Lábadozó plazmaterápia súlyos COVID-19 fertőzésben

A vizsgálat indoklása Jelenleg nem áll rendelkezésre specifikus kezelés a COVID-19 fertőzés ellen. A szupportív kezelés a koncentrált oxigénnel együtt az egyetlen kezelési mód. A kutatók már több mint 180 klinikai vizsgálatot indítottak a lehetséges COVID-19 kezelések toborzása céljából, és közel 150 hamarosan megkezdődhet. A mai napig azonban nem fejeződött be és nem jelentett be klinikai beavatkozási vizsgálat. Anekdoták (kis esetsorozatok) alapján az ígéretes gyógyszerek az azitromicin-hidroxiklorokin kombináció, Lopinavir/Ritonavir, Tocilizumab, Ramdisivir, Favirinapir és mások lehetnek. A CP transzfúzió egy másik ígéretes lehetőség, amelyet korábban már kipróbáltak SARS-CoV, MERS-CoV, valamint influenza és ebola vírusfertőzés esetén. A COVID-19 elleni hatékonyságát még nem vizsgálták. Egy nemrég közzétett esetsorozat tíz olyan esetből áll, amelyek ígéretes eredményeket jeleznek előre. Ezért sürgősen fel kell tárni egy II. fázisú RCT-t a tolerálhatóság, a hatékonyság és a dózis-válasz feltárására.

Az esetek fokozódni kezdtek Bangladesben, és a megerősített esetek száma már meghaladta az ezer határt. Figyelembe véve a fent említett egyéb vírusellenes és biológiai szerek költségét és hiányát, elkerülhetetlen, hogy sok betegünk esetleg nem engedhetné meg magának vagy nem kaphatná meg. A CP azonban könnyen begyűjthető a felépült betegektől, és könnyen feldolgozható az aktív fertőzés elleni felhasználáshoz. Ez hatékony és olcsó kezelési lehetőség lehet egy olyan ország számára, mint a miénk, hogy szembenézzen ezzel a katasztrófával. Ezért a II. fázisú RCT elvégzése CP transzfúzión időigényes.

Kutatási kérdés:

A CP transzfúzió tolerálható és hatékony a súlyos COVID-19 betegek kezelésében a szokásos kezeléshez képest?

Célok:

Általános cél:

A CP transzfúzió tolerálhatóságának, hatékonyságának és dózis-válaszának felmérése súlyos COVID-19 betegeknél

Konkrét célok:

1. A CP-terápia megfelelő hatékony dózisának meghatározása
2. A terápia hatékonyságának azonosítása azok végpontjával
3. A CP transzfúziót követő klinikai javulás vizsgálata súlyos COVID-19 betegeknél
4. Súlyos COVID-19-betegeknél a CP transzfúzió utáni laboratóriumi javulás értékelése

Dizájnt tanulni:

II. fázisú RCT

Tanulás helye:

Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU), Sheikh Hasina Burn & Plastic Surgery Institute, Dhaka Medical College, Mugda Medical College és Center for Medical Biotechnology

Tanulmányi időszak:

2020. május – 2020. október (hat hónap)

Vizsgálati populáció:

COVID=19 pozitív betegek, akiket RT-PCR alapján diagnosztizáltak a BSMMU lázklinikán vagy bármely más, a kormány által kijelölt laboratóriumban, és a DMCH-ban, a MuMC-ben és a BSMMU-ban vettek fel.

Randomizációs és vakítási módszer:

A randomizálást véletlenszám-táblázat segítségével olyan személy végzi, aki nem vesz részt a betegek ellátásában vagy értékelésében. A juttatásokat sorszámmal ellátott, átlátszatlan, zárt borítékokba rejtik. Ebben a kísérleti tanulmányban a CP vagy a standard ellátás nem lesz vak. Az elsődleges eredményt (oxigéntelítettség, PaO2/FiO2 és BP) azonban objektív automatizált módszerrel rögzítik; a vizsgálati személyzet nem tudja befolyásolni ezen adatok rögzítését.

Minta nagysága:

Korábban nem végeztek hasonló vizsgálatot. Ezért nem állnak rendelkezésre adatok, amelyek felhasználhatók a mintanagyság kiszámításához. Erre a kísérleti vizsgálatra azért van szükség, hogy bizonyos kezdeti adatokat szolgáltasson a hatékonyságról és a biztonságosságról, amelyek lehetővé teszik egy nagyobb vizsgálat megtervezését.

