卵丘-卵母细胞复合体的单个与组 CAPA-IVM 培养
在 SIBLING 卵母细胞研究设计中,来自小窦卵泡的人卵丘-卵母细胞复合物的单组 CAPA-IVM 培养效果
研究概览
详细说明
卵母细胞体外成熟 (IVM) 是一种最小刺激的 ART,可减少激素相关的副作用和患者的风险。 然而,由于与传统 ART 相比存在效率差距,该方法并未得到广泛使用。
为 IVM 程序检索的卵母细胞来自异质池,具有可变的细胞和分子特征,表明其未成熟状态。 因此,在减数分裂触发之前允许并增强减数分裂能力(响应排卵刺激恢复减数分裂的能力)和发育能力(受精和支持早期胚胎发育的能力)的获得和同步的体外系统对于优化至关重要人类 IVM 系统。
一种新型的两步 IVM 培养系统(命名为 CAPA-IVM)涉及 C 型钠尿肽 (CNP) 的预成熟培养和双调蛋白 (AREG) 存在下的成熟步骤,这两种生理化合物都可以提高卵母细胞的能力,具有在之前的临床研究中被引入。 到目前为止,这些试点研究证明可以提高卵母细胞成熟率、第 3 天的优质胚胎、优质囊胚,从而提高胚胎产量。 与 COS 胚胎相比,CAPA-IVM 囊胚在 gDMR 处显示出相似的甲基化率和基因表达率;并且主要表观遗传调节因子的表达在两组之间相似。 此外,妊娠率的提高加强了使用 CAPA-IVM 策略的临床相关性。
为了进一步优化和适应 IVM 诊所的 CAPA-IVM 系统,本试点研究旨在检查应用单一 COC CAPA-IVM 策略与群体 COC 培养 CAPA-IVM 的可行性。 单一 COC 培养物将允许对每个成熟卵母细胞进行非侵入性分子分析,以鉴定在 IVM 后卵丘细胞中表达的优质基因(卵丘生物标志物),这些基因随后可用于鉴定胚胎具有最高的植入潜力。
研究类型
注册 (实际的)
阶段
- 不适用
联系人和位置
学习地点
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Ho Chi Minh City、越南
- My Duc Hospital
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
描述
纳入标准:
- 具有多囊卵巢形态:整个卵巢至少有 25 个卵泡(2-9 毫米)和/或卵巢体积增加(>10 毫升)(1 个卵巢符合这些标准就足够了)
- 没有主要的子宫或卵巢异常
- 在 OPU 日至少有 15 个卵泡
- 患者同意参与研究
排除标准:
- 高级(> 2 级)子宫内膜异位症
- 精子极差的病例(服务燕麦:密度
学习计划
研究是如何设计的?
设计细节
- 主要用途:治疗
- 分配:非随机化
- 介入模型:并行分配
- 屏蔽:无(打开标签)
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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实验性的:单一文化
将在 Capacitation 培养基中单独培养的 COC 转移到含有“成熟培养基”的“洗涤盘”中的单个洗涤液滴中,并彻底清洗。
然后将 COCs 一个一个地转移到带有“成熟培养基”的“培养皿”中。
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卵丘-卵母细胞复合物 (COC) 将在 CAPA-IVM 标准条件下培养:24 小时获能,随后 30 小时成熟。
第一组将是池中培养(组培养)。
第二组将在 20µl 液滴中单独培养。
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实验性的:集团文化
使用 Eppendorf 微量移液器将一半的 COC(一次 5-10 个)从获能培养皿转移到含有“成熟培养基(群体培养)”的“洗涤盘”中并彻底清洗(用 5µl 最大吸头加载移液器吸头.
10 微升)。
然后将 COC 转移到具有“成熟培养基(群体培养)”的“IVM 培养皿”中。
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卵丘-卵母细胞复合物 (COC) 将在 CAPA-IVM 标准条件下培养:24 小时获能,随后 30 小时成熟。
第一组将是池中培养(组培养)。
第二组将在 20µl 液滴中单独培养。
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研究衡量的是什么?
