중증 COVID-19 감염에서의 회복기 플라즈마 요법

연구의 근거 현재 COVID-19 감염에 대한 특정 치료법은 없습니다. 집중 산소와 함께 지지 치료가 유일한 치료 수단입니다. 연구자들은 이미 모집을 위한 잠재적인 COVID-19 치료법에 대한 180건 이상의 임상 시험을 시작했으며 거의 ​​150건이 곧 시작될 수 있습니다. 그러나 현재까지 임상 개입 시험이 완료되고 보고된 바는 없습니다. 일화(작은 사례 시리즈)에 따르면 유망한 약물 중 일부는 아지스로마이신 - 하이드록시클로로퀸 조합, 로피나비르/리토나비르, 토실리주맙, 람디시비르, 파비리나피르 등일 수 있습니다. CP 수혈은 SARS-CoV, MERS-CoV, 독감 및 에볼라 바이러스 감염에서 이전에 시도된 또 다른 유망한 옵션입니다. COVID-19에 대한 효과는 아직 탐구되지 않았습니다. 최근 발표된 사례 시리즈는 유망한 결과를 예측하는 10가지 사례로 구성되어 있습니다. 따라서 내약성, 효능, 용량-반응을 탐색하기 위한 2상 RCT가 시급히 탐색되어야 한다.

방글라데시에서 사례가 확대되기 시작했고 확인된 사례의 수가 이미 천 마르크를 넘어섰습니다. 위에서 언급한 다른 항바이러스제 및 생물학적 제제의 비용과 부족을 고려할 때, 많은 환자들이 그것을 감당할 수 없거나 얻을 수 없는 것은 불가피합니다. 그러나 CP는 회복된 환자에게서 쉽게 채취할 수 있고 쉽게 가공하여 활동성 감염에 사용할 수 있습니다. 이것은 우리와 같은 나라가 이 재앙에 직면하는 데 효과적이고 저렴한 치료 옵션이 될 수 있습니다. 따라서 CP 수혈에 대한 2상 RCT를 수행하는 것은 시간의 요구입니다.

연구 질문:

CP 수혈은 표준 치료와 비교하여 중증 COVID-19 환자 치료에 견딜 수 있고 효과적입니까?

목표:

일반 목표:

중증 COVID-19 환자에서 CP 수혈의 내약성, 효능 및 용량 반응을 평가하기 위해

구체적인 목표:

1. CP 요법의 적절한 유효 용량을 확인하기 위해
2. 종점으로 치료의 효능을 확인하기 위해
3. 중증 COVID-19 환자에서 CP 수혈 후 임상적 개선을 조사하기 위해
4. 중증 COVID-19 환자에서 CP 수혈 후 검사실 개선을 평가하기 위해

연구 설계:

2상 RCT

학습 장소:

Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University(BSMMU), Sheikh Hasina Burn & Plastic Surgery Institute, Dhaka Medical College, Mugda Medical College 및 Center for Medical Biotechnology

공부 기간:

2020년 5월 ~ 2020년 10월 (6개월)

연구 인구:

COVID=19 양성 환자는 BSMMU 발열 클리닉 또는 기타 정부 지정 실험실에서 RT-PCR을 기반으로 진단되고 DMCH, MuMC 및 BSMMU에 입원합니다.

무작위화 및 눈가림 방법:

무작위화는 난수 표를 통해 환자의 치료 또는 평가와 관련되지 않은 사람이 수행합니다. 할당량은 순차적으로 번호가 매겨지고 불투명하며 봉인된 봉투에 숨겨져 있습니다. 이 파일럿 연구에서 CP 또는 표준 치료는 맹검되지 않습니다. 그러나 주요 결과(산소 포화도, PaO2/FiO2 및 BP)는 객관적인 자동화 방법을 사용하여 기록됩니다. 연구 직원은 이러한 데이터의 기록에 영향을 미칠 수 없습니다.

표본의 크기:

유사한 연구는 이전에 수행된 적이 없습니다. 따라서 샘플 크기 계산을 생성하는 데 사용할 수 있는 데이터가 없습니다. 이 파일럿 연구는 더 큰 규모의 연구를 설계할 수 있도록 효능 및 안전성에 대한 일부 초기 데이터를 제공하는 데 필요합니다.