Kutatási eszközök

1. Általános kérdőív a szocio-demográfiai adatok értékeléséhez.
2. A klinikai leletek ellenőrző listája
3. A vizsgálati eredmények ellenőrző listája.

Változók mértéke

1. Társadalmi-demográfiai változók

   • Kor
   • Neme férfi nő)
   • Lakóterület (városi/vidéki)
   • Foglalkozása

2. Klinikai változók:

   • Tünetek
   • Szisztolés vérnyomás (Hgmm-ben)
   • Diasztolés vérnyomás (Hgmm-ben)
   • Hőfok
   • Légzésszám
   • Pulzus
   • GCS

3. Laboratóriumi változók

   • CXR
   • CBC
   • CRP
   • S. Ferritin
   • SGPT
   • SGOT
   • Antitest titer

Az aferetikus plazma gyűjtési eljárása

1. Donáció előtti szűrés: Mindenekelőtt 3 ml vért veszünk a perifériás vénás helyről lehetőleg a kéz hátuljáról, és EDTA csőben tároljuk további vizsgálatok céljából. A vércsoportot ismert antiszérumok segítségével kell megerősíteni. A készülékes módszerrel 5 betegség (HBs Ag, Anti HCV, HIV, Syphilis és Malaria) szűrővizsgálatára kerül sor. Egy automata analizátor megszámolja a teljes vérképet. Ha minden kedvező marad, a következő lépés következik.
2. Biztonsági értékelés: A donor testsúlyát és magasságát hagyományos módszerrel (standard digitális súly- és magasságmérleg) mérik. A citrát toxicitás vagy a hipokalcémiás szövődmények (rángás, zsibbadás, hányinger, enyhe légzési nehézség stb.) megelőzése érdekében minden donor 500 mg kalcium-karbonátot kap az eljárás megkezdése előtt. A vérnyomást és a pulzust 10 percenként ellenőrizni kell az elővigyázatosság érdekében az eljárás során. A súly, a magasság és a CBC paraméter az aferézis gépben lesz megadva a beállításhoz. A vénapunkcióhoz a látható és könnyen tapintható anticubitalis vénát választják ki. A véna szúrása előtt legalább 50-60 Hgmm nyomást kell adni a vénapunkciós terület fölé a tartós nyomás fenntartása érdekében. Ha minden készen áll, az eljárást egyetlen tű megcélzott vénába történő szúrásával kezdjük.

A lábadozó plazma (CP) transzfúzió lépései Mielőtt a betegnek CP-t adnának, vérnyomást, pulzust, hőmérsékletet rögzítenek a légzésszámmal. Beadható központi vénás katéteren vagy perifériás csatornán keresztül. Ha perifériás vénás helyet választanak, akkor legalább 21 g tűt kell megerősíteni. A vércsoport és a keresztegyeztetést a transzfúzió megkezdése előtt meg kell erősíteni. Ha nincs lehetőség az irodai tévedésre, akkor a CP transzfúzió 100 ml/óra sebességgel indítható.

Biztonsági értékelés:

Ha a beteg lázban szenved, hőmérsékleti táblázatot kell vezetni. Ha a hőmérséklet az alapvonalhoz képest 2 Fahrenheit-fok fölé emelkedik, akkor a transzfúziót le kell állítani, és a testtömegnek megfelelően lázcsillapítót kell adni. 10 perc szünet után megkezdhető a transzfúzió. Ha a beteg túlzott viszketést érez bizonyos területen vagy egész testén, akkor klórfeniramin-maleát injekciót kap. A szteroidot meg kell őrizni súlyos légzési nehézség vagy ellenőrizhetetlen viszketés kezelésére. A vérnyomást, a pulzust és a légzést 30 percenként rendszeresen ellenőrizni kell.

Az antitest-titer mérési eljárása

A SARS-CoV-2 IgG antitest-titert ELISA-val teszteljük a következő protokoll szerint:

