重度の新型コロナウイルス感染症における回復期血漿療法

研究の理論的根拠 現在、新型コロナウイルス感染症に対して利用できる特別な治療法はありません。 濃縮酸素による支持療法が唯一の治療手段です。 研究者らはすでに、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の治療法候補として180件以上の臨床試験を募集しており、150件近くが間もなく開始される可能性がある。 しかし、現在まで臨床介入試験は完了して報告されていません。 逸話（小規模な症例シリーズ）に基づくと、有望な薬剤のいくつかは、アジスロマイシンとヒドロキシクロロキンの組み合わせ、ロピナビル/リトナビル、トシリズマブ、ラムディシビル、ファビリナピルなどである可能性があります。 CP輸血はもう1つの有望な選択肢であり、これまでにSARS-CoV、MERS-CoV、インフルエンザおよびエボラウイルス感染症で試みられていた。 新型コロナウイルス感染症に対するその有効性はまだ調査されていません。 最近公開されたケース シリーズは、有望な結果を予測する 10 件のケースで構成されています。 したがって、忍容性、有効性、用量反応を調査するための第 II 相 RCT を緊急に調査する必要があります。

バングラデシュでは感染者が拡大し始め、確認された感染者数はすでに1000人を超えた。 上記の他の抗ウイルス薬や生物学的製剤のコストと不足を考慮すると、多くの患者がそれを買う余裕がないか、入手できない可能性があることは避けられません。 ただし、CP は回復した患者から簡単に収集でき、活動性感染症に対して使用するために簡単に加工できます。 これは、我が国のような国がこの大惨事に直面する場合、効果的で安価な治療法となる可能性があります。 したがって、CP 輸血に関する第 II 相 RCT の実施には時間がかかります。

研究の質問:

標準治療と比較して、CP輸血は忍容性があり、重症の新型コロナウイルス感染症患者の治療に効果的ですか?

目的:

一般的な目的:

重症の新型コロナウイルス感染症患者におけるCP輸血の忍容性、有効性、用量反応を評価する

具体的な目的:

1. CP 療法の適切な有効量を特定するため
2. 治療の有効性をエンドポイントとともに特定するため
3. 重症の新型コロナウイルス感染症患者におけるCP輸血後の臨床改善を調べるため
4. 重症の COVID-19 患者における CP 輸血後の検査室の改善を評価する

研究デザイン:

第II相RCT

学習場所:

バンガバンドゥ・シェイク・ムジブ医科大学（BSMMU）、シェイク・ハシナ火傷・形成外科研究所、ダッカ医科大学、ムグダ医科大学、医療バイオテクノロジーセンター

勉強期間：

2020年5月～2020年10月（6ヶ月）

調査対象母集団：

BSMMU発熱クリニックまたはその他の政府指定の検査機関でRT-PCRに基づいて診断され、DMCH、MuMC、およびBSMMUに入院したCOVID=19陽性患者。

ランダム化とブラインド法:

ランダム化は、患者のケアや評価に関係のない人によって、乱数表を使用して行われます。 割り当ては、連続番号が付けられた不透明な密封された封筒に隠されます。 このパイロット研究では、CP または標準治療は盲検化されません。 ただし、主要結果 (酸素飽和度、PaO2/FiO2、血圧) は、客観的な自動化された方法を使用して記録されます。研究スタッフはこれらのデータの記録に影響を与えることはできません。

サンプルサイズ：

同様の研究はこれまでに実施されていない。 したがって、サンプルサイズの計算に使用できるデータはありません。 このパイロット研究は、より大規模な研究の計画を可能にする有効性と安全性に関する初期データを提供するために必要です。

研究機器

1. 社会人口統計データを評価するための一般的なアンケート。
2. 臨床所見のチェックリスト
3. 調査結果のチェックリスト。

変数の尺度

1. 社会人口統計的変数

   • 年
   • 性別男性女性）
   • 生活圏（都市部・田舎）
   • 職業

2. 臨床変数:

   • 症状
   • 収縮期血圧 (mmHg)
   • 拡張期血圧 (mmHg)
   • 温度
   • 呼吸数
   • 心拍数
   • GCS

3. 実験室変数

   • CXR
   • CBC
   • CRP
   • S.フェリチン
   • SGPT
   • SGOT
   • 抗体価

アフェレティック血漿の採取手順

1. 提供前スクリーニング: まず、末梢静脈部位、できれば手の甲から 3 ml の血液を採取し、さらなる検査のために EDTA チューブに保管します。 血液型は既知の抗血清を使用して確認されます。 デバイス法により5疾患（HBs抗原、抗HCV、HIV、梅毒、マラリア）のスクリーニング検査を行います。 自動分析装置は完全な血球数をカウントします。 すべての状況が良好なままであれば、次のステップに進みます。
2. 安全性評価：ドナーの体重と身長は、従来の方法（標準的なデジタル体重計および身長計）によって測定されます。 クエン酸塩毒性または低カルシウム血症性合併症（けい​​れん、しびれ、吐き気、軽度の呼吸困難など）を予防するために、処置を開始する前にすべてのドナーに炭酸カルシウム 500 mg が投与されます。 処置中の予防措置として、血圧と脈拍が 10 分ごとに監視されます。 体重、身長、CBCパラメータは、セットアップ用のアフェレーシスマシンに入力されます。 静脈穿刺には、目に見えて容易に触知できる反肘静脈が選択されます。 静脈を穿刺する前に、持続的な圧力を維持するために、少なくとも 50 ～ 60 mm Hg の圧力が静脈穿刺領域の上に与えられます。 すべての準備が整ったら、目的の静脈に 1 本の針を刺すことから手順が開始されます。

