Toipilasplasmahoito vaikeassa COVID-19-infektiossa

Tutkimuksen perustelut Tällä hetkellä COVID-19-infektiota vastaan ​​ei ole saatavilla erityistä hoitoa. Tukihoito yhdessä happipitoisuuden kanssa on ainoa hoitokeino. Tutkijat ovat jo avanneet yli 180 kliinistä tutkimusta mahdollisista COVID-19-hoidoista rekrytointia varten, ja lähes 150 voisi alkaa pian. Tähän mennessä ei kuitenkaan ole saatu päätökseen eikä raportoitu kliinistä interventiotutkimusta. Anekdoottien (pieni tapaussarja) perusteella lupaavia lääkkeitä voisivat olla atsitromysiini-hydroksiklorokiini-yhdistelmä, Lopinavir/Ritonavir, Tocilizumab, Ramdisivir, Favirinapir ja muut. CP-siirto on toinen lupaava vaihtoehto, jota on kokeiltu aiemmin SARS-CoV-, MERS-CoV- sekä flunssa- ja ebolavirusinfektioissa. Sen tehokkuutta COVID-19:ää vastaan ​​ei ole vielä tutkittu. Äskettäin julkaistu tapaussarja koostuu kymmenestä tapauksesta, jotka ennustavat lupaavia tuloksia. Siksi vaiheen II RCT siedettävyyden, tehon ja annosvasteen selvittämiseksi on tutkittava pikaisesti.

Tapaukset alkoivat lisääntyä Bangladeshissa ja vahvistettujen tapausten määrä ylitti jo tuhannen rajan. Ottaen huomioon muiden edellä mainittujen viruslääkkeiden ja biologisten lääkkeiden kustannukset ja pula, on väistämätöntä, että monilla potilaistamme ei ehkä ole varaa tai saada niitä. CP voidaan kuitenkin helposti kerätä toipuneilta potilailta, ja se voidaan helposti käsitellä aktiivisen infektion torjuntaan. Tämä voisi olla tehokas ja halpa hoitovaihtoehto maamme kaltaiselle maalle tämän katastrofin kohtaamiseen. Siksi vaiheen II RCT:n suorittaminen CP-siirrolla vaatii aikaa.

Tutkimuskysymys:

Onko CP-siirto siedettävää ja tehokasta vakavien COVID-19-potilaiden hoidossa verrattuna tavanomaiseen hoitoon?

Tavoitteet:

Yleinen tavoite:

Arvioida CP-siirron siedettävyyttä, tehokkuutta ja annosvastetta vaikeilla COVID-19-potilailla

Erityistavoitteet:

1. Sopivan tehokkaan CP-hoidon annoksen tunnistaminen
2. Tunnistaa hoidon tehokkuus niiden päätepisteiden perusteella
3. Tutkia kliinistä paranemista CP-siirron jälkeen vaikeilla COVID-19-potilailla
4. Arvioida laboratorion paranemista CP-siirron jälkeen vaikeilla COVID-19-potilailla

Opintojen suunnittelu:

Vaiheen II RCT

Opiskelupaikka:

Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU), Sheikh Hasina Burn & Plastic Surgery Institute, Dhaka Medical College, Mugda Medical College ja Center for Medical Biotechnology

Opiskelujakso:

Toukokuu 2020 – lokakuu 2020 (kuusi kuukautta)

Tutkimuspopulaatio:

COVID=19 positiivista potilasta, jotka on diagnosoitu RT-PCR:n perusteella BSMMU-kuumeklinikalla tai missä tahansa muussa hallituksen nimeämässä laboratoriossa ja otettu DMCH-, MuMC- ja BSMMU-hoitoon.

Satunnaistaminen ja sokkomenetelmä:

Satunnaistuksen tekee joku, joka ei ole yhteydessä potilaiden hoitoon tai arviointiin, satunnaislukutaulukon avulla. Määrärahat piilotetaan peräkkäin numeroituihin, läpinäkymättömiin, suljettuihin kirjekuoreihin. Tässä pilottitutkimuksessa CP tai tavallinen hoito ei sokeuteta. Ensisijainen tulos (happisaturaatiot, PaO2/FiO2 ja BP) tallennetaan kuitenkin objektiivisella automatisoidulla menetelmällä; tutkimushenkilöstö ei voi vaikuttaa näiden tietojen kirjaamiseen.

Otoskoko:

Vastaavaa tutkimusta ei ole aiemmin tehty. Siksi saatavilla ei ole tietoja, joita voitaisiin käyttää otoskoon laskennassa. Tämä pilottitutkimus on tarpeen, jotta saataisiin alustavia tietoja tehosta ja turvallisuudesta, jotta voidaan suunnitella laajempi tutkimus.

Tutkimusvälineet

1. Yleinen kyselylomake sosiodemografisten tietojen arviointia varten.
2. Tarkistuslista kliinisistä löydöksistä
3. Tarkistuslista tutkinnan tuloksista.

