表征对蚊虫叮咬的体液免疫反应 (SG6)
用人类挑战模型表征对东南亚疟疾和登革热蚊子载体唾液抗原的体液免疫反应
针对蚊子唾液抗原的体液反应的特征尚不清楚。 这是使用免疫学标记作为流行病学试验结果和作为干预措施实施部署指标的主要限制。 一些按蚊和伊蚊载体物种的基因组组装的最新进展促进了使用直系同源唾液腺蛋白序列和 B 细胞预测算法在计算机中识别新的候选肽。 本研究的目的是评估在受控暴露于实验室改造的 An 菌落后针对候选肽的体液免疫反应。最小的，一个。斑点和安。 迪鲁斯，Ae。埃及伊蚊和 Ae。 白纹伊蚊。
这项研究将提供必要的信息，以识别和验证东南亚人类接触疟疾和登革热蚊子媒介的免疫学标记。 作为监测系统的一部分，免疫学标记将有助于了解传播动态和预测传播风险，并有助于评估媒介控制干预措施在昆虫学试验中或在该地区实施干预措施期间的有效性。
研究概览
详细说明
这项研究是一个人类挑战模型，有五个手臂对应于受控暴露于未感染的实验室适应的小按蚊群落的叮咬，An。斑点，安。恐狼，伊蚊。 埃及伊蚊或 Ae。 白纹伊蚊。 在筛选和资格评估之后，将使用根据蚊子种类和叮咬次数（总共 35 或 305 次叮咬）分层的块随机设计，将 150 名参与者纳入研究，例如构成 10 组，每组 15 人学习条件。 参与者将参与研究 112 天。 基线将包括 2 周内的 2 次访问（第 0 天和第 7 天）。
在低暴露组中，从第 14 天到第 56 天，参与者将每周接触 5 次蚊虫叮咬（七次挑战，5 次蚊虫叮咬/六周内的挑战，共产生 35 次蚊虫叮咬）。 在高暴露组中，参与者将在第 14 天暴露于 5 次蚊虫叮咬，然后从第 21 天到第 56 天每周一次暴露于 50 次蚊虫叮咬（一次挑战 5 次蚊虫叮咬，六次挑战 50 次蚊虫叮咬/挑战超过6 周，共产生 305 次蚊虫叮咬）。
本研究中使用的叮咬次数和随访方式是根据之前在该地区进行的昆虫学调查、已发表的蚊虫叮咬人类挑战报告以及目前对唾液抗原的体液反应特征的了解来选择的。 在第 14 天和第 21 天挑战后，将记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 对蚊虫叮咬过敏的参与者将退出研究。 每周从每个研究参与者那里收集毛细血管和静脉血样。 将采集 18 份静脉血样，包括在筛选访视期间抽取一份 2 mL 样本，在访视 2、3、6、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18 期间抽取 14 份 8.6 mL 样本和 19，以及在第 4、13 和 20 次访问期间的 3 个 18.6 mL 样本（每位参与者总共 178.2 mL 静脉血）。 在第 2、3、4、6、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18 次访问期间收集的 300 μL 毛细血管血将制成 17 个干血斑 (DBS) 样本、19 和 20（每位参与者总共 5.1 mL 毛细血管血）。
将使用公开可用的基因组序列和 B 细胞表位预测算法在计算机中识别候选肽。 将通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 和用血清和 DBS 标本进行的中尺度筛选来评估针对候选生物标志物的抗体滴度动力学。 简而言之，如前所述，将使用未暴露于蚊虫叮咬的个体的参考血清样本来确定测定的阳性阈值。 在从未暴露个体获得的 60 份参考血清（30 份从泰国红十字会获得的泰国血清和 30 份从伯内特研究所获得的澳大利亚血清）中测得的 ELISA 信号将用于确定测定的阳性阈值。 测定的阳性阈值将定义为高于未暴露对照人群测量的平均光密度 (ΔOD) 的三个标准偏差 (SD)。 ΔOD 高于此截止值的研究人群测试将被视为阳性（即免疫反应）。 研究样品的特异性抗体滴度将通过进行连续稀释实验来确定。 将从研究样品中进行系列稀释，并确定每次稀释的 ΔOD。 抗体滴度将定义为给出阳性信号的最高稀释度。 将比较使用 DBS 和血清样本获得的结果，以评估在流行病学研究期间使用 DBS 样本监测蚊虫叮咬暴露的可行性。 在访问 4（基线）、13（暴露结束后早期）和 20（暴露后）期间收集的血清样本也将用免疫蛋白质组学方法（唾液腺蛋白提取物的二维凝胶电泳、蛋白质印迹和质谱法）进行分析) 产生关于蚊子唾液腺蛋白质组的抗原特性的额外信息。
计划样本量：150 名参与者，随访 16 周
参与者身份：
研究参与者被定义为年龄在 18 至 60 岁之间并愿意参与研究的健康参与者。 这项研究将在湄索的 Shoklo 疟疾研究中心 (SMRU) 研究中心进行。
研究类型
注册 (实际的)
阶段
- 不适用
联系人和位置
学习地点
-
-
Changwat Tak
-
Mae Sot、Changwat Tak、泰国、63110
- Shoklo Malaria Research Unit (SMRU)
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-
