拓宽我们对早期和晚期流感疫苗有效性的理解 (BELIEVE)

招聘、筛选和资格评估

将通过电子邮件联系潜在参与者（莱斯特大学医院 NHS 信托基金、UHL 工作人员）以宣传和解释该研究。 该电子邮件将成为每年发送的常规季节性流感疫苗接种电子邮件的一部分，以提醒 UHL 员工接种疫苗。 此外，调查人员将在工作人员人流量大的区域通过海报做广告，例如餐厅和我们的职业健康团队将协助进行这项研究的宣传。 研究人员希望一些医护人员 (HCW) 通过口耳相传了解这项研究。

该研究将分为两个招募阶段。 “早期”疫苗接种组为 9 月，“晚期”疫苗接种组为 11 月中旬至 12 月中旬——确切时间可能会有所不同，具体取决于何时收到灭活流感疫苗和病毒的季节性，因为所有招募工作都将在流感季节开始前完成。 不会随机分配到两个疫苗接种组；医护人员是想提前还是延迟接种疫苗将由他们决定。 每个小组最多招募 200 名医护人员。

表示有兴趣参与研究的个人将亲自或通过电子邮件收到一份信息表。 在此之后，研究人员将给予他们需要的时间，以决定是否参与该研究。 如果个人同意参加，研究小组的一名成员将筛选并确认资格。 只有满足所有标准，才会招募参与者。 此时将安排工作人员在 LRI 的研究空间参加初步任命。 研究领域的招聘将遵守 UHL 目前实施的社会疏远措施。

在初次任命时，将向工作人员分组解释研究。 然后，研究团队的一名成员将从每位医护人员那里单独寻求书面知情同意书，详情如下。 如果个人对研究有更多疑问，将允许另一位研究团队成员支持和促进知情同意。

住院患者的招募 在流感季节开始之前，将通过电子邮件和海报在临床区域通知急性内科病房的临床医生有关涉及患有（流感样疾病）ILI 住院患者的研究。 莱斯特大学医院病毒学系在流感季节定期召集住院患者流感阳性病例的临床团队。 当临床团队随后向患者解释这一诊断时，他们也会让他们了解这项研究，并向他们提供参与者信息手册。 在此之后，研究人员将根据患者的需要决定是否参加该研究。 如果个人同意参加，他们将通知临床团队的一名成员，然后由该成员通知研究团队。 研究小组的一名成员将到病房进行筛查并确认资格。 只有满足所有标准，才会招募参与者。 使用实验室结果数据，也将以同样的方式招募 20 名确诊为流感阴性拭子的住院患者作为对照组。

考察访问

以下活动将在每次访视时进行并记录在 CRF 中：

访问 1：基线访问

• 如果参与者符合纳入和排除标准并给予充分知情的书面同意，他们将被登记。
• 然后将为参与者分配一个研究编号
• 参与者将完成一份简短的调查问卷，其中包括人口统计信息：年龄、性别、种族、工作角色、医疗合并症、常规药物治疗、吸烟史、流感感染史和流感疫苗。
• 为基线抗体收集 10ml 免疫前凝血。 处理血液并储存血清用于血清学检测。 流感疫苗将以正常方式接种。
• 参与者将获得一个温度计、两个流感自我采样工具包（即一个拭子和一个带有微生物学样本袋的病毒运输介质管），以及他们在出现任何流感样疾病时将填写的两份信息表（伊利）。 ILI 将根据 WHO 病例定义定义为 >37.8oC 的发烧和最近 10 天内出现的咳嗽。 将向他们展示如何操作温度计、使用自拭子（即咽喉拭子）以及如何将拭子固定在采样管中。 他们还将展示如何填写 ILI 事件表 (ILIef) - 简要记录其 ILI 症状/体征的时间和性质。