Muuttujien mittarit

1. Sosiaali-demografiset muuttujat

   • Ikä
   • Sukupuoli Mies Nainen)
   • Asuinalue (kaupunki/maaseutu)
   • Ammatti

2. Kliiniset muuttujat:

   • Oireet
   • Systolinen verenpaine (mmHg)
   • Diastolinen verenpaine (mmHg)
   • Lämpötila
   • Hengitystiheys
   • Syke
   • GCS

3. Laboratoriomuuttujat

   • CXR
   • CBC
   • CRP
   • S. Ferritin
   • SGPT
   • SGOT
   • Vasta-ainetitteri

Afereettisen plasman keräysmenettely

1. Luovutusta edeltävä seulonta: Ensinnäkin perifeerisestä laskimokohdasta otetaan 3 ml verta mieluiten käden selästä ja säilytetään EDTA-putkessa jatkotutkimuksia varten. Veriryhmä varmistetaan käyttämällä tunnettuja antiseerumeja. Laitemenetelmällä testataan 5 sairauden seulontatestiä (HBs Ag, Anti HCV, HIV, syfilis ja malaria). Automaattinen analysaattori laskee täydellisen verenkuvan. Jos kaikki pysyy suotuisana, seuraa seuraava askel.
2. Turvallisuusarviointi: Luovuttajan ruumiinpaino ja pituus mitataan tavanomaisella menetelmällä (tavallinen digitaalinen paino- ja pituusasteikko). Sitraattimyrkytyksen tai hypokalsemisten komplikaatioiden (nykiminen, puutuminen, pahoinvointi, lievä hengitysvaikeus jne.) ehkäisemiseksi jokaiselle luovuttajalle annetaan 500 mg kalsiumkarbonaattia ennen toimenpiteen aloittamista. Verenpainetta ja pulssia seurataan 10 minuutin välein varotoimenpiteiden vuoksi koko toimenpiteen ajan. Paino, korkeus ja CBC-parametri annetaan afereesikoneessa asennusta varten. Suonipunktioon valitaan näkyvä ja helposti käsin kosketeltava kyynärpäälaskimo. Ennen suonen puhkaisua annetaan vähintään 50-60 mm Hg painetta suonipunktioalueen yläpuolelle jatkuvan paineen ylläpitämiseksi. Kun kaikki on valmis, toimenpide aloitetaan puhkaisemalla yksittäinen neula kohdistettuun laskimoon.

Toipilasplasman (CP) verensiirron vaiheet Ennen kuin potilaalle annetaan verenpaine, pulssi, lämpötila, hengitystiheys tallennetaan. Se voidaan antaa keskuslaskimokatetrin tai perifeerisen kanavan kautta. Jos perifeerinen laskimokohta valitaan, vähintään 21 g:n neula tulee varmistaa. Veriryhmä ja ristiinsovitus tulee varmistaa ennen verensiirron aloittamista. Kun kirjoitusvirheen mahdollisuutta ei ole, CP-siirto voidaan aloittaa nopeudella 100 ml/tunti.

Turvallisuusarviointi:

Jos potilaalla oli kuumetta, lämpötilataulukkoa on pidettävä yllä. Kun lämpötila nousee yli 2 Fahrenheit-astetta lähtötasosta, verensiirto tulee lopettaa ja kuumetta alentavaa lääkettä tulee antaa kehon painon mukaan. 10 minuutin tauon jälkeen verensiirto voidaan aloittaa. Jos potilas tuntee liiallista kutinaa tietyllä alueella tai koko kehossa, hänelle annetaan injektio kloorifeniramiinimaleaattia. Steroidi säilytettäisiin vaikean hengitysvaikeuden tai hallitsemattoman kutinan hoitoon. Verenpainetta, pulssia ja hengitystä seurataan säännöllisesti 30 minuutin välein.

Vasta-ainetiitterin mittausmenettely

SARS-CoV-2 IgG-vasta-ainetiitteri testataan ELISA:lla seuraavan protokollan mukaisesti:

1. Aluksi seerumi/plasmanäytteet (10 µl) laimennettiin suhteisiin 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 ja 1:640 sarjalaimennuksella.
2. 100 μl näytelaimentimia lisätään kuhunkin kuoppaan (paitsi nolla- ja kontrollikuoppa), jotka on esipäällystetty SARS-CoV-2-antigeeneillä.
3. Sitten lisätään 10 μl näytettä. 100 µl kontrollit lisätään suoraan määritettyyn kuoppaan. Kaikki näytteet ajetaan kahtena kappaleena.
4. Levy peitetään levyn kannella ja sitä inkuboidaan 30 minuuttia 37 °C:ssa.
5. Inkuboinnin lopussa jokainen kuoppa pestään 5 kertaa laimennetulla pesupuskurilla.
6. 100 μl konjugaattia lisätään kuhunkin kuoppaan tyhjää lukuun ottamatta.
7. Inkuboidaan 20 minuuttia 37 °C:ssa.
8. Inkuboinnin lopussa jokainen kuoppa pestään 5 kertaa laimennetulla pesupuskurilla.
9. 50 μl substraattiliuosta A ja 50 μl substraattiliuosta B lisätään kuhunkin kuoppaan. Inkuboidaan 10 minuuttia 37 °C:ssa valoa välttäen.
10. Jokaiseen kuoppaan lisätään 50 μl pysäytysliuosta.
11. Levynlukija kalibroidaan tyhjällä kuopalla ja absorbanssi luetaan aallonpituudella 450 nm.
12. Näytteen OD-arvo oli ≥raja-OD-arvo osoittaa IgG-vasta-ainepositiivisen.
13. IgG-vasta-ainetiitteri määritetään päätepistelaimennuksella.

Bangladeshissa olevan COVID-19-plasmidin puutteen ja maailmanlaajuisen pulan vuoksi jokaiselta luovuttajalta säilytetään 2 ml seerumia, joka toimitetaan myöhemmin Oxfordin yliopiston peter Medawar -rakennukseen patogeenien tutkimusta varten. Tutkimusyhteistyökumppanit Oxfordissa suorittavat neutraloivan vasta-aineen tiitterin, ja tutkijat yhdistävät ne myöhemmin kunkin luovuttajan kanssa. Neutraloivan vasta-aineen tiitteritestin kustannukset hoitavat Oxfordin kollegat.

Tilastollinen analyysi:

Graphpad Prism v 7.0 käytetään analysointiin. Demografiset tekijät ja kliiniset ominaisuudet esitetään yhteenvetona kategoristen muuttujien lukumäärillä (%) ja jatkuvien muuttujien mediaanilla (neljännesten välinen vaihteluväli [IQR]), koska yhdenkään ei odotettu jakautuvan normaalisti. Pääanalyysi tehdään hoitoaikeen perusteella. Ensisijaisen tuloksen saamiseksi tutkijat vertaavat kolmen haaran keskiarvoa käyttämällä yksisuuntaista ANOVA-testiä. Tutkijat tekevät myös posthoc-analyysin prismassa arvioimalla (log-rank Mantel-Cox -testi) aikaa jatkuvaan saturaatioon >93 % ja PaO2/FiO2<200 mm Hg sensuroituun rekisteröinnin aikana, 3 päivää ja 7 päivää rekisteröinnin jälkeen yhdellä kertaa. kohta. Ei-parametristen toissijaisten tulosten osalta kaikkia ryhmiä verrataan käyttämällä Kruskal-Wallis-testiä; jos se oli merkittävää, tutkijat suunnittelivat sitten suorittavansa parivertailuja ei-parametrisen Mann-Whitneyn testillä. Parametristen tulosten osalta tutkijat vertasivat parien todennäköisyyssuhteita.

Tilat ja menettely:

RT-PCR ja muut tutkimukseen liittyvät testit tehdään BSMMU:ssa. BSMMU-kuumeklinikalla hoidettiin jo yli 1 200 COVID-19-positiivista tapausta. Mahdollisia luovuttajia seurataan tästä potilasjoukosta. Luovuttajat, jotka suostuvat ja antavat suostumuksensa, lähetetään sitten SHBPSI:n verensiirtolääketieteen osastolle. 5 ml plasmaa kerätään ja lähetetään CMBT-laboratorioon ELISA-pohjaista vasta-ainetiitteriä varten. Jos titteri saavuttaa halutun tason (1:320 ja enemmän), kerätään seuraavana päivänä 200 ml tai 400 ml afereettista plasmaa (riippuen saatavuudesta ja luovuttajan suostumuksesta). 5 ml seerumia kerätään myös lähetettäväksi Peter Medawar Building for Pathogen Research, Oxfordin yliopistoon neutraloivan vasta-aineen tiitterin tarkistamista varten. Tämä lähetetään myöhemmin ja sovitetaan luovuttajan kanssa. Näytteet toimitetaan materiaalinsiirtosopimuksen (MTA) mukaisesti. Tohtori Fazle Rabbi Chowdhurylla, tämän projektin johtajalla, on tarvittava lupa näytteiden kuljettamiseen ulkomaille. Viimeisessä vaiheessa CP luovutetaan DMCH:n ja MuMCH:n kliiniselle tiimille heidän verensiirtotarpeidensa mukaisesti. Kliininen tiimi varmistaa laboratorionäytteiden keräämisen ennen CP-siirtoa ja sen jälkeen ja kirjaa tiedot tapaustietolomakkeeseen. BSMMU:n laboratoriolääketiimi tukee kliinistä ryhmää laboratoriotestauksissa.