Karakterisering af humoral immunrespons på myggestik (SG6)

Denne undersøgelse er en human udfordringsmodel med fem arme svarende til kontrolleret eksponering for bid af uinficerede laboratorietilpassede kolonier af Anopheles minimus, An. maculatus, An. dirus, Aedes. aegypti eller Ae. albopictus. Efter screening og berettigelsesvurdering vil 150 deltagere blive tilmeldt undersøgelsen ved hjælp af et blok-randomiseret design stratificeret på myggearten og antallet af bid (35 eller 305 bid i alt), således at de udgør 10 grupper af 15 individer for hver af de studietilstand. Deltagerne vil være i undersøgelsen i 112 dage. Baseline vil bestå af 2 besøg over 2 uger (dag 0 og dag 7).

I laveksponeringsgrupperne vil deltagerne blive udsat for 5 myggestik med ugentlige intervaller fra dag 14 til dag 56 (syv udfordringer med 5 myggestik/udfordring over seks uger, hvilket giver i alt 35 myggestik). I højeksponeringsgruppen vil deltagerne blive udsat for 5 myggestik på dag 14 og derefter for 50 myggestik med ugentlige intervaller fra dag 21 til dag 56 (en udfordring med 5 myggestik og seks udfordringer med 50 myggestik/udfordring over 6 uger, hvilket giver i alt 305 myggestik).

Antallet af bid og modaliteter af den opfølgning, der blev brugt i denne undersøgelse, blev valgt på baggrund af tidligere entomologisk undersøgelse udført på dette område, offentliggjorte rapporter om menneskelig udfordring med myggestik og aktuel viden om karakteristikken af ​​det humorale respons mod spytantigener. Både øjeblikkelige og forsinkede hudreaktioner vil blive registreret efter dag 14 og dag 21 udfordringer, hvilket kræver yderligere besøg på dag 15 og dag 22. Deltagere med overfølsomhed over for myggestik vil blive trukket tilbage fra undersøgelsen. Både kapillære og venøse blodprøver vil blive indsamlet ugentligt fra hver undersøgelsesdeltager. 18 venøse blodprøver vil blive indsamlet, inklusive en prøve på 2 mL udtaget under screeningsbesøg, 14 prøver på 8,6 mL under besøg 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18 og 19 og 3 prøver på 18,6 mL under besøg 4, 13 og 20 (178,2 mL venøst ​​blod pr. deltager i alt). Sytten tørre blodplet (DBS) prøver vil blive lavet af 300 μL kapillærblod opsamlet under besøg 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19 og 20 (5,1 ml kapillærblod pr. deltager i alt).

Kandidatpeptider vil blive identificeret i silico ved hjælp af offentligt tilgængelige genomsekvenser og B-celle epitop forudsigelsesalgoritmer. Kinetikken af ​​antistoftitre mod kandidat-biomarkører vil blive vurderet ved hjælp af enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) og mesoscale screening udført med serum- og DBS-prøver. Kort fortalt vil positivitetstærsklen for assayet blive bestemt ved hjælp af referencesera-prøver fra individer, der ikke er udsat for myggestik, som beskrevet tidligere. ELISA-signalet målt i 60 referencesera opnået fra ueksponerede individer (30 thailandske sera opnået fra Thai Røde Kors og 30 australske sera opnået fra Burnet Institute) vil blive brugt til at definere positivitetstærsklen for assayet. Positivitetstærsklen for assayet vil blive defineret som tre standardafvigelse (SD) over den gennemsnitlige optiske densitet (ΔOD) målt for den ueksponerede kontrolpopulation. En test i undersøgelsespopulationen med en ΔOD over denne grænse vil blive betragtet som positiv (dvs. et immunrespons). Den specifikke antistoftiter for undersøgelsesprøver vil blive bestemt ved at udføre serielle fortyndingsforsøg. Seriel fortynding vil blive lavet fra undersøgelsesprøver, og ΔOD vil blive bestemt for hver fortynding. Antistoftiteren vil blive defineret som den højeste fortynding, der giver et positivt signal. Resultater opnået med DBS- og serumprøver vil blive sammenlignet for at vurdere gennemførligheden af ​​at bruge DBS-prøver til at overvåge eksponering for myggestik under epidemiologiske undersøgelser. Serumprøver indsamlet under besøg 4 (baseline), 13 (tidligt efter afslutning af eksponering) og 20 (efter eksponering) vil også blive analyseret med immuno-proteomisk tilgang (2D gelelektroforese af spytkirtelproteinekstrakter, Western blot og massespektrometri ) giver yderligere information om de antigene egenskaber af myggespytkirtelproteom.

Planlagt prøvestørrelse: 150 deltagere fulgt op i 16 uger

Deltager identifikation:

Studiedeltagere defineres som raske deltagere i alderen mellem 18 og 60 år og villige til at deltage i undersøgelsen. Denne undersøgelse vil finde sted på Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) forskningscenter i Mae Sot.