1. Először a szérum/plazma mintákat (10 μL) 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 és 1:640 arányra hígítottuk sorozathígítással.
2. A SARS-CoV-2 antigénekkel előzetesen bevont üregekbe 100 μl mintahígítót kell adni (kivéve a vak és a kontroll lyukat).
3. Ezután 10 μl mintát adunk hozzá. A 100 μl-es kontrollok közvetlenül a kijelölt üregbe kerülnek. Minden mintát két példányban futtatunk.
4. A lemezt le kell fedni a lemezfedéllel, és 30 percig 37 °C-on inkubáljuk.
5. Az inkubáció végén minden lyukat ötször mosunk hígított mosópufferrel.
6. 100 μl konjugátumot adunk minden egyes lyukba, kivéve az üreset.
7. Inkubálás 20 percig 37 °C-on.
8. Az inkubáció végén minden lyukat ötször mosunk hígított mosópufferrel.
9. 50 μl A szubsztrát oldatot és 50 μl B szubsztrát oldatot kell hozzáadni mindegyik lyukba. Inkubálás 10 percig 37°C-on fény elkerülése mellett.
10. 50 μl leállító oldatot adunk minden egyes lyukba.
11. A lemezolvasót a Blank lyukkal kalibráljuk, és az abszorbanciát 450 nm-en olvassuk le.
12. A minta OD-értéke ≥cutoff OD-érték volt, IgG antitest-pozitív lesz.
13. Az IgG antitest titerét végponthígítással határozzák meg.

A COVID-19 plazmid hiánya Bangladesben és a globális hiány miatt minden donortól 2 ml-es szérumot konzerválnak, majd később Peter Medawar épületébe szállítják az Oxfordi Egyetem patogénkutatására. Az oxfordi kutatói munkatársak elvégzik a neutralizáló antitest titerét, és a kutatók később minden donorral egyeztetik. A neutralizáló antitest-titer vizsgálat költségeit az oxfordi kollégák fedezik.

Statisztikai analízis:

Az elemzéshez a Graphpad Prism v 7.0-t használjuk. A demográfiai tényezőket és a klinikai jellemzőket a kategorikus változók esetében a számok (%), a folytonos változók esetében pedig a medián (interkvartilis tartomány [IQR]) összegével kell összefoglalni, mivel egyik sem volt normális eloszlású. A fő elemzést a kezelési szándék alapján végzik el. Az elsődleges eredményhez a vizsgálók összehasonlítják a három kar átlagát egyutas ANOVA teszt segítségével. A nyomozók utólagos analízist is végeznek Prizmában, felmérve (log-rank Mantel-Cox teszt) a 93%-nál nagyobb tartós telítési időt és a PaO2/FiO2<200 Hgmm-ig cenzúrázott időtartamot a beiratkozás során, 3 és 7 nappal a beiratkozás után. pont. A nem paraméteres másodlagos eredmények esetében minden csoportot Kruskal-Wallis teszttel hasonlítanak össze; ha szignifikáns volt, a vizsgálók ezután páronkénti összehasonlítást terveztek egy nem paraméteres Mann-Whitney teszttel. A paraméteres eredményekhez a vizsgálók összehasonlították a párok esélyhányadosát.

Létesítmények és eljárás:

Az RT-PCR-t és más, a vizsgálattal kapcsolatos vizsgálatokat a BSMMU-ban végzik majd. A BSMMU lázklinikán már több mint 1200 COVID-19 pozitív esetet kezeltek. A potenciális donorokat ebből a betegcsoportból követik nyomon. Azokat a donorokat, akik beleegyeznek és beleegyeznek, az SHBPSI transzfúziós gyógyszerosztályára küldik. 5 ml plazmát összegyűjtenek és elküldik a CMBT laboratóriumba ELISA alapú antitesttiter meghatározására. Ha a titer eléri a kívánt szintet (1:320 és afeletti), akkor a következő napon 200 ml vagy 400 ml aferetikus plazmát veszünk (a rendelkezésre állástól és a donor hozzájárulásától függően). 5 ml szérumot is begyűjtenek, és elküldik az Oxfordi Egyetem Peter Medawar Pathogen Research épületébe a neutralizáló antitest-titer ellenőrzésére. Ezt később küldjük el, és egyeztetjük az adományozóval. A mintákat az anyagátadási szerződés (MTA) hatálya alatt szállítjuk. Dr. Fazle Rabbi Chowdhury, a projekt társ-PI-je rendelkezik a szükséges engedéllyel a minták tengerentúli szállításához. Az utolsó szakaszban a CP-t átadják a DMCH és a MuMCH klinikai csapatának, a transzfúzió iránti igényüknek megfelelően. A klinikai csapat gondoskodik a laboratóriumi mintavételről a CP transzfúzió előtt és után, és rögzíti az adatokat az esetnyilvántartási űrlapon. A BSMMU laboratóriumi orvosi csapata támogatja a klinikai csapatot a laboratóriumi vizsgálatok elvégzésében.