Ampliando nossa compreensão da eficácia da vacina contra influenza precoce versus tardia (BELIEVE)

Recrutamento, Triagem e Avaliação de Elegibilidade

Os participantes em potencial (University Hospitals of Leicester NHS Trust, equipe do UHL) serão contatados por e-mail para anunciar e explicar o estudo. O e-mail fará parte dos e-mails rotineiros de vacinação contra a gripe sazonal que são enviados todos os anos para lembrar os funcionários do UHL de serem imunizados. Além disso, os investigadores anunciarão por meio de cartazes nas áreas de alto tráfego de funcionários, por ex. restaurante, e nossa Equipe de Saúde Ocupacional auxiliará nessa divulgação do estudo. Os investigadores esperam que alguns profissionais de saúde (HCWs) tomem conhecimento do estudo através do boca a boca.

O estudo terá duas fases de recrutamento. Para o mês de setembro para o grupo de vacinação 'precoce' e de meados de novembro a meados de dezembro para o grupo de vacinação 'tardio' - os horários exatos podem variar dependendo de quando as vacinas inativadas contra influenza são recebidas e da sazonalidade do vírus , pois todo o recrutamento será concluído antes do início da temporada de gripe. A alocação para os dois grupos de vacinação não será aleatória; será decisão dos profissionais de saúde se eles gostariam de ter a vacinação antecipada ou tardia. Haverá um limite de 200 profissionais de saúde recrutados para cada grupo.

Os indivíduos que manifestarem interesse em participar do estudo receberão uma folha de informações pessoalmente ou por e-mail. Em seguida, os investigadores darão a eles o tempo necessário para decidir se devem ou não participar do estudo. Se o indivíduo concordar em participar, um membro da equipe de pesquisa fará a triagem e confirmará a elegibilidade. Os participantes só serão recrutados se todos os critérios forem satisfeitos. Neste momento, serão tomadas providências para que os funcionários compareçam a um encontro inicial no Espaço de Pesquisa do LRI. O recrutamento na área de pesquisa obedecerá às medidas de distanciamento social vigentes no UHL.

Nesta consulta inicial, o estudo será explicado aos membros da equipe em grupos. Um membro da equipe de pesquisa solicitará o consentimento informado por escrito, conforme detalhado abaixo, de cada profissional de saúde individualmente. Se um indivíduo tiver mais perguntas sobre o estudo, outro membro da equipe do estudo poderá apoiar e facilitar o consentimento informado.

Recrutamento de pacientes internados Os médicos nas enfermarias médicas agudas serão notificados antes do início da temporada de influenza por e-mail e pôsteres, nas áreas clínicas, do estudo envolvendo pacientes internados com ILI (doença semelhante à influenza). O departamento de Virologia dos Hospitais Universitários de Leicester chama rotineiramente a equipe clínica de casos positivos de influenza em pacientes internados durante a temporada de influenza. Quando a equipe clínica for explicar esse diagnóstico ao paciente, eles também o informarão sobre o estudo e fornecerão um folheto informativo do participante. Em seguida, os investigadores darão ao paciente o tempo necessário para decidir se deseja ou não participar do estudo. Se o indivíduo concordar em participar, ele informará um membro da equipe clínica que notificará a equipe de pesquisa. Um membro da equipe de pesquisa comparecerá à enfermaria para fazer a triagem e confirmar a elegibilidade. Os participantes só serão recrutados se todos os critérios forem satisfeitos. Usando dados de resultados laboratoriais, vinte pacientes internados com swabs confirmados como negativos para influenza também serão recrutados da mesma forma, como um grupo de controle.

Visitas de estudo

As seguintes atividades serão realizadas em cada visita e registradas no CRF:

Visita 1: visita inicial

• Os participantes serão inscritos desde que atendam aos critérios de inclusão e exclusão e dêem consentimento informado e por escrito.
• Os participantes receberão um número de estudo
• Os participantes preencherão um breve questionário que incluirá informações demográficas: idade, sexo, etnia, cargo, comorbidades médicas, medicamentos regulares, histórico de tabagismo, histórico de infecções por influenza e vacina contra influenza.
• Coletar 10ml de sangue coagulado pré-imunização para anticorpos basais. Processe o sangue e armazene o soro para testes de sorologia. A vacina contra influenza será administrada da maneira normal.
• Os participantes receberão um termômetro, dois kits de autoamostragem de influenza (ou seja, um swab e um tubo de meio de transporte viral com uma bolsa de amostra de microbiologia) e dois formulários de informação que preencherão caso desenvolvam qualquer doença semelhante à influenza ( ILI). Uma ILI será definida de acordo com a definição de caso da OMS como febre > 37,8oC e tosse com início nos últimos 10 dias. Eles aprenderão como operar o termômetro, fazer um auto-cotonete (ou seja, um cotonete na garganta) e como prender o cotonete no tubo de amostragem. Eles também aprenderão como preencher um formulário de evento de ILI (ILIef) - registrando brevemente o tempo e a natureza de seus sintomas/sinais de ILI.