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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优质胚胎数
大体时间:胞浆内单精子注射后至少 3 天
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第 3 天获得的优质胚胎数量
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胞浆内单精子注射后至少 3 天
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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多次投递
大体时间:在妊娠 24 周时
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出生超过 24 周的超过一名婴儿
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在妊娠 24 周时
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成熟率
大体时间:取卵后两天
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2种COC培养的成熟卵母细胞百分比
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取卵后两天
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受精率
大体时间:胞浆内单精子注射后 16-18 小时
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2种COC培养的受精卵百分比
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胞浆内单精子注射后 16-18 小时
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裂解率
大体时间:胞浆内单精子注射后至少 3 天
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2 种 COC 培养的第 3 天胚胎占受精卵的百分比
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胞浆内单精子注射后至少 3 天
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膨胀率
大体时间:经过至少 30 小时的成熟培养
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2 种 COC 培养后卵丘-卵母细胞复合体扩张的百分比
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经过至少 30 小时的成熟培养
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人类卵丘细胞基因的相对表达率(R)
大体时间:成熟培养至少30小时后收集卵丘细胞,-80oC保存直至RNA纯化
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收集卵丘细胞,mRNA纯化后合成cDNA,相对定量PCR检测基因表达
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成熟培养至少30小时后收集卵丘细胞,-80oC保存直至RNA纯化
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临床妊娠
大体时间:第一次移植完成后胚胎植入后 5 周
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妊娠 7 周超声检查至少有一个孕囊,并检测心跳活动
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第一次移植完成后胚胎植入后 5 周
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着床率
大体时间:第一次移植完成后胚胎移植后3周
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作为每移植胚胎数的妊娠囊数
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第一次移植完成后胚胎移植后3周
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持续怀孕
大体时间:妊娠 12 周时
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持续妊娠的定义是在第一次转移完成后,妊娠 12 周或更长时间时可检测到心率的妊娠
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妊娠 12 周时
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流产
大体时间:第一次移植完成后妊娠 24 周
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< 24 周时流产
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第一次移植完成后妊娠 24 周
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多胎妊娠
大体时间:第一次移植完成后胚胎植入后 5 周
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定义为早孕超声(妊娠 6-8 周)时存在超过一个囊
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第一次移植完成后胚胎植入后 5 周
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妊娠试验阳性
大体时间:第一次移植完成后胚胎植入后 2 周
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血清人绒毛膜促性腺激素水平大于 25 mIU/mL
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第一次移植完成后胚胎植入后 2 周
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活产
大体时间:怀孕24周时
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定义为至少一名新生儿在妊娠 24 周后并表现出任何生命迹象;双胞胎被算作单胎
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怀孕24周时
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合作者和调查者
调查人员
- 首席研究员:Tuong M Ho, MD, MCE、Hope Research Center
出版物和有用的链接
一般刊物
- Sanchez F, Le AH, Ho VNA, Romero S, Van Ranst H, De Vos M, Gilchrist RB, Ho TM, Vuong LN, Smitz J. Biphasic in vitro maturation (CAPA-IVM) specifically improves the developmental capacity of oocytes from small antral follicles. J Assist Reprod Genet. 2019 Oct;36(10):2135-2144. doi: 10.1007/s10815-019-01551-5. Epub 2019 Aug 9.
- Vuong LN, Le AH, Ho VNA, Pham TD, Sanchez F, Romero S, De Vos M, Ho TM, Gilchrist RB, Smitz J. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. J Assist Reprod Genet. 2020 Feb;37(2):347-357. doi: 10.1007/s10815-019-01677-6. Epub 2020 Jan 4.
- Sanchez F, Romero S, De Vos M, Verheyen G, Smitz J. Human cumulus-enclosed germinal vesicle oocytes from early antral follicles reveal heterogeneous cellular and molecular features associated with in vitro maturation capacity. Hum Reprod. 2015 Jun;30(6):1396-409. doi: 10.1093/humrep/dev083. Epub 2015 Apr 22.
- Saenz-de-Juano MD, Ivanova E, Billooye K, Herta AC, Smitz J, Kelsey G, Anckaert E. Genome-wide assessment of DNA methylation in mouse oocytes reveals effects associated with in vitro growth, superovulation, and sexual maturity. Clin Epigenetics. 2019 Dec 19;11(1):197. doi: 10.1186/s13148-019-0794-y. Erratum In: Clin Epigenetics. 2020 Jan 27;12(1):18.
- Sanchez F, Lolicato F, Romero S, De Vos M, Van Ranst H, Verheyen G, Anckaert E, Smitz JEJ. An improved IVM method for cumulus-oocyte complexes from small follicles in polycystic ovary syndrome patients enhances oocyte competence and embryo yield. Hum Reprod. 2017 Oct 1;32(10):2056-2068. doi: 10.1093/humrep/dex262.
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (实际的)
研究完成 (实际的)
研究注册日期
首次提交
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首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
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