Caratterizzazione della risposta immunitaria umorale alle punture di zanzara (SG6)
Caratterizzazione della risposta immunitaria umorale contro gli antigeni salivari dei vettori di zanzara del sud-est asiatico di malaria e dengue con un modello di sfida umana
Le caratteristiche della risposta umorale diretta contro gli antigeni della saliva delle zanzare non sono note con precisione. Questa è una delle principali limitazioni per l'utilizzo di marcatori immunologici come risultato negli studi epidemiologici e come indicatore per l'implementazione operativa degli interventi. I recenti progressi nell'assemblaggio del genoma di alcune specie di vettori di zanzare Anopheles e Aedes hanno facilitato l'identificazione di nuovi peptidi candidati in silico, utilizzando le sequenze di proteine ortologhe delle ghiandole salivari e algoritmi di previsione delle cellule B. L'obiettivo di questo studio è valutare la risposta immunitaria umorale diretta contro i peptidi candidati in seguito all'esposizione controllata a colonie di An adattate in laboratorio. minimo, An. maculatus e An. dirus, Ae. aegypti e Ae. albopictus.
Questa ricerca fornirà informazioni essenziali per identificare e convalidare i marcatori immunologici dell'esposizione umana alla malaria e ai vettori della zanzara della dengue nel sud-est asiatico. I marcatori immunologici sarebbero utili per comprendere le dinamiche di trasmissione e prevedere il rischio di trasmissione come parte di un sistema di sorveglianza e per valutare l'efficacia degli interventi di controllo dei vettori nelle prove entomologiche o durante il dispiegamento operativo degli interventi nella regione.
Panoramica dello studio
Descrizione dettagliata
Questo studio è un modello di sfida umana con cinque bracci corrispondenti all'esposizione controllata ai morsi di colonie non infette adattate al laboratorio di Anopheles minimus, An. maculato, An. diro, Aedes. aegypti o Ae. albopictus. A seguito di screening e valutazione di ammissibilità, 150 partecipanti verranno arruolati nello studio utilizzando un disegno randomizzato a blocchi stratificato sulla specie di zanzara e sul numero di punture (35 o 305 punture in totale) tale da costituire 10 gruppi di 15 individui per ciascuno dei condizione di studio. I partecipanti saranno nello studio per 112 giorni. La linea di base consisterà in 2 visite nell'arco di 2 settimane (giorno 0 e giorno 7).
Nei gruppi a bassa esposizione, i partecipanti saranno esposti a 5 punture di zanzara a intervalli settimanali dal giorno 14 al giorno 56 (sette sfide con 5 punture di zanzara/sfida nell'arco di sei settimane, per un totale di 35 punture di zanzara). Nel gruppo ad alta esposizione, i partecipanti saranno esposti a 5 punture di zanzara il giorno 14 e poi a 50 punture di zanzara a intervalli settimanali dal giorno 21 al giorno 56 (una sfida con 5 punture di zanzara e sei sfide con 50 punture di zanzara/sfida oltre 6 settimane, per un totale di 305 punture di zanzara).
Il numero di punture e le modalità del follow-up utilizzate in questo studio sono state scelte sulla base di precedenti indagini entomologiche condotte in quest'area, rapporti pubblicati di sfida umana con punture di zanzara e conoscenze attuali sulla caratteristica della risposta umorale contro gli antigeni della saliva. Sia le reazioni cutanee immediate che quelle ritardate verranno registrate dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e al giorno 22. I partecipanti con ipersensibilità alle punture di zanzara saranno ritirati dallo studio. Entrambi i campioni di sangue capillare e venoso verranno raccolti settimanalmente da ciascun partecipante allo studio. Saranno raccolti diciotto campioni di sangue venoso di cui un campione di 2 ml prelevato durante la visita di screening, 14 campioni di 8,6 ml durante le visite 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18 e 19 e 3 campioni da 18,6 ml durante le visite 4, 13 e 20 (178,2 ml di sangue venoso per partecipante in totale). Verranno prelevati diciassette campioni di dry blood spot (DBS) da 300 μL di sangue capillare raccolto durante le visite 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19 e 20 (5,1 ml di sangue capillare per partecipante in totale).