参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
描述
纳入标准：
- 由负责的医生判断健康的男性或女性参与者，在医学评估中没有发现异常；
- 泰族、缅甸族或克伦族；
- 年龄≥18岁至<60岁；
- 过去12个月住在美索市；
- 愿意参加活动并能够对参加研究给予知情同意；
- 能够忍受蚊子的直接暴露。
排除标准：
- 过去 12 个月内在疟疾流行地区（乡村）旅行的历史，或计划在研究期间这样做；
- 负责医生认为会干扰结果测量的药物或病症；
- 中度和重度贫血（血红蛋白浓度低于 110 g/L 血液）；
- 对蚊虫叮咬过敏或过敏反应；
- 孕妇
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
- 主要用途：基础科学
- 分配：随机化
- 介入模型：并行分配
- 屏蔽：无（打开标签）
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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实验性的：一个。最低限度
这只手臂将分为两组；低暴露组和高暴露组。 在低暴露组中，从第 14 天到第 56 天，参与者将每周接触 5 次蚊虫叮咬（七次挑战，5 次蚊虫叮咬/挑战超过六周，共产生 35 次蚊虫叮咬）。 在高暴露组中，参与者将在第 14 天暴露于 5 次蚊虫叮咬，然后从第 21 天到第 56 天每周一次暴露于 50 次蚊虫叮咬（一次挑战 5 次蚊虫叮咬，六次挑战 50 次蚊虫叮咬/挑战超过6 周，共产生 305 次蚊虫叮咬）。 |
参加者将暴露于蚊虫叮咬。 对于低剂量挑战，将 5 只 5 至 7 天大的未生育雌性成象（即之前从未喂过血的雌性成象）单独放入覆盖有网状材料的 50 mL 塑料管中。 对于高剂量挑战，将 47 只蚊子分成四个直径 10 厘米的塑料杯，上面覆盖有网状材料（三个杯子有 12 只蚊子，一个杯子有 11 只蚊子），并将 3 只蚊子单独引入 50 mL 塑料管中. 参与者手臂上的蚊虫叮咬将用于评估立即和延迟的皮肤反应。 在第 14 天和第 21 天挑战后的 20-30 分钟和 24-36 小时分别记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 |
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实验性的：一个。斑点
同上
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参加者将暴露于蚊虫叮咬。 对于低剂量挑战，将 5 只 5 至 7 天大的未生育雌性成象（即之前从未喂过血的雌性成象）单独放入覆盖有网状材料的 50 mL 塑料管中。 对于高剂量挑战，将 47 只蚊子分成四个直径 10 厘米的塑料杯，上面覆盖有网状材料（三个杯子有 12 只蚊子，一个杯子有 11 只蚊子），并将 3 只蚊子单独引入 50 mL 塑料管中. 参与者手臂上的蚊虫叮咬将用于评估立即和延迟的皮肤反应。 在第 14 天和第 21 天挑战后的 20-30 分钟和 24-36 小时分别记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 |
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实验性的：一个。恶魔
同上
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参加者将暴露于蚊虫叮咬。 对于低剂量挑战，将 5 只 5 至 7 天大的未生育雌性成象（即之前从未喂过血的雌性成象）单独放入覆盖有网状材料的 50 mL 塑料管中。 对于高剂量挑战，将 47 只蚊子分成四个直径 10 厘米的塑料杯，上面覆盖有网状材料（三个杯子有 12 只蚊子，一个杯子有 11 只蚊子），并将 3 只蚊子单独引入 50 mL 塑料管中. 参与者手臂上的蚊虫叮咬将用于评估立即和延迟的皮肤反应。 在第 14 天和第 21 天挑战后的 20-30 分钟和 24-36 小时分别记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 |
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实验性的：嗯。埃及伊蚊
同上
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参加者将暴露于蚊虫叮咬。 对于低剂量挑战，将 5 只 5 至 7 天大的未生育雌性成象（即之前从未喂过血的雌性成象）单独放入覆盖有网状材料的 50 mL 塑料管中。 对于高剂量挑战，将 47 只蚊子分成四个直径 10 厘米的塑料杯，上面覆盖有网状材料（三个杯子有 12 只蚊子，一个杯子有 11 只蚊子），并将 3 只蚊子单独引入 50 mL 塑料管中. 参与者手臂上的蚊虫叮咬将用于评估立即和延迟的皮肤反应。 在第 14 天和第 21 天挑战后的 20-30 分钟和 24-36 小时分别记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 |