回復期血漿 (CP) 輸血の手順 患者に CP を投与する前に、血圧、脈拍、体温、呼吸数が記録されます。 中心静脈カテーテルまたは末梢チャネルを通じて投与できます。 末梢静脈部位を選択した場合は、少なくとも 21g の針を確認する必要があります。 輸血を開始する前に、血液型と相互適合性を確認する必要があります。 事務ミスの可能性がない場合は、100 ml/時間の速度で CP 輸血を開始できます。

安全性評価:

患者が発熱している場合は、体温表を維持する必要があります。 体温が基準値から華氏 2 度を超えて上昇した場合は、輸血を中止し、体重に応じて解熱剤を投与する必要があります。 10 分間の休止後、輸血を開始できます。 忍耐強く、特定の領域または体全体に過度のかゆみを感じた場合は、クロルフェニラミンマレイン酸塩の注射が行われます。 ステロイドは、重度の呼吸困難や制御不能なかゆみを管理するために保存されます。 血圧、脈拍、呼吸は 30 分間隔で定期的に監視されます。

抗体価の測定手順

SARS-CoV-2 IgG 抗体力価は、次のプロトコルに従って ELISA によって検査されます。

1. まず、血清/血漿サンプル (10μL) を段階希釈により 1:40、1:80、1:160、1:320、および 1:640 に希釈しました。
2. 100μlのサンプル希釈液を、SARS-CoV-2抗原で事前にコーティングされた各ウェル(ブランクおよびコントロールウェルを除く)に添加します。
3. 次に、10μlの検体が追加されます。 100μl のコントロールが割り当てられたウェルに直接追加されます。 すべてのサンプルは 2 回実行されます。
4. プレートをプレートカバーで覆い、37℃で30分間インキュベートします。
5. インキュベーションの最後に、各ウェルを希釈した洗浄バッファーで 5 回洗浄します。
6. 100μlのコンジュゲートをブランクを除く各ウェルに添加します。
7. 37℃で20分間インキュベートします。
8. インキュベーションの最後に、各ウェルを希釈した洗浄バッファーで 5 回洗浄します。
9. 50μlの基質溶液Aおよび50μlの基質溶液Bを各ウェルに添加する。 光を避けて37℃で10分間インキュベートします。
10. 50μlの停止液を各ウェルに添加します。
11. プレートリーダーはブランクウェルで校正され、吸光度は 450nm で読み取られます。
12. サンプルの OD 値がカットオフ OD 値以上であった場合、IgG 抗体陽性を示します。
13. IgG 抗体力価は、エンドポイント希釈によって決定されます。

バングラデシュでの新型コロナウイルス感染症（COVID-19）プラスミドの不足と世界的な不足のため、2mlのセウムが各ドナーから保存され、後にオックスフォード大学の病原体研究のためのピーター・メダワール棟に発送される予定だ。 オックスフォードの研究協力者が中和抗体力価を測定し、その後研究者が各ドナーと中和抗体力価を照合します。 中和抗体価検査の費用はオックスフォード大学の同僚が管理します。

統計分析：

分析には Graphpad Prism v 7.0 が使用されます。 人口統計学的要因と臨床的特徴は、正規分布が予想されなかったため、カテゴリ変数のカウント (%) と連続変数の中央値 (四分位範囲 [IQR]) で要約されます。 主な分析は治療意図に基づいて実行されます。 主要アウトカムとして、研究者は一元配置分散分析検定を使用して 3 群間の平均を比較します。 研究者らはまた、Prism で事後分析を行い、登録中、登録後 3 日および 7 日後に打ち切られる持続的飽和度 >93% および PaO2/FiO2<200 mmHg になるまでの時間を 1 回で評価します (ログランク マンテル-コックス テスト)。点。 ノンパラメトリックな副次結果の場合、クラスカル-ウォリス検定を使用してすべてのグループが比較されます。重要な場合、研究者らはノンパラメトリックなマン・ホイットニー検定と一対の比較を実行することを計画しました。 パラメトリックな結果について、研究者はペア間のオッズ比を比較しました。

設備と手順：

RT-PCR およびその他の研究関連検査は BSMMU で行われます。 BSMMU発熱クリニックはすでに1200人以上の新型コロナウイルス感染症陽性患者を治療した。 潜在的なドナーはこの患者プールから追跡されます。 同意して同意を与えるドナーは、SHBPSI の輸血内科に送られます。 5 ml の血漿が収集され、ELISA に基づく抗体力価測定のために CMBT 研究室に送られます。 力価が所望のレベル（1:320 以上）を満たす場合、翌日 200 ml または 400 ml のアフェレーシス血漿（入手可能性およびドナーの同意に応じて）が採取されます。 中和抗体力価をチェックするために、オックスフォード大学のピーター・メダワール病原体研究棟に送るために、5 mlの血清も収集されます。 これは後日送付され、寄付者と照合されます。 サンプルは資材移転協定 (MTA) の範囲内で出荷されます。 このプロジェクトの共同代表者であるファズル・ラビ・チョードリー博士は、サンプルを海外に発送するために必要な許可を持っています。 最終段階では、CP は輸血の要求に応じて DMCH と MuMCH の臨床チームに引き渡されます。 臨床チームは、CP 輸血の前後に検査サンプルを確実に収集し、データを症例記録フォームに記録します。 BSMMU の臨床検査医学チームは臨床検査チームをサポートします。