Caracterização da Resposta Imune Humoral a Picadas de Mosquito (SG6)
Caracterizando a Resposta Imune Humoral Contra Antígenos Salivares de Mosquitos Vetores da Malária e Dengue do Sudeste Asiático com um Modelo de Desafio Humano
As características da resposta humoral dirigida contra os antígenos da saliva do mosquito não são conhecidas com precisão. Esta é uma grande limitação para o uso de marcadores imunológicos como resultado em ensaios epidemiológicos e como um indicador para o desdobramento operacional de intervenções. Avanços recentes na montagem do genoma de algumas espécies de vetores de mosquitos Anopheles e Aedes facilitaram a identificação de novos peptídeos candidatos in silico, usando as sequências de proteínas ortólogas das glândulas salivares e algoritmos de previsão de células B. O objetivo deste estudo é avaliar a resposta imune humoral dirigida contra peptídeos candidatos após exposição controlada a colônias de An. mínimo, An. maculatus e An. dirus, Ae. aegypti e Ae. albopictus.
Esta pesquisa fornecerá informações essenciais para identificar e validar marcadores imunológicos da exposição humana à malária e aos vetores do mosquito da dengue no Sudeste Asiático. Marcadores imunológicos seriam úteis para entender a dinâmica da transmissão e prever o risco de transmissão como parte de um sistema de vigilância e para avaliar a eficácia das intervenções de controle de vetores em ensaios entomológicos ou durante o desdobramento operacional de intervenções na região.
Visão geral do estudo
Descrição detalhada
Este estudo é um modelo de desafio humano com cinco braços correspondentes à exposição controlada a picadas de colônias não infectadas adaptadas em laboratório de Anopheles minimus, An. maculatus, An. dirus, Aedes. aegypti ou Ae. albopictus. Após triagem e avaliação de elegibilidade, 150 participantes serão inscritos no estudo usando um desenho randomizado em blocos estratificado na espécie de mosquito e número de picadas (35 ou 305 picadas no total), de modo a constituir 10 grupos de 15 indivíduos para cada um dos condição de estudo. Os participantes estarão no estudo por 112 dias. A linha de base consistirá em 2 visitas durante 2 semanas (dia 0 e dia 7).
Nos grupos de baixa exposição, os participantes serão expostos a 5 picadas de mosquito em intervalos semanais do dia 14 ao dia 56 (sete desafios com 5 picadas de mosquito/desafio durante seis semanas, resultando em um total de 35 picadas de mosquito). No grupo de alta exposição, os participantes serão expostos a 5 picadas de mosquito no dia 14 e depois a 50 picadas de mosquito em intervalos semanais do dia 21 ao dia 56 (um desafio com 5 picadas de mosquito e seis desafios com 50 picadas de mosquito/desafio ao longo 6 semanas, resultando em um total de 305 picadas de mosquito).
O número de picadas e as modalidades de acompanhamento utilizadas neste estudo foram escolhidos com base em investigações entomológicas anteriores realizadas nesta área, relatos publicados de desafio humano com picadas de mosquito e conhecimento atual sobre a característica da resposta humoral contra antígenos salivares. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas após os desafios do dia 14 e do dia 21, exigindo visitas adicionais no dia 15 e no dia 22. Os participantes com hipersensibilidade a picadas de mosquito serão retirados do estudo. Amostras de sangue capilar e venoso serão coletadas semanalmente de cada participante do estudo. Dezoito amostras de sangue venoso serão coletadas, incluindo uma amostra de 2 mL coletada durante a visita de triagem, 14 amostras de 8,6 mL durante as visitas 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18 e 19, e 3 amostras de 18,6 mL durante as visitas 4, 13 e 20 (178,2 mL de sangue venoso por participante no total). Dezessete amostras de sangue seco (DBS) serão feitas a partir de 300 μL de sangue capilar coletado durante as visitas 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19 e 20 (5,1 mL de sangue capilar por participante no total).