I peptidi candidati saranno identificati in silico utilizzando sequenze di genomi pubblicamente disponibili e algoritmi di predizione dell'epitopo delle cellule B. La cinetica dei titoli anticorpali contro i biomarcatori candidati sarà valutata mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) e screening su mesoscala eseguito con campioni di siero e DBS. In breve, la soglia di positività del saggio sarà determinata utilizzando campioni di sieri di riferimento di individui non esposti a punture di zanzara, come descritto in precedenza. Il segnale ELISA misurato in 60 sieri di riferimento ottenuti da soggetti non esposti (30 sieri tailandesi ottenuti dalla Croce Rossa Thailandese e 30 sieri australiani ottenuti dal Burnet Institute) sarà utilizzato per definire la soglia di positività del test. La soglia di positività del test sarà definita come tre deviazioni standard (DS) al di sopra della densità ottica media (ΔOD) misurata per la popolazione di controllo non esposta. Un test nella popolazione in studio con un ΔOD superiore a questo limite sarà considerato positivo (ovvero una risposta immunitaria). Il titolo anticorpale specifico dei campioni di studio sarà determinato eseguendo esperimenti di diluizione seriale. La diluizione seriale sarà effettuata dai campioni di studio e il ΔOD sarà determinato per ciascuna diluizione. Il titolo anticorpale sarà definito come la più alta diluizione che dà un segnale positivo. I risultati ottenuti con DBS e campioni di siero saranno confrontati al fine di valutare la fattibilità dell'utilizzo di campioni di DBS per monitorare l'esposizione a punture di zanzare durante studi epidemiologici. I campioni di siero raccolti durante le visite 4 (baseline), 13 (presto dopo la fine dell'esposizione) e 20 (post-esposizione) saranno analizzati anche con approccio immuno-proteomico (elettroforesi su gel 2D di estratti proteici delle ghiandole salivari, Western blot e spettrometria di massa ) fornendo ulteriori informazioni sulle proprietà antigeniche del proteoma della ghiandola salivare della zanzara.
Dimensione pianificata del campione: 150 partecipanti seguiti per 16 settimane
Identificazione del partecipante:
I partecipanti allo studio sono definiti come partecipanti sani di età compresa tra 18 e 60 anni e disposti a partecipare allo studio. Questo studio si svolgerà presso il centro di ricerca Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) a Mae Sot.
Tipo di studio
Iscrizione (Stimato)
Fase
- Non applicabile
Contatti e Sedi
Contatto studio
- Nome: Victor Chaumeau
- Numero di telefono: +6655532026
- Email: victor@shoklo-unit.com
Backup dei contatti dello studio
- Nome: François Nosten
- Numero di telefono: +6655532026
- Email: Francois@tropmedres.ac
Luoghi di studio
-
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Tak
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Mae Sot, Tak, Tailandia, 63110
- Reclutamento
- Shoklo Malaria Research Unit (SMRU)
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Contatto:
- Victor Chaumeau, Pharm.D., Ph.D.
- Numero di telefono: +66 (0)55 532 026
- Email: victor@shoklo-unit.com
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Contatto:
- François Nosten, M.D., Ph.D.
- Numero di telefono: +66 (0)55 532 026
- Email: francois@tropmedres.ac
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Partecipante maschio o femmina sano giudicato da un medico responsabile senza alcuna anomalia identificata su una valutazione medica;
- Etnia tailandese, birmana o Karen;
- Età compresa tra ≥ 18 e <60 anni;
- Vivere nella città di Mae Sot negli ultimi 12 mesi;
- Disponibilità a partecipare all'attività e in grado di fornire il consenso informato per la partecipazione allo studio;
- In grado di tollerare l'esposizione diretta alle zanzare.
