Характеристика гуморального иммунного ответа на укусы комаров (SG6)
Характеристика гуморального иммунного ответа против антигенов слюны комаров-переносчиков малярии и денге из Юго-Восточной Азии с помощью модели заражения человека
Характеристики гуморального ответа, направленного против антигенов слюны комаров, точно не известны. Это серьезное ограничение для использования иммунологических маркеров в качестве исхода в эпидемиологических исследованиях и в качестве индикатора оперативного развертывания вмешательств. Недавние успехи в сборке генома некоторых видов комаров-переносчиков Anopheles и Aedes облегчили идентификацию новых пептидов-кандидатов in silico с использованием последовательностей ортологичных белков слюнных желез и алгоритмов прогнозирования В-клеток. Целью данного исследования является оценка гуморального иммунного ответа, направленного против пептидов-кандидатов, после контролируемого воздействия адаптированных в лабораторных условиях колоний An. минимус, Ан. пятнистый и An. дирус, Ае. aegypti и Ae. альбопиктус.
Это исследование предоставит важную информацию для выявления и проверки иммунологических маркеров воздействия на человека переносчиков малярии и комаров денге в Юго-Восточной Азии. Иммунологические маркеры могут быть полезны для понимания динамики передачи и прогнозирования риска передачи в рамках системы эпиднадзора, а также для оценки эффективности мероприятий по борьбе с переносчиками в энтомологических исследованиях или при оперативном развертывании мероприятий в регионе.
Обзор исследования
Подробное описание
Это исследование представляет собой модель заражения человека с пятью ответвлениями, соответствующими контролируемому воздействию укусов неинфицированных адаптированных в лабораторных условиях колоний Anopheles minimus, An. пятнистый, An. дирус, эдес. aegypti или Ae. альбопиктус. После скрининга и оценки приемлемости 150 участников будут включены в исследование с использованием блочно-рандомизированного дизайна, стратифицированного по видам комаров и количеству укусов (всего 35 или 305 укусов), таким образом, чтобы составить 10 групп по 15 человек для каждого из состояние учебы. Участники будут находиться в исследовании 112 дней. Базовый уровень будет состоять из 2 посещений в течение 2 недель (день 0 и день 7).
В группах с низким уровнем воздействия участники будут подвергаться 5 укусам комаров с недельными интервалами с 14 по 56 день (семь испытаний с 5 укусами комаров / испытание в течение шести недель, что дает в общей сложности 35 укусов комаров). В группе с высоким уровнем воздействия участники будут подвергаться 5 укусам комаров на 14-й день, а затем 50 укусам комаров с недельными интервалами с 21-го по 56-й день (одно испытание с 5 укусами комаров и шесть испытаний с 50 укусами комаров/вызов в течение 6 недель, всего 305 комариных укусов).
Количество укусов и методы последующего наблюдения, используемые в этом исследовании, были выбраны на основе предыдущих энтомологических исследований, проведенных в этой области, опубликованных отчетов о заражении людей укусами комаров и текущих знаний о характеристике гуморального ответа на антигены слюны. Как немедленные, так и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы после заражения на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. Участники с повышенной чувствительностью к укусам комаров будут исключены из исследования. Образцы капиллярной и венозной крови будут собираться еженедельно у каждого участника исследования. Будет взято восемнадцать образцов венозной крови, включая один образец объемом 2 мл, взятый во время скринингового визита, 14 образцов по 8,6 мл во время визитов 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18. и 19, и 3 образца по 18,6 мл во время визитов 4, 13 и 20 (всего 178,2 мл венозной крови на участника). Семнадцать образцов сухой капли крови (DBS) будут изготовлены из 300 мкл капиллярной крови, собранной во время визитов 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. , 19 и 20 (всего 5,1 мл капиллярной крови на участника).
Пептиды-кандидаты будут идентифицированы in silico с использованием общедоступных последовательностей геномов и алгоритмов прогнозирования эпитопов В-клеток. Кинетика титров антител против биомаркеров-кандидатов будет оцениваться с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) и мезомасштабного скрининга, проводимого с образцами сыворотки и DBS. Вкратце, порог положительности анализа будет определяться с использованием эталонных образцов сыворотки от лиц, не подвергшихся укусам комаров, как описано ранее. Сигнал ELISA, измеренный в 60 эталонных сыворотках, полученных от не подвергавшихся воздействию людей (30 тайских сывороток, полученных из Тайского Красного Креста, и 30 австралийских сывороток, полученных из Института Бернета), будет использоваться для определения порога положительности анализа. Порог положительности анализа будет определяться как три стандартных отклонения (SD) выше средней оптической плотности (ΔOD), измеренной для необлученной контрольной популяции. Тест в исследуемой популяции с ΔOD выше этого порогового значения будет считаться положительным (т. е. иммунным ответом). Титр специфических антител исследуемых образцов будет определяться путем проведения экспериментов с серийными разведениями. Из исследуемых образцов будет сделано серийное разведение, и для каждого разведения будет определена ΔOD. Титр антител будет определяться как максимальное разведение, дающее положительный сигнал. Результаты, полученные с образцами DBS и сыворотки, будут сравниваться, чтобы оценить возможность использования образцов DBS для мониторинга воздействия укусов комаров во время эпидемиологических исследований. Образцы сыворотки, собранные во время визитов 4 (исходный уровень), 13 (вскоре после окончания воздействия) и 20 (после воздействия), также будут проанализированы с помощью иммунопротеомного подхода (двухмерный гель-электрофорез белковых экстрактов слюнных желез, Вестерн-блоттинг и масс-спектрометрия). ), что дает дополнительную информацию об антигенных свойствах протеома слюнной железы комара.