연구 도구

1. 사회 인구학적 데이터를 평가하기 위한 일반 설문지.
2. 임상 소견 체크리스트
3. 조사 결과의 체크리스트.

변수 측정

1. 사회-인구학적 변수

   • 나이
   • 성별 남성 여성)
   • 생활공간(도시/농촌)
   • 직업

2. 임상 변수:

   • 증상
   • 수축기 혈압(mmHg)
   • 확장기 혈압(mmHg)
   • 온도
   • 호흡
   • 심박수
   • GCS

3. 실험실 변수

   • CXR
   • CBC
   • CRP
   • S. 페리틴
   • SGPT
   • SGOT
   • 항체 역가

Apheretic 플라즈마 수집 절차

1. 기증 전 스크리닝: 우선, 말초 정맥 부위에서 바람직하게는 손등에서 3ml의 혈액을 채취하고 추가 테스트를 위해 EDTA 튜브에 보관합니다. 알려진 항혈청을 사용하여 혈액형을 확인합니다. 5개 질환(HBs Ag , Anti HCV, HIV, 매독, 말라리아)에 대한 선별검사를 기기법으로 진행합니다. 자동 분석기가 전체 혈구 수를 계산합니다. 모든 것이 순조롭게 유지되면 다음 단계가 이어집니다.
2. 안전성 평가: 공여자의 체중과 신장은 기존의 방법(표준 디지털 체중 및 신장 척도)으로 측정합니다. 구연산염 독성 또는 저칼슘혈증 합병증(연축, 무감각, 메스꺼움, 경미한 호흡 곤란 등)을 예방하기 위해 절차를 시작하기 전에 모든 기증자에게 탄산칼슘 500mg을 제공합니다. 혈압과 맥박은 절차 전반에 걸쳐 예방을 위해 10분 간격으로 모니터링됩니다. 체중, 신장 및 CBC 매개변수는 설정을 위해 성분채집기에서 제공됩니다. 가시적이고 쉽게 만져질 수 있는 항주방정맥이 정맥천자를 위해 선택될 것입니다. 정맥을 천자하기 전에 지속적인 압력을 유지하기 위해 천자 부위 위에 최소 50-60 mm Hg 압력을 가합니다. 모든 것이 준비되면 표적 정맥에 단일 바늘을 찔러 절차가 시작됩니다.

회복기 혈장(CP) 수혈 단계 CP를 환자에게 주기 전에 혈압, 맥박, 체온, 호흡수를 기록합니다. 중심 정맥 카테터 또는 말초 채널을 통해 투여할 수 있습니다. 말초 정맥 부위를 선택한 경우 최소 21g 바늘을 확인해야 합니다. 수혈을 시작하기 전에 혈액형과 교차 일치를 확인해야 합니다. 사무상 착오가 없을 경우 시간당 100ml의 속도로 CP 수혈을 시작할 수 있습니다.

안전성 평가:

환자가 열이 있는 경우 온도 차트를 유지해야 합니다. 체온이 기준선보다 화씨 2도 이상 상승하면 수혈을 중단하고 체중에 따라 해열제를 투여한다. 10분간 휴지 후 수혈을 시작할 수 있습니다. 환자가 특정 부위 또는 전신에 과도한 가려움증을 느끼면 Chlorpheniramine maleate 주사를 투여합니다. 스테로이드는 심각한 호흡 곤란이나 통제할 수 없는 가려움증을 관리하기 위해 보존됩니다. 혈압, 맥박 및 호흡은 30분 간격으로 정기적으로 모니터링됩니다.

항체 역가 측정 절차

SARS-CoV-2 IgG 항체 역가는 다음 프로토콜에 따라 ELISA로 테스트됩니다.