访问 2：基线访问后 3 周（+ 或 - 7 天）

• 收集 10ml 凝血用于血清学。 处理血液并储存血清。
• 将要求参与者提供呼吸样本，这将作为对照，与 ILI 期间出现的呼吸样本进行比较 第 3 次访视：流感高峰期通常为 1 月至 2 月（+ 或 - 30 天）
• 收集 10ml 凝血用于血清学。 处理血液并储存血清。 第 4 次访问：流感季节结束，通常为 4 月至 5 月（+ 或 - 30 天）
• 收集 10ml 凝血用于血清学。 处理血液并储存血清。 ILI 事件研究访问 研究参与者将通过电子邮件或电话联系研究团队，提醒他们 ILI 事件已发生，并安排研究团队成员在事件发生后尽快从他们那里收集拭子和 ILIef采取适当的储存（在 -80oC 冰箱中）直到测试。 如果研究参与者在发生 ILI 时在家，他们将被要求完成自拭子和 ILef。 根据政府关于 COVID-19 的指南中发布的运输指南：根据 UN3373，包装说明 650 在实验室安全处理和处理样品，研究小组的一名成员将对拭子进行双层包装和收集。 拭子将被送到 UHL 病毒学实验室并根据标准操作程序进行处理（见第 8.7.1 节）。

将向研究参与者重申，这些拭子结果的结果将连同最新的职业健康建议一起通过电子邮件和电话发送给他们。 他们将被建议在等待拭子结果的同时遵循 ILI 的职业健康政策，以正常方式报告疾病，如果需要有关当前疾病时期的进一步医疗建议，请联系他们的全科医生。

ILIef 的内容将被输入到参与者的病例报告表 (CRF) 中，不会包含任何个人信息。 这些细节将用于解释在 WHO 墨尔本进行的病毒测序和抗体滴度。

如果研究参与者在开发 ILI 时正在工作，他们将被要求提供呼吸样本和口罩样本，以便在下班前使用新方法检测流感。 采样材料将被带到居家护理工作者所在的地方，但如果不能立即进行，则居家护理工作者将被告知遵循职业健康建议并回家。 从这些过程中收集的样本在第 8.7 节中有详细说明。

住院呼吸样本 将按照通常的 UHL 感染控制政策接触住院患者。 只会接触最近的咽拭子常见呼吸道病原体检测结果可用的患者。 COVID-19 阳性病房将不参与招募，而是将从 COVID-19 阴性病房招募患有流感和其他呼吸道病毒的住院患者。 根据政策，确诊流感阳性的患者通常在侧室接受治疗。 在所有情况下，患者都不需要接触分析设备，因为呼吸捕获和分析过程是分开的。 将不会对需要通过面罩进行氧疗的患者进行面罩采样。 一旦同意研究，研究小组的一名成员将带着收集呼吸样本所需的口罩、注射器和喉舌接近患者。 此时还将进行重复的咽拭子检查，以便在新诊断方法和当前实践之间进行准确比较。 在可能的情况下，将使用所有三种呼吸采样方法。 一旦样本被收集，它们将被放入一个生物危险袋中，并被带到分析机器上。 拭子和口罩样本将被运送到莱斯特皇家医院的病毒学实验室进行处理。 呼吸捕获设备（注射器和一次性口罩）将按照医疗废物的正常方式处理。 TD 管和 Bio-VOC 采样器将采用双层包装并进行净化。 这是住院患者唯一需要的研究访问，不需要进一步的随访。

自拭子 拭子将被送到莱斯特 NHS 信托大学医院的临床微生物学系，在那里它们将在 Cat 2 (BSL-2) 条件下进行处理。 它们将被涡旋，并丢弃拭子，留下接种的病毒传输介质 (VTM)。 VTM 管将在标准诊断分析（通常用于医院患者测试）上进行测试，以检查是否存在流感（因为许多不同的呼吸道病毒会导致“流感样疾病”）。 如果检测到流感，则该 VTM 的等分试样将与血清样本一起发送到 WHO Melbourne，用于流感病毒测序。 VTM 将根据 UN3733/Category B 法规运送到 WHO 实验室。

VOC 呼气分析 所有三个分析平台都将使用相同的基本收集方法。 将要求参与者在呼吸采样前至少 30 分钟不要吃或喝任何东西。 在采样之前，用水漱口，然后他们可以吞咽 - 然后通过向一次性吹嘴呼气 3-5 秒来提供三个非强制呼吸样本。 研究人员将佩戴 UHL 当地信托政策规定的 PPE 来收集鼻腔和口腔拭子。 一次性临床手套将用于所有程序。 分析设备将保存在病房或远离患者直接接触的研究区域。