Запланированный размер выборки: 150 участников с последующим наблюдением в течение 16 недель.
Идентификация участника:
Участниками исследования считаются здоровые участники в возрасте от 18 до 60 лет, желающие принять участие в исследовании. Это исследование будет проходить в исследовательском центре Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) в Мае Соте.
Тип исследования
Регистрация (Действительный)
Фаза
- Непригодный
Контакты и местонахождение
Места учебы
-
-
Changwat Tak
-
Mae Sot, Changwat Tak, Таиланд, 63110
- Shoklo Malaria Research Unit (SMRU)
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Описание
Критерии включения:
- Здоровый участник мужского или женского пола, осмотренный ответственным врачом, без каких-либо аномалий, выявленных при медицинском осмотре;
- тайская, бирманская или каренская национальность;
- Возраст от ≥ 18 до <60 лет;
- Проживание в городе Мае Сот в течение последних 12 месяцев;
- желание участвовать в деятельности и возможность дать информированное согласие на участие в исследовании;
- Способен переносить прямое воздействие комаров.
Критерий исключения:
- История поездок в эндемичный по малярии район (сельская деревня) за последние 12 месяцев или планируют это сделать во время исследования;
- Лекарство или состояние, которое, по мнению ответственного врача, может помешать оценке исхода;
- Анемия средней и тяжелой степени (концентрация гемоглобина менее 110 г/л крови);
- Гиперчувствительность или анафилаксия на укусы комаров;
- Беременные женщины
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
- Основная цель: Фундаментальная наука
- Распределение: Рандомизированный
- Интервенционная модель: Параллельное назначение
- Маскировка: Нет (открытая этикетка)
Оружие и интервенции
Группа участников / Армия |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Экспериментальный: Ан. минимус
Эта рука будет разделена на 2 группы; группы с низкой экспозицией и группа с высокой экспозицией. В группе с низким уровнем воздействия участники будут подвергаться 5 укусам комаров с недельными интервалами с 14-го по 56-й день (семь испытаний с 5 укусами комаров / испытание в течение шести недель, что дает в общей сложности 35 укусов комаров). В группе с высоким уровнем воздействия участники будут подвергаться 5 укусам комаров на 14-й день, а затем 50 укусам комаров с недельными интервалами с 21-го по 56-й день (одно испытание с 5 укусами комаров и шесть испытаний с 50 укусами комаров/вызов в течение 6 недель, всего 305 комариных укусов). |
Участники будут подвергаться укусам комаров. Для контрольного заражения низкой дозой пять нерожавших самок в возрасте от 5 до 7 дней (т. е. никогда ранее не кормившихся кровью) помещают в пластиковую пробирку емкостью 50 мл, покрытую сетчатым материалом. Для заражения высокими дозами 47 комаров будут разделены на четыре пластиковые чашки диаметром 10 см, покрытые сеточным материалом (три чашки с 12 комарами и одна чашка с 11 комарами), и 3 комара будут помещены по отдельности в пластиковые пробирки объемом 50 мл. . Укусы комаров, нанесенные на руку участника, будут использоваться для оценки немедленных и отсроченных кожных реакций. Немедленные и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы соответственно через 20-30 минут и 24-36 часов после провокаций на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. |
|
Экспериментальный: Ан. пятно
То же, что и выше
|
Участники будут подвергаться укусам комаров. Для контрольного заражения низкой дозой пять нерожавших самок в возрасте от 5 до 7 дней (т. е. никогда ранее не кормившихся кровью) помещают в пластиковую пробирку емкостью 50 мл, покрытую сетчатым материалом. Для заражения высокими дозами 47 комаров будут разделены на четыре пластиковые чашки диаметром 10 см, покрытые сеточным материалом (три чашки с 12 комарами и одна чашка с 11 комарами), и 3 комара будут помещены по отдельности в пластиковые пробирки объемом 50 мл. . Укусы комаров, нанесенные на руку участника, будут использоваться для оценки немедленных и отсроченных кожных реакций. Немедленные и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы соответственно через 20-30 минут и 24-36 часов после провокаций на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. |
|
Экспериментальный: Ан. дирус
То же, что и выше
|
Участники будут подвергаться укусам комаров. Для контрольного заражения низкой дозой пять нерожавших самок в возрасте от 5 до 7 дней (т. е. никогда ранее не кормившихся кровью) помещают в пластиковую пробирку емкостью 50 мл, покрытую сетчатым материалом. Для заражения высокими дозами 47 комаров будут разделены на четыре пластиковые чашки диаметром 10 см, покрытые сеточным материалом (три чашки с 12 комарами и одна чашка с 11 комарами), и 3 комара будут помещены по отдельности в пластиковые пробирки объемом 50 мл. . Укусы комаров, нанесенные на руку участника, будут использоваться для оценки немедленных и отсроченных кожных реакций. Немедленные и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы соответственно через 20-30 минут и 24-36 часов после провокаций на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. |