Criteri di esclusione:
- Storia di viaggi in un paese endemico della malaria (villaggio rurale) negli ultimi 12 mesi o intenzione di farlo durante lo studio;
- Farmaco o condizione ritenuta interferire con la misura dell'esito da parte di un medico responsabile;
- Anemia moderata e grave (concentrazione di emoglobina inferiore a 110 g/L di sangue);
- Ipersensibilità o anafilassi alle punture di zanzara;
- Donne incinte
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Scopo principale: Scienza basilare
- Assegnazione: Randomizzato
- Modello interventistico: Assegnazione parallela
- Mascheramento: Nessuno (etichetta aperta)
Armi e interventi
Gruppo di partecipanti / Arm |
Intervento / Trattamento |
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Sperimentale: Un. minimo
Questo braccio sarà diviso in 2 gruppi; i gruppi a bassa esposizione e il gruppo ad alta esposizione. Nel gruppo a bassa esposizione, i partecipanti saranno esposti a 5 punture di zanzara a intervalli settimanali dal giorno 14 al giorno 56 (sette sfide con 5 punture di zanzara/sfida nell'arco di sei settimane, per un totale di 35 punture di zanzara). Nel gruppo ad alta esposizione, i partecipanti saranno esposti a 5 punture di zanzara il giorno 14 e poi a 50 punture di zanzara a intervalli settimanali dal giorno 21 al giorno 56 (una sfida con 5 punture di zanzara e sei sfide con 50 punture di zanzara/sfida oltre 6 settimane, per un totale di 305 punture di zanzara). |
I partecipanti saranno esposti a punture di zanzara. Per la sfida a basso dosaggio, cinque imago femminili nullipare di 5-7 giorni (cioè che non hanno mai nutrito sangue prima) verranno introdotte individualmente in un tubo di plastica da 50 ml coperto con materiale di rete. Per la sfida ad alte dosi, 47 zanzare saranno divise in quattro bicchieri di plastica di 10 cm di diametro ricoperti di materiale a rete (tre bicchieri con 12 zanzare e un bicchiere con 11 zanzare) e 3 zanzare saranno introdotte singolarmente in tubi di plastica da 50 ml . Le punture di zanzara somministrate sul braccio del partecipante verranno utilizzate per valutare le reazioni cutanee immediate e ritardate. Le reazioni cutanee immediate e ritardate verranno registrate rispettivamente 20-30 minuti e 24-36 ore dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e 22. |
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Sperimentale: Un. maculato
Come sopra
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I partecipanti saranno esposti a punture di zanzara. Per la sfida a basso dosaggio, cinque imago femminili nullipare di 5-7 giorni (cioè che non hanno mai nutrito sangue prima) verranno introdotte individualmente in un tubo di plastica da 50 ml coperto con materiale di rete. Per la sfida ad alte dosi, 47 zanzare saranno divise in quattro bicchieri di plastica di 10 cm di diametro ricoperti di materiale a rete (tre bicchieri con 12 zanzare e un bicchiere con 11 zanzare) e 3 zanzare saranno introdotte singolarmente in tubi di plastica da 50 ml . Le punture di zanzara somministrate sul braccio del partecipante verranno utilizzate per valutare le reazioni cutanee immediate e ritardate. Le reazioni cutanee immediate e ritardate verranno registrate rispettivamente 20-30 minuti e 24-36 ore dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e 22. |
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Sperimentale: Un. diro
Come sopra
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I partecipanti saranno esposti a punture di zanzara. Per la sfida a basso dosaggio, cinque imago femminili nullipare di 5-7 giorni (cioè che non hanno mai nutrito sangue prima) verranno introdotte individualmente in un tubo di plastica da 50 ml coperto con materiale di rete. Per la sfida ad alte dosi, 47 zanzare saranno divise in quattro bicchieri di plastica di 10 cm di diametro ricoperti di materiale a rete (tre bicchieri con 12 zanzare e un bicchiere con 11 zanzare) e 3 zanzare saranno introdotte singolarmente in tubi di plastica da 50 ml . Le punture di zanzara somministrate sul braccio del partecipante verranno utilizzate per valutare le reazioni cutanee immediate e ritardate. Le reazioni cutanee immediate e ritardate verranno registrate rispettivamente 20-30 minuti e 24-36 ore dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e 22. |
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Sperimentale: Ae. aegypti
Come sopra