1. 처음에 혈청/혈장 샘플(10μL)을 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 및 1:640으로 연속 희석하여 희석했습니다.
2. 100μl의 샘플 희석액을 SARS-CoV-2 항원으로 사전 코팅된 각 웰(공백 및 대조군 웰 제외)에 추가합니다.
3. 그런 다음 10μl의 검체가 추가됩니다. 100μl 컨트롤이 할당된 웰에 직접 추가됩니다. 모든 샘플은 중복으로 실행됩니다.
4. 플레이트를 플레이트 커버로 덮고 37°C에서 30분 동안 배양합니다.
5. 배양이 끝나면 각 웰은 희석된 Wash Buffer로 5회 세척됩니다.
6. 100μl의 conjugate가 Blank를 제외한 각 well에 추가됩니다.
7. 37°C에서 20분 동안 배양합니다.
8. 배양이 끝나면 각 웰은 희석된 Wash Buffer로 5회 세척됩니다.
9. 50μl의 기질 용액 A와 50μl의 기질 용액 B가 각 웰에 추가됩니다. 빛을 피하고 37°C에서 10분간 배양합니다.
10. Stop Solution 50μl가 각 웰에 추가됩니다.
11. 플레이트 판독기는 블랭크 웰로 보정되며 흡광도는 450nm에서 판독됩니다.
12. 샘플 OD 값은 ≥cutoff OD 값이었으며 IgG 항체가 양성임을 나타냅니다.
13. IgG 항체 역가는 종말점 희석에 의해 결정될 것이다.

방글라데시의 COVID-19 플라스미드 부족과 전 세계적 부족으로 인해 각 기증자로부터 2ml의 혈청이 보존되고 나중에 옥스퍼드 대학의 병원체 연구를 위해 Peter Medawar 건물로 배송됩니다. 옥스퍼드의 연구 협력자들은 중화 항체 역가를 수행하고 조사자들은 나중에 이를 각 기증자와 일치시킬 것입니다. 항체 역가 검사 중화 비용은 옥스퍼드 동료들이 관리합니다.

통계 분석:

Graphpad Prism v 7.0이 분석에 사용됩니다. 인구통계학적 요인과 임상적 특징은 범주형 변수에 대한 개수(%)와 연속 변수에 대한 중앙값(사분위수 범위[IQR])으로 요약됩니다. 주요 분석은 치료 의도(intention-to-treat) 기준으로 수행됩니다. 1차 결과에 대해 조사관은 단방향 ANOVA 테스트를 사용하여 세 가지 부문 간의 평균을 비교합니다. 조사관은 또한 한 번에 등록 후 3일 및 7일에 등록 중에 검열된 Hg의 >93% 및 PaO2/FiO2<200mmHg의 지속적인 포화도 >93% 및 PaO2/FiO2<200mm까지 시간을 평가하는 Prism 평가(로그 순위 Mantel-Cox 테스트)에서 사후 분석을 수행할 것입니다. 가리키다. 비모수적 2차 결과의 경우 모든 그룹은 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 비교됩니다. 중요한 경우 조사관은 비모수적 Mann-Whitney 테스트와 쌍별 비교를 수행할 계획이었습니다. 파라메트릭 결과의 경우 조사관은 쌍 전체에서 승산비를 비교했습니다.

시설 및 절차:

RT-PCR 및 기타 연구 관련 테스트는 BSMMU에서 수행됩니다. BSMMU 발열 클리닉은 이미 1200명 이상의 COVID-19 양성 사례를 치료했습니다. 잠재적 기증자는 이 환자 풀에서 추적됩니다. 동의하고 동의하는 기증자는 SHBPSI의 수혈 의학과로 보내질 것입니다. 5ml 혈장을 수집하여 ELISA 기반 항체 역가를 위해 CMBT 실험실로 보냅니다. 역가가 원하는 수준(1:320 이상)을 충족하면 다음 날 200ml 또는 400ml 무수혈 혈장(제공자의 가용성 및 동의에 따라 다름)이 수집됩니다. 중화 항체 역가를 확인하기 위해 옥스퍼드 대학교의 병원균 연구를 위한 Peter Medawar 건물로 보내기 위해 5ml의 혈청도 수집됩니다. 이것은 나중에 보내지고 기증자와 일치합니다. 샘플은 물질 이전 계약(MTA)에 따라 배송됩니다. 이 프로젝트의 Co-PI인 Fazle Rabbi Chowdhury 박사는 샘플을 해외로 운송하는 데 필요한 허가를 받았습니다. 마지막 단계에서 CP는 수혈 요구에 따라 DMCH 및 MuMCH의 임상 팀에 인계됩니다. 임상 팀은 CP 수혈 전후에 실험실 샘플 수집을 확인하고 사례 기록 양식에 데이터를 기록합니다. BSMMU의 진단검사의학팀은 실험실 테스트를 위해 임상팀을 지원할 것입니다.