|
Экспериментальный: Ае. эгиптянин
То же, что и выше
|
Участники будут подвергаться укусам комаров. Для контрольного заражения низкой дозой пять нерожавших самок в возрасте от 5 до 7 дней (т. е. никогда ранее не кормившихся кровью) помещают в пластиковую пробирку емкостью 50 мл, покрытую сетчатым материалом. Для заражения высокими дозами 47 комаров будут разделены на четыре пластиковые чашки диаметром 10 см, покрытые сеточным материалом (три чашки с 12 комарами и одна чашка с 11 комарами), и 3 комара будут помещены по отдельности в пластиковые пробирки объемом 50 мл. . Укусы комаров, нанесенные на руку участника, будут использоваться для оценки немедленных и отсроченных кожных реакций. Немедленные и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы соответственно через 20-30 минут и 24-36 часов после провокаций на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. |
|
Экспериментальный: Ае. альбопиктус
То же, что и выше
|
Участники будут подвергаться укусам комаров. Для контрольного заражения низкой дозой пять нерожавших самок в возрасте от 5 до 7 дней (т. е. никогда ранее не кормившихся кровью) помещают в пластиковую пробирку емкостью 50 мл, покрытую сетчатым материалом. Для заражения высокими дозами 47 комаров будут разделены на четыре пластиковые чашки диаметром 10 см, покрытые сеточным материалом (три чашки с 12 комарами и одна чашка с 11 комарами), и 3 комара будут помещены по отдельности в пластиковые пробирки объемом 50 мл. . Укусы комаров, нанесенные на руку участника, будут использоваться для оценки немедленных и отсроченных кожных реакций. Немедленные и отсроченные кожные реакции будут зарегистрированы соответственно через 20-30 минут и 24-36 часов после провокаций на 14-й и 21-й день, что потребует дополнительных посещений на 15-й и 22-й день. |
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Временное ограничение |
|---|---|
|
Уровни титров специфических антител против пептидов-кандидатов до и во время многократного воздействия укусов выращенных в лаборатории комаров, определенные с помощью ИФА и мезомасштабного скрининга.
Временное ограничение: от исходного уровня до 112 дня
|
от исходного уровня до 112 дня
|
|
Кинетика титров специфических антител против пептидов-кандидатов до и во время многократного воздействия укусов выращенных в лаборатории комаров, определенная с помощью ИФА и мезомасштабного скрининга.
Временное ограничение: от исходного уровня до 112 дня
|
от исходного уровня до 112 дня
|
|
Последовательность антигенов слюны определена иммунопротеомным методом (2D гель-электрофорез белковых экстрактов слюнных желез, Вестерн-блот и масс-спектрометрия).
Временное ограничение: С 14 по 112 день
|
С 14 по 112 день
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Временное ограничение |
|---|---|
|
Сравнение титров антител, определенных в подгруппах, соответствующих разным уровням воздействия.
Временное ограничение: День 0, 7 (базовый уровень), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (период воздействия), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 и 112 (период после воздействия).
|
День 0, 7 (базовый уровень), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (период воздействия), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 и 112 (период после воздействия).
|
|
Сравнение титров антител, определенных в образцах DBS и венозной крови.
Временное ограничение: День 0, 7 (базовый уровень), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (период воздействия), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 и 112 (период после воздействия).
|
День 0, 7 (базовый уровень), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (период воздействия), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 и 112 (период после воздействия).
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Соавторы
Следователи
- Главный следователь: François Nosten, Shoklo Malaria Research Unit
Публикации и полезные ссылки
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
Первичное завершение (Действительный)
Завершение исследования (Действительный)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Действительный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Дополнительные соответствующие термины MeSH
Другие идентификационные номера исследования
- MAL19009
Планирование данных отдельных участников (IPD)
Планируете делиться данными об отдельных участниках (IPD)?
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .
Клинические исследования Комариные укусы
-
Institute of Hematology & Blood Diseases Hospital...РекрутингМножественная миелома, недавно диагностированнаяКитай
-
The University of Texas Health Science Center,...Vitamix Foundation; University of Texas at Austin; Brighter Bites; Penn State Better...ЗавершенныйОжирение | Психическое здоровье Wellness 1 | Питание, Здоровое | Риск сахарного диабетаСоединенные Штаты
-
Institute of Hematology & Blood Diseases Hospital...РекрутингМножественная миелома, недавно диагностированнаяКитай
-
Institute of Hematology & Blood Diseases Hospital...РекрутингМножественная миелома, лейкоз плазматических клетокКитай