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I partecipanti saranno esposti a punture di zanzara. Per la sfida a basso dosaggio, cinque imago femminili nullipare di 5-7 giorni (cioè che non hanno mai nutrito sangue prima) verranno introdotte individualmente in un tubo di plastica da 50 ml coperto con materiale di rete. Per la sfida ad alte dosi, 47 zanzare saranno divise in quattro bicchieri di plastica di 10 cm di diametro ricoperti di materiale a rete (tre bicchieri con 12 zanzare e un bicchiere con 11 zanzare) e 3 zanzare saranno introdotte singolarmente in tubi di plastica da 50 ml . Le punture di zanzara somministrate sul braccio del partecipante verranno utilizzate per valutare le reazioni cutanee immediate e ritardate. Le reazioni cutanee immediate e ritardate verranno registrate rispettivamente 20-30 minuti e 24-36 ore dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e 22. |
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Sperimentale: Ae. albopictus
Come sopra
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I partecipanti saranno esposti a punture di zanzara. Per la sfida a basso dosaggio, cinque imago femminili nullipare di 5-7 giorni (cioè che non hanno mai nutrito sangue prima) verranno introdotte individualmente in un tubo di plastica da 50 ml coperto con materiale di rete. Per la sfida ad alte dosi, 47 zanzare saranno divise in quattro bicchieri di plastica di 10 cm di diametro ricoperti di materiale a rete (tre bicchieri con 12 zanzare e un bicchiere con 11 zanzare) e 3 zanzare saranno introdotte singolarmente in tubi di plastica da 50 ml . Le punture di zanzara somministrate sul braccio del partecipante verranno utilizzate per valutare le reazioni cutanee immediate e ritardate. Le reazioni cutanee immediate e ritardate verranno registrate rispettivamente 20-30 minuti e 24-36 ore dopo le sfide del giorno 14 e del giorno 21, richiedendo visite aggiuntive al giorno 15 e 22. |
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Lasso di tempo |
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Livelli di titoli anticorpali specifici contro i peptidi candidati prima e durante l'esposizione ripetuta a punture di zanzara allevate in laboratorio determinati mediante ELISA e screening su mesoscala.
Lasso di tempo: basale fino al giorno 112
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basale fino al giorno 112
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Cinetica di titoli anticorpali specifici contro i peptidi candidati prima e durante l'esposizione ripetuta a punture di zanzara allevate in laboratorio determinate mediante ELISA e screening su mesoscala.
Lasso di tempo: basale fino al giorno 112
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basale fino al giorno 112
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Sequenza degli antigeni della saliva determinata con metodo immuno-proteomico (elettroforesi su gel 2D di estratti proteici delle ghiandole salivari, Western blot e spettrometria di massa).
Lasso di tempo: Dal giorno 14 al giorno 112
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Dal giorno 14 al giorno 112
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Lasso di tempo |
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Confronto dei titoli anticorpali determinati in sottogruppi corrispondenti a diversi livelli di esposizione.
Lasso di tempo: Giorno 0, 7 (basale), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (periodo di esposizione), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (periodo post-esposizione).
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Giorno 0, 7 (basale), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (periodo di esposizione), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (periodo post-esposizione).
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Confronto dei titoli anticorpali determinati in DBS e campioni di sangue venoso.
Lasso di tempo: Giorno 0, 7 (basale), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (periodo di esposizione), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (periodo post-esposizione).
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Giorno 0, 7 (basale), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (periodo di esposizione), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (periodo post-esposizione).
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Collaboratori
Investigatori
- Investigatore principale: François Nosten, Shoklo Malaria Research Unit
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Effettivo)
Completamento primario (Stimato)
Completamento dello studio (Stimato)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- MAL19009
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Prove cliniche su Punture di zanzara
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