Os peptídeos candidatos serão identificados in silico usando sequências de genomas publicamente disponíveis e algoritmos de previsão de epítopos de células B. A cinética dos títulos de anticorpos contra biomarcadores candidatos será avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA) e triagem em mesoescala realizada com amostras de soro e DBS. Resumidamente, o limiar de positividade do ensaio será determinado usando soros de referência de indivíduos não expostos a picadas de mosquito, conforme descrito anteriormente. O sinal ELISA medido em 60 soros de referência obtidos de indivíduos não expostos (30 soros tailandeses obtidos da Cruz Vermelha tailandesa e 30 soros australianos obtidos do Burnet Institute) serão usados para definir o limiar de positividade do ensaio. O limiar de positividade do ensaio será definido como três desvios padrão (SD) acima da densidade óptica média (ΔOD) medida para a população de controle não exposta. Um teste na população de estudo com um ΔOD acima desse limite será considerado positivo (ou seja, uma resposta imune). O título de anticorpo específico das amostras do estudo será determinado pela realização de experimentos de diluição em série. A diluição seriada será feita a partir das amostras do estudo e o ΔOD será determinado para cada diluição. O título de anticorpo será definido como a maior diluição dando um sinal positivo. Os resultados obtidos com amostras de DBS e soro serão comparados a fim de avaliar a viabilidade do uso de amostras de DBS para monitorar a exposição a picadas de mosquitos durante estudos epidemiológicos. Amostras de soro coletadas durante as visitas 4 (basal), 13 (início após o término da exposição) e 20 (pós-exposição) também serão analisadas com abordagem imunoproteômica (eletroforese em gel 2D de extratos de proteínas da glândula salivar, Western blot e espectrometria de massa ) fornecendo informações adicionais sobre as propriedades antigênicas do proteoma da glândula salivar do mosquito.
Tamanho planejado da amostra: 150 participantes acompanhados por 16 semanas
Identificação do participante:
Os participantes do estudo são definidos como participantes saudáveis com idade entre 18 e 60 anos e dispostos a participar do estudo. Este estudo será realizado no centro de pesquisa Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) em Mae Sot.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Locais de estudo
-
-
Changwat Tak
-
Mae Sot, Changwat Tak, Tailândia, 63110
- Shoklo Malaria Research Unit (SMRU)
-
-
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critério de inclusão:
- Participante saudável, masculino ou feminino, julgado por médico responsável sem nenhuma anormalidade identificada em avaliação médica;
- etnia tailandesa, birmanesa ou Karen;
- Idade ≥ 18 a <60 anos;
- Residindo na cidade de Mae Sot nos últimos 12 meses;
- Disposto a participar da atividade e capaz de dar consentimento informado para participar do estudo;
- Capaz de tolerar a exposição direta ao mosquito.
Critério de exclusão:
- Histórico de viagens em uma área endêmica de malária (aldeia rural) nos últimos 12 meses, ou planeja fazê-lo durante o estudo;
- Medicação ou condição considerada como interferindo na medida do resultado por um médico responsável;
- Anemia moderada e grave (concentração de hemoglobina inferior a 110 g/L de sangue);
- Hipersensibilidade ou anafilaxia a picadas de mosquito;
- mulheres grávidas
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Ciência básica
- Alocação: Randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
|---|---|
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Experimental: Um. mínimo
Este braço será dividido em 2 grupos; os grupos de baixa exposição e o grupo de alta exposição. No grupo de baixa exposição, os participantes serão expostos a 5 picadas de mosquito em intervalos semanais do dia 14 ao dia 56 (sete desafios com 5 picadas de mosquito/desafio durante seis semanas, resultando em um total de 35 picadas de mosquito). No grupo de alta exposição, os participantes serão expostos a 5 picadas de mosquito no dia 14 e depois a 50 picadas de mosquito em intervalos semanais do dia 21 ao dia 56 (um desafio com 5 picadas de mosquito e seis desafios com 50 picadas de mosquito/desafio ao longo 6 semanas, resultando em um total de 305 picadas de mosquito). |
Os participantes serão expostos a picadas de mosquito. Para o desafio de baixa dose, cinco imagos fêmeas nulíparas de 5 a 7 dias de idade (ou seja, que nunca se alimentaram de sangue antes) serão introduzidas individualmente em tubo plástico de 50 mL coberto com material de rede. Para o desafio de alta dose, 47 mosquitos serão divididos em quatro copos plásticos de 10 cm de diâmetro cobertos com material de rede (três copos com 12 mosquitos e um copo com 11 mosquitos), e 3 mosquitos serão introduzidos individualmente em tubos plásticos de 50 mL . Picadas de mosquito administradas no braço do participante serão usadas para avaliar reações cutâneas imediatas e tardias. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas respectivamente 20-30 min e 24-36 horas após os desafios do dia 14 e dia 21, exigindo visitas adicionais nos dias 15 e 22. |
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Experimental: Um. maculatus
O mesmo que acima
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Os participantes serão expostos a picadas de mosquito. Para o desafio de baixa dose, cinco imagos fêmeas nulíparas de 5 a 7 dias de idade (ou seja, que nunca se alimentaram de sangue antes) serão introduzidas individualmente em tubo plástico de 50 mL coberto com material de rede. Para o desafio de alta dose, 47 mosquitos serão divididos em quatro copos plásticos de 10 cm de diâmetro cobertos com material de rede (três copos com 12 mosquitos e um copo com 11 mosquitos), e 3 mosquitos serão introduzidos individualmente em tubos plásticos de 50 mL . Picadas de mosquito administradas no braço do participante serão usadas para avaliar reações cutâneas imediatas e tardias. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas respectivamente 20-30 min e 24-36 horas após os desafios do dia 14 e dia 21, exigindo visitas adicionais nos dias 15 e 22. |
