Charakterizace humorné imunitní reakce na bodnutí komáry (SG6)

Tato studie je modelem lidské provokace s pěti rameny odpovídajícími kontrolované expozici kousnutí neinfikovaných laboratorně adaptovaných kolonií Anopheles minimus, An. maculatus, An. dirus, Aedes. aegypti nebo Ae. albopictus. Po screeningu a posouzení způsobilosti bude do studie zapsáno 150 účastníků pomocí blokově randomizovaného návrhu stratifikovaného podle druhu komára a počtu kousnutí (celkem 35 nebo 305 kousnutí), aby se vytvořilo 10 skupin po 15 jedincích pro každou z nich. studijní podmínka. Účastníci budou ve studii po dobu 112 dní. Základní linie se bude skládat ze 2 návštěv během 2 týdnů (den 0 a den 7).

Ve skupinách s nízkou expozicí budou účastníci vystaveni 5 kousnutím komárem v týdenních intervalech od 14. do 56. dne (sedm výzev s 5 kousnutím komárem/výzva během šesti týdnů, což dává celkem 35 kousnutí komárem). Ve skupině s vysokou expozicí budou účastníci vystaveni 5 kousnutím komárem 14. den a poté 50 kousnutím komárem v týdenních intervalech od 21. do 56. dne (jedna výzva s 5 kousnutími komáry a šest zkoušek s 50 kousnutími komáry/výzva přes 6 týdnů, což dává celkem 305 kousnutí komárem).

Počet kousnutí a modality sledování použité v této studii byly zvoleny na základě předchozího entomologického výzkumu provedeného v této oblasti, publikovaných zpráv o lidském napadení kousnutím komárem a současných znalostí o charakteristice humorální odpovědi proti antigenům slin. Po 14. a 21. dni budou zaznamenány okamžité i opožděné kožní reakce, které vyžadují další návštěvy 15. a 22. den. Účastníci s přecitlivělostí na bodnutí komáry budou ze studie vyřazeni. Od každého účastníka studie budou každý týden odebírány vzorky kapilární i venózní krve. Bude odebráno 18 vzorků žilní krve, včetně jednoho vzorku o objemu 2 ml odebraného během screeningové návštěvy, 14 vzorků o objemu 8,6 ml během návštěvy 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18 a 19 a 3 vzorky po 18,6 ml během návštěv 4, 13 a 20 (celkem 178,2 ml žilní krve na účastníka). Sedmnáct vzorků suchých krevních skvrn (DBS) bude vyrobeno z 300 μl kapilární krve odebrané během návštěv 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19 a 20 (celkem 5,1 ml kapilární krve na účastníka).

Kandidátní peptidy budou identifikovány in silico pomocí veřejně dostupných genomových sekvencí a algoritmů predikce epitopů B-buněk. Kinetika titrů protilátek proti kandidátním biomarkerům bude hodnocena enzymatickým imunosorbentním testem (ELISA) a screeningem v mezoměřítku provedeným se sérem a vzorky DBS. Stručně řečeno, práh pozitivity testu bude stanoven pomocí referenčních vzorků sér od jedinců, kteří nebyli vystaveni kousnutí komáry, jak bylo popsáno výše. Signál ELISA naměřený v 60 referenčních sérech získaných od neexponovaných jedinců (30 thajských sér získaných od Thajského Červeného kříže a 30 australských sér získaných od Burnet Institute) bude použit k definování prahu pozitivity testu. Prah pozitivity testu bude definován jako tři standardní odchylky (SD) nad průměrnou optickou hustotou (ΔOD) naměřenou pro neexponovanou kontrolní populaci. Test ve studované populaci s ΔOD nad touto hranicí bude považován za pozitivní (tj. imunitní odpověď). Specifický titr protilátek studijních vzorků bude stanoven provedením experimentů se sériovým ředěním. Sériové ředění bude provedeno ze studijních vzorků a ΔOD bude stanovena pro každé ředění. Titr protilátky bude definován jako nejvyšší ředění poskytující pozitivní signál. Výsledky získané s DBS a vzorky séra budou porovnány za účelem posouzení proveditelnosti použití vzorků DBS k monitorování expozice kousnutí komáry během epidemiologických studií. Vzorky séra odebrané během návštěv 4 (základní), 13 (brzy po ukončení expozice) a 20 (po expozici) budou také analyzovány imunoproteomickým přístupem (2D gelová elektroforéza proteinových extraktů slinných žláz, Western blot a hmotnostní spektrometrie ) poskytující další informace o antigenních vlastnostech proteomu slinných žláz komára.

Plánovaná velikost vzorku: 150 účastníků sledování po dobu 16 týdnů

Identifikace účastníka:

Účastníci studie jsou definováni jako zdraví účastníci ve věku 18 až 60 let, kteří jsou ochotni se studie zúčastnit. Tato studie bude probíhat ve výzkumném středisku Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) v Mae Sot.