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实验性的：嗯。白纹伊蚊
同上
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参加者将暴露于蚊虫叮咬。 对于低剂量挑战，将 5 只 5 至 7 天大的未生育雌性成象（即之前从未喂过血的雌性成象）单独放入覆盖有网状材料的 50 mL 塑料管中。 对于高剂量挑战，将 47 只蚊子分成四个直径 10 厘米的塑料杯，上面覆盖有网状材料（三个杯子有 12 只蚊子，一个杯子有 11 只蚊子），并将 3 只蚊子单独引入 50 mL 塑料管中. 参与者手臂上的蚊虫叮咬将用于评估立即和延迟的皮肤反应。 在第 14 天和第 21 天挑战后的 20-30 分钟和 24-36 小时分别记录立即和延迟的皮肤反应，需要在第 15 天和第 22 天进行额外访问。 |
研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
大体时间 |
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通过 ELISA 和中尺度筛选确定的反复暴露于实验室饲养的蚊虫叮咬之前和期间针对候选肽的特异性抗体滴度水平。
大体时间：基线到第 112 天
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基线到第 112 天
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通过 ELISA 和中尺度筛选确定的反复暴露于实验室饲养的蚊虫叮咬之前和期间针对候选肽的特异性抗体滴度的动力学。
大体时间：基线到第 112 天
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基线到第 112 天
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用免疫蛋白质组学方法（唾液腺蛋白提取物的二维凝胶电泳、蛋白质印迹和质谱法）确定的唾液抗原序列。
大体时间：第 14 天到第 112 天
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第 14 天到第 112 天
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次要结果测量
结果测量 |
大体时间 |
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在对应于不同暴露水平的亚组中确定的抗体滴度的比较。
大体时间：第 0 天、第 7 天（基线）、第 14、21、28、35、42、49、56 天（暴露期）、63、70、77、84、91、98、105 和 112（暴露后时期）。
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第 0 天、第 7 天（基线）、第 14、21、28、35、42、49、56 天（暴露期）、63、70、77、84、91、98、105 和 112（暴露后时期）。
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比较 DBS 和静脉血样中测定的抗体滴度。
大体时间：第 0 天、第 7 天（基线）、第 14、21、28、35、42、49、56 天（暴露期）、63、70、77、84、91、98、105 和 112（暴露后时期）。
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第 0 天、第 7 天（基线）、第 14、21、28、35、42、49、56 天（暴露期）、63、70、77、84、91、98、105 和 112（暴露后时期）。
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合作者和调查者
合作者
调查人员
- 首席研究员：François Nosten、Shoklo Malaria Research Unit
出版物和有用的链接
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (实际的)
研究完成 (实际的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
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