对于 GC-IMS 分析，咬嘴连接到 10 厘米长的塑料管上。 当患者向管中呼气时，研究人员会将呼吸样本吸入 5 毫升注射器中，沿管向下移动一部分。

然后研究人员将样品从注射器注射到 BreathSpecTM GC-IMS 设备中进行分析。 作为分析过程的一部分，样品中包含的任何传染性物质将被加热到 60°C 以上而被破坏。

eNose 使用带有 CE 标志的商用呼吸捕获装置，即 Markes Bio-VOC。 该装置可容纳 129 毫升的呼吸，密封且仅在准备使用时打开，并且是一次性的。 用户在采样前将纸板接口安装到设备上。 一旦患者向装置中呼气，便会移除咬嘴并添加一个注射器配件，该配件连接到 eNose。 然后压下注射器并分析样品。 分析时间不到 5 分钟。 根据制造商的指南，eNose 机器将在每天使用结束时进行消毒。

对于 GC-MS 分析，使用上述 Markes Bio-VOC 装置再次收集进一步的呼吸样本。 收集样品后，将其转移到热解吸 (TD) 管（通常为 89mm x 6.4mm）上。 管的内壁涂有吸收层，呼吸化学物质附着在该吸收层上。 TD 管放置在 Bio-VOC 装置的末端，捕获的空气被推过该管。 完成后，管的末端用端盖密封。 然后通过长时间/高温循环对 Bio-VOC 采样器和 TD 管进行经过验证的去污过程，以确保病毒被杀死。 根据预先定义的材料转移协议，经过净化的 TD 管将保存在莱斯特皇家医院研究区的储物箱中，以便运送到华威大学进行分析和最终处置。

GC-IMS 分析的结果将定期从 BreathSpecTM 上传到 DataSync 共享驱动器，并由华威大学的分析师下载。 没有可识别的数据将与此数据相关联，只有研究编号。

面罩采样面罩采样包括参与者佩戴经过改良的面罩（平面外科口罩、鸭嘴口罩或 FFP1），其中包含多达 5 条 3D 打印聚乙烯醇 (PVA) 条带，持续长达 60 分钟，同时由研究团队的一名成员进行观察。 研究人员将为获取样本的研究人员提供培训、支持和个人防护设备，并同意当地处理的协议。 口罩在使用前经过消毒并保存在密封的样品袋中，佩戴后将它们放回这些袋子中并密封。 他们将根据有关运输危险材料的当前风险评估和标准操作程序被运送到 UHL 病毒学实验室。 病毒 RNA 将使用实时定量 PCR 从口罩内的 PVA 条中提取和量化。 PVA 条带的加工需要将它们溶解在水中，然后使用分子方法从水中提取和分析 RNA 病毒。 口罩和袋子将被销毁。

血清检测和病毒测序 在每个需要血清样本的预定日期，凝固的血液将在 2oC 至 8oC 下储存，并在 24 小时内在 LRI 的研究空间离心。 血清将储存在冷冻管中，所有冷冻管都标有参与者的研究编号、访问编号和在 LRI 研究空间收集的日期。 样品将在 -80 oC 下冷冻保存直至装运。 收集完所有样本后，一套冷冻管将被送往墨尔本的世卫组织参考实验室。 另一组冷冻管将作为安全措施储存起来，以防运输出现问题。 在参与者同意的情况下，任何未使用的血清样本都将被存储以用于未来的伦理批准研究，并与英国内外其他学术机构和行业合作伙伴的其他研究合作者共享，以供未来研究使用。 血清将用于血凝抑制和微量中和测定，一旦所有样本都经过处理，结果将被送回莱斯特的研究团队。

血凝抑制 (HAI) 和微量中和 (MN) 检测以及流感病毒测序将在 WHO 流感参考和研究合作中心 (VIDRL) 进行，Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC 3000，澳大利亚。