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Experimental: Um. dirus
O mesmo que acima
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Os participantes serão expostos a picadas de mosquito. Para o desafio de baixa dose, cinco imagos fêmeas nulíparas de 5 a 7 dias de idade (ou seja, que nunca se alimentaram de sangue antes) serão introduzidas individualmente em tubo plástico de 50 mL coberto com material de rede. Para o desafio de alta dose, 47 mosquitos serão divididos em quatro copos plásticos de 10 cm de diâmetro cobertos com material de rede (três copos com 12 mosquitos e um copo com 11 mosquitos), e 3 mosquitos serão introduzidos individualmente em tubos plásticos de 50 mL . Picadas de mosquito administradas no braço do participante serão usadas para avaliar reações cutâneas imediatas e tardias. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas respectivamente 20-30 min e 24-36 horas após os desafios do dia 14 e dia 21, exigindo visitas adicionais nos dias 15 e 22. |
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Experimental: Ae. aegypti
O mesmo que acima
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Os participantes serão expostos a picadas de mosquito. Para o desafio de baixa dose, cinco imagos fêmeas nulíparas de 5 a 7 dias de idade (ou seja, que nunca se alimentaram de sangue antes) serão introduzidas individualmente em tubo plástico de 50 mL coberto com material de rede. Para o desafio de alta dose, 47 mosquitos serão divididos em quatro copos plásticos de 10 cm de diâmetro cobertos com material de rede (três copos com 12 mosquitos e um copo com 11 mosquitos), e 3 mosquitos serão introduzidos individualmente em tubos plásticos de 50 mL . Picadas de mosquito administradas no braço do participante serão usadas para avaliar reações cutâneas imediatas e tardias. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas respectivamente 20-30 min e 24-36 horas após os desafios do dia 14 e dia 21, exigindo visitas adicionais nos dias 15 e 22. |
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Experimental: Ae. albopictus
O mesmo que acima
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Os participantes serão expostos a picadas de mosquito. Para o desafio de baixa dose, cinco imagos fêmeas nulíparas de 5 a 7 dias de idade (ou seja, que nunca se alimentaram de sangue antes) serão introduzidas individualmente em tubo plástico de 50 mL coberto com material de rede. Para o desafio de alta dose, 47 mosquitos serão divididos em quatro copos plásticos de 10 cm de diâmetro cobertos com material de rede (três copos com 12 mosquitos e um copo com 11 mosquitos), e 3 mosquitos serão introduzidos individualmente em tubos plásticos de 50 mL . Picadas de mosquito administradas no braço do participante serão usadas para avaliar reações cutâneas imediatas e tardias. As reações cutâneas imediatas e tardias serão registradas respectivamente 20-30 min e 24-36 horas após os desafios do dia 14 e dia 21, exigindo visitas adicionais nos dias 15 e 22. |
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Prazo |
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Níveis de títulos de anticorpos específicos contra peptídeos candidatos antes e durante a exposição repetida a picadas de mosquito criadas em laboratório determinados por ELISA e triagem em mesoescala.
Prazo: linha de base até o dia 112
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linha de base até o dia 112
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Cinética de títulos de anticorpos específicos contra peptídeos candidatos antes e durante a exposição repetida a picadas de mosquito criadas em laboratório determinadas por ELISA e triagem em mesoescala.
Prazo: linha de base até o dia 112
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linha de base até o dia 112
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Sequência de antígenos salivares determinada por método imunoproteômico (eletroforese em gel 2D de extratos de proteínas das glândulas salivares, Western blot e espectrometria de massa).
Prazo: Dia 14 até o dia 112
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Dia 14 até o dia 112
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Prazo |
|---|---|
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Comparação dos títulos de anticorpos determinados em subgrupos correspondentes a diferentes níveis de exposição.
Prazo: Dia 0, 7 (baseline), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (período de exposição), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (período pós-exposição).
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Dia 0, 7 (baseline), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (período de exposição), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (período pós-exposição).
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Comparação dos títulos de anticorpos determinados em DBS e amostras de sangue venoso.
Prazo: Dia 0, 7 (baseline), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (período de exposição), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (período pós-exposição).
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Dia 0, 7 (baseline), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 (período de exposição), 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 e 112 (período pós-exposição).
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Colaboradores e Investigadores
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Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: François Nosten, Shoklo Malaria Research Unit
Publicações e links úteis
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- MAL19009
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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