Karakteriserende humoral immunrespons på myggstikk (SG6)

Denne studien er en menneskelig utfordringsmodell med fem armer som tilsvarer kontrollert eksponering for bitt av uinfiserte laboratorietilpassede kolonier av Anopheles minimus, An. maculatus, An. dirus, Aedes. aegypti eller Ae. albopictus. Etter screening og kvalifiseringsvurdering vil 150 deltakere bli registrert i studien ved å bruke en blokk-randomisert design stratifisert på myggarten og antall bitt (35 eller 305 bitt totalt) slik at de utgjør 10 grupper på 15 individer for hver av studietilstand. Deltakerne skal være med i studien i 112 dager. Grunnlinjen vil bestå av 2 besøk over 2 uker (dag 0 og dag 7).

I laveksponeringsgruppene vil deltakerne bli utsatt for 5 myggstikk med ukentlige intervaller fra dag 14 til dag 56 (syv utfordringer med 5 myggstikk/utfordring over seks uker, som gir totalt 35 myggstikk). I høyeksponeringsgruppen vil deltakerne bli utsatt for 5 myggstikk på dag 14 og deretter for 50 myggstikk med ukentlige intervaller fra dag 21 til dag 56 (en utfordring med 5 myggstikk og seks utfordringer med 50 myggstikk/utfordring over 6 uker, noe som gir totalt 305 myggstikk).

Antall bitt og modaliteter for oppfølgingen som ble brukt i denne studien ble valgt basert på tidligere entomologisk undersøkelse utført på dette området, publiserte rapporter om menneskelig utfordring med myggstikk og nåværende kunnskap om karakteristikken av den humorale responsen mot spyttantigener. Både umiddelbare og forsinkede hudreaksjoner vil bli registrert etter dag 14 og dag 21 utfordringer, noe som krever ytterligere besøk på dag 15 og dag 22. Deltakere med overfølsomhet for myggstikk vil bli trukket fra studien. Både kapillære og venøse blodprøver vil bli samlet inn ukentlig fra hver studiedeltaker. Atten venøse blodprøver vil bli samlet inn, inkludert en prøve på 2 mL tatt under screeningbesøk, 14 prøver på 8,6 mL under besøk 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18 og 19, og 3 prøver på 18,6 mL under besøk 4, 13 og 20 (178,2 mL veneblod per deltaker totalt). Sytten tørre blodflekker (DBS) prøver vil bli laget av 300 μL kapillærblod samlet under besøk 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19 og 20 (5,1 ml kapillærblod per deltaker totalt).

Kandidatpeptider vil bli identifisert i silico ved å bruke offentlig tilgjengelige genomsekvenser og B-celleepitopprediksjonsalgoritmer. Kinetikken til antistofftitere mot kandidatbiomarkører vil bli vurdert ved hjelp av enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) og screening i mesoskala utført med serum- og DBS-prøver. Kort fortalt vil positivitetsterskelen for analysen bestemmes ved å bruke referanseseraprøver fra individer som ikke er eksponert for myggstikk, som beskrevet tidligere. ELISA-signalet målt i 60 referansesera hentet fra ueksponerte individer (30 thailandske sera hentet fra Thai Røde Kors og 30 australske sera hentet fra Burnet Institute) vil bli brukt til å definere positivitetsterskelen for analysen. Positivitetsterskelen for analysen vil bli definert som tre standardavvik (SD) over gjennomsnittlig optisk tetthet (ΔOD) målt for den ueksponerte kontrollpopulasjonen. En test i studiepopulasjonen med en ΔOD over denne grensen vil bli ansett som positiv (dvs. en immunrespons). Den spesifikke antistofftiteren til studieprøver vil bli bestemt ved å utføre serielle fortynningseksperimenter. Seriefortynning vil bli laget fra studieprøver og ΔOD vil bli bestemt for hver fortynning. Antistofftiteren vil bli definert som den høyeste fortynningen som gir et positivt signal. Resultater oppnådd med DBS- og serumprøver vil bli sammenlignet for å vurdere muligheten for å bruke DBS-prøver for å overvåke eksponering for myggstikk under epidemiologiske studier. Serumprøver tatt under besøk 4 (grunnlinje), 13 (tidlig etter endt eksponering) og 20 (etter eksponering) vil også bli analysert med immunproteomisk tilnærming (2D gelelektroforese av spyttkjertelproteinekstrakter, Western blot og massespektrometri ) som gir tilleggsinformasjon om de antigene egenskapene til mygg spyttkjertelproteom.

Planlagt prøvestørrelse: 150 deltakere fulgt opp i 16 uker

Deltakeridentifikasjon:

Studiedeltakere er definert som friske deltakere i alderen mellom 18 og 60 år og villige til å delta i studien. Denne studien vil finne sted ved Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) forskningssenter i Mae Sot.