera déterminé par dilution au point final.

En raison du manque de plasmide COVID-19 au Bangladesh et de la pénurie mondiale, 2 ml de seum seront conservés par chaque donneur et ensuite expédiés au bâtiment Peter Medawar pour la recherche sur les agents pathogènes, Université d'Oxford. Des collaborateurs de recherche à Oxford effectueront le titre des anticorps neutralisants et les enquêteurs les associeront plus tard à chaque donneur. Les dépenses pour le test du titre des anticorps neutralisants seront gérées par les collègues d'Oxford.

Analyses statistiques:

Graphpad Prism v 7.0 sera utilisé pour l'analyse. Les facteurs démographiques et les caractéristiques cliniques seront résumés avec des nombres (%) pour les variables catégorielles et la médiane (intervalle interquartile [IQR]) pour les variables continues, car aucune ne devait être normalement distribuée. L'analyse principale sera réalisée en intention de traiter. Pour le critère de jugement principal, les enquêteurs compareront la moyenne entre trois bras à l'aide d'un test ANOVA à un facteur. Les enquêteurs feront également une analyse posthoc dans Prism évaluant (test log-rank de Mantel-Cox) le temps jusqu'à des saturations soutenues> 93% et PaO2 / FiO2 <200 mm de Hg censurés lors de l'inscription, 3 jours et 7 jours après l'inscription en un seul temps indiquer. Pour les résultats secondaires non paramétriques, tous les groupes seront comparés à l'aide d'un test de Kruskal-Wallis ; s'il est significatif, les enquêteurs ont alors prévu d'effectuer des comparaisons par paires avec un test de Mann-Whitney non paramétrique. Pour les résultats paramétriques, les enquêteurs ont comparé les rapports de cotes entre les paires.

Installations et procédure :

La RT-PCR et d'autres tests liés à l'étude seront effectués au BSMMU. La clinique de fièvre BSMMU a déjà traité plus de 1200 cas positifs au COVID-19. Les donneurs potentiels seront suivis à partir de ce groupe de patients. Les donneurs qui accepteront et donneront leur consentement seront alors dirigés vers le service de médecine transfusionnelle du SHBPSI. 5 ml de plasma seront collectés et envoyés au laboratoire CMBT pour le titre d'anticorps basé sur ELISA. Si le titre atteint le niveau souhaité (1:320 et plus), alors 200 ml ou 400 ml de plasma aphérétique (selon la disponibilité et le consentement du donneur) seront prélevés le jour suivant. 5 ml de sérum seront également collectés pour être envoyés au Peter Medawar Building for Pathogen Research, Université d'Oxford pour vérifier le titre d'anticorps neutralisants. Celui-ci sera envoyé plus tard et mis en correspondance avec le donateur. Les échantillons seront expédiés sous la couverture de l'accord de transfert de matériaux (MTA). Le Dr Fazle Rabbi Chowdhury, le co-PI de ce projet, a l'autorisation nécessaire pour expédier des échantillons à l'étranger. Dans l'étape finale, le CP sera remis à l'équipe clinique du DMCH et du MuMCH selon leur demande de transfusion. L'équipe clinique assurera la collecte des échantillons de laboratoire avant et après la transfusion de PC et enregistrera les données dans le formulaire d'enregistrement du cas. Une équipe de médecine de laboratoire de BSMMU soutiendra l'équipe clinique pour les tests de laboratoire.