A szúnyogcsípésekre adott humorális immunválasz jellemzése (SG6)

Ez a vizsgálat egy humán kihívásmodell öt karral, amely megfelel az Anopheles minimus, An, nem fertőzött, laboratóriumhoz adaptált kolóniák harapásának kontrollált expozíciójának. maculatus, An. dirus, Aedes. aegypti vagy Ae. albopictus. A szűrést és a jogosultság értékelését követően 150 résztvevőt vonnak be a vizsgálatba blokk-randomizált elrendezéssel, amely a szúnyogfajokra és a csípések számára (összesen 35 vagy 305 csípés) rétegezve 10, 15 egyedből álló csoportot alkot. tanulmányi állapot. A résztvevők 112 napig vesznek részt a vizsgálatban. Az alapvonal 2 látogatásból áll 2 héten keresztül (0. nap és 7. nap).

Az alacsony expozíciós csoportokban a résztvevőket 5 szúnyogcsípésnek teszik ki heti időközönként a 14. naptól az 56. napig (hét kihívás 5 szúnyogcsípés/kihívás hat héten keresztül, összesen 35 szúnyogcsípés). A nagy expozíciós csoportban a résztvevők 5 szúnyogcsípésnek vannak kitéve a 14. napon, majd 50 szúnyogcsípésnek lesznek kitéve heti időközönként a 21. naptól az 56. napig (egy kihívás 5 szúnyogcsípés és hat kihívás 50 szúnyogcsípés/kihívás során 6 hét, összesen 305 szúnyogcsípés).

Az ebben a tanulmányban használt harapások számát és a nyomon követés módjait az ezen a területen végzett korábbi entomológiai vizsgálatok, a szúnyogcsípésekkel való emberi fertőzésről szóló publikált jelentések és a nyálantigénekkel szembeni humorális válasz jellemzőire vonatkozó jelenlegi ismeretek alapján választották ki. Mind az azonnali, mind a késleltetett bőrreakciókat rögzítjük a 14. és a 21. napi kihívások után, amelyek további látogatást tesznek szükségessé a 15. és a 22. napon. A szúnyogcsípésre túlérzékeny résztvevőket kivonják a vizsgálatból. Mind a kapilláris, mind a vénás vérmintát hetente gyűjtik minden vizsgálati résztvevőtől. Tizennyolc vénás vérmintát vesznek, ebből egy 2 ml-es mintát vesznek a szűrővizsgálat során, 14 8,6 ml-es mintát a 2., 3., 6., 8., 9., 10., 11., 12., 14., 15., 16., 17., 18. és 19, valamint 3 18,6 ml-es minta a 4., 13. és 20. vizit során (összesen 178,2 ml vénás vér résztvevőnként). Tizenhét száraz vérfolt (DBS) minta készül a 2., 3., 4., 6., 8., 9., 10., 11., 12., 13., 14., 15., 16., 17., 18. vizit során gyűjtött 300 μl kapillárisvérből. , 19 és 20 (összesen 5,1 ml kapilláris vér résztvevőnként).

A jelölt peptideket in silico azonosítják nyilvánosan elérhető genomszekvenciák és B-sejt-epitóp-előrejelző algoritmusok segítségével. A jelölt biomarkerekkel szembeni antitesttiterek kinetikáját enzim-kapcsolt immunszorbens vizsgálattal (ELISA) és szérum- és DBS-mintákkal végzett mezoskálás szűréssel értékelik. Röviden, a teszt pozitivitási küszöbét a szúnyogcsípésnek nem kitett egyének referencia szérummintái segítségével határozzuk meg, a korábban leírtak szerint. A vizsgálat pozitivitási küszöbének meghatározásához a 60 nem exponált egyénektől származó referenciaszérumban mért ELISA-jelet (30 thaiföldi szérum a thaiföldi Vöröskereszttől és 30 ausztrál szérum a Burnet Institute-tól) fogják használni. Az assay pozitivitási küszöbe a nem exponált kontrollpopulációnál mért átlagos optikai denzitás (ΔOD) feletti három standard deviáció (SD). A vizsgálati populációban végzett teszt, amelynek ΔOD értéke meghaladja ezt a határértéket, pozitívnak minősül (azaz immunválasz). A vizsgálati minták specifikus antitest-titerét sorozathígítási kísérletek elvégzésével határozzuk meg. Sorozathígítást készítenek a vizsgálati mintákból, és minden egyes hígításhoz meg kell határozni a ΔOD-t. Az antitest titert a pozitív jelet adó legmagasabb hígításként határozzuk meg. A DBS-sel és szérummintákkal kapott eredményeket összehasonlítják annak érdekében, hogy felmérjék a DBS-minták felhasználásának megvalósíthatóságát a szúnyogcsípésekkel való expozíció nyomon követésére az epidemiológiai vizsgálatok során. A 4. (alapvonal), a 13. (korai az expozíció vége után) és a 20. (az expozíció utáni) látogatás során gyűjtött szérummintákat immunproteomikus megközelítéssel (nyálmirigy fehérjekivonatok 2D gélelektroforézise, ​​Western blot és tömegspektrometria) is elemzik. ), amely további információkat szolgáltat a szúnyog nyálmirigy proteomjának antigén tulajdonságairól.

Tervezett mintanagyság: 150 résztvevő követése 16 héten keresztül

Résztvevő azonosító:

A vizsgálatban résztvevők 18 és 60 év közötti egészséges résztvevők, akik hajlandóak részt venni a vizsgálatban. Ez a tanulmány a Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) kutatóközpontjában zajlik majd Mae Sotban.