Visita 2: 3 semanas após a visita inicial (+ ou - 7 dias)

• Coletar 10ml de sangue coagulado para sorologia. Processe o sangue e armazene o soro.
• Os participantes serão solicitados a fornecer amostras de respiração, isso funcionará como um controle contra o qual as amostras de respiração que ocorreram durante o ILI serão comparadas Visita 3: Pico da temporada de influenza geralmente de janeiro a fevereiro (+ ou - 30 dias)
• Coletar 10ml de sangue coagulado para sorologia. Processe o sangue e armazene o soro. Visita 4: Fim da temporada de gripe geralmente de abril a maio (+ ou - 30 dias)
• Coletar 10ml de sangue coagulado para sorologia. Processe o sangue e armazene o soro. Visita do estudo do evento ILI Os participantes do estudo entrarão em contato com a equipe do estudo por e-mail ou telefone para alertá-los de que ocorreu um evento ILI e para providenciar que um membro da equipe do estudo colete o swab e o ILIef deles, o mais rápido possível após ter sido levado, para armazenamento apropriado (em um freezer -80oC) até testado. Se os participantes do estudo estiverem em casa quando desenvolverem ILI, eles serão solicitados a preencher o auto-swab e o ILef. O swab será ensacado em dobro e coletado por um membro da equipe de pesquisa de acordo com a orientação de transporte emitida na orientação do governo sobre COVID-19: manuseio e processamento seguros para amostras em laboratórios de acordo com UN3373, instruções de embalagem 650. As zaragatoas serão entregues no laboratório de virologia UHL e processadas de acordo com os procedimentos operacionais padrão (consulte a Seção 8.7.1).

Será reiterado ao participante do estudo que os resultados desses swabs serão enviados por e-mail e por telefone junto com os conselhos de saúde ocupacional mais recentes. Eles serão aconselhados a seguir a política de saúde ocupacional para ILI enquanto aguardam os resultados do swab, relatar a doença da maneira normal e entrar em contato com seu médico de família se for necessário mais aconselhamento médico sobre o período atual da doença.

O conteúdo do ILIef será inserido no formulário de relato de caso (CRF) do participante, nenhuma informação pessoal será incluída. Esses detalhes serão usados ​​na interpretação do sequenciamento viral e dos títulos de anticorpos, realizados na OMS de Melbourne.

Se o participante do estudo estiver no trabalho quando desenvolver ILI, ele será solicitado a fornecer uma amostra de respiração e amostra de máscara para a detecção de influenza usando novos métodos antes de deixar o trabalho. Os materiais de amostragem serão levados para onde o profissional de saúde está localizado, mas se isso não puder acontecer imediatamente, o profissional de saúde será instruído a seguir os conselhos de saúde ocupacional e ir para casa. As amostras coletadas desses processos são detalhadas na seção 8.7.

Amostra de respiração do paciente internado Os pacientes internados serão abordados de acordo com a política usual de controle de infecção da UHL. Apenas os pacientes que têm resultados disponíveis para um swab de garganta testado para patógenos respiratórios comuns serão abordados. As enfermarias positivas para COVID-19 não serão envolvidas no recrutamento, em vez disso, os pacientes internados com Influenza e outros vírus respiratórios serão recrutados das enfermarias negativas para COVID-19. Os pacientes confirmados como positivos para influenza geralmente são tratados em quartos laterais de acordo com a política. Em todos os casos, não será necessário que o paciente entre em contato com o equipamento de análise, pois a captura da respiração e os processos analíticos são separados. A amostragem com máscara não será realizada em pacientes que necessitam de oxigenoterapia por meio de máscara facial. Uma vez consentido no estudo, um membro da equipe de pesquisa abordará o paciente com as máscaras, seringas e bocais necessários para a coleta de amostras de respiração. Um esfregaço de garganta repetido também será feito neste momento, para que uma comparação precisa possa ocorrer entre os novos métodos de diagnóstico e a prática atual. Todos os três métodos de amostragem de respiração, sempre que possível, serão usados. Depois de coletadas as amostras, elas serão colocadas em uma bolsa de risco biológico e levadas para as máquinas de análise. As amostras de swabs e máscaras serão transportadas para o laboratório de virologia da Leicester Royal Infirmary para processamento. Os equipamentos de captação da respiração (seringas e bocais descartáveis) serão descartados da forma normal para lixo clínico. Os tubos TD e o amostrador Bio-VOC serão ensacados duas vezes e serão descontaminados. Esta é a única visita do estudo exigida por pacientes internados e nenhum acompanhamento adicional é necessário.

Auto-cotonetes Os esfregaços serão entregues no Departamento de Microbiologia Clínica dos Hospitais Universitários de Leicester NHS Trust, onde serão manuseados em condições Cat 2 (BSL-2). Eles serão agitados no vórtice e os swabs descartados deixando o meio de transporte de vírus (VTM) inoculado. Os tubos VTM serão testados em um ensaio de diagnóstico padrão (usado rotineiramente para testes de pacientes hospitalares) para verificar a presença de influenza (uma vez que muitos vírus respiratórios diferentes podem causar uma 'doença semelhante à influenza'). Se a gripe for detectada, uma alíquota deste VTM será enviada à OMS Melbourne, juntamente com as amostras de soro, para sequenciamento viral da gripe. O VTM será transportado para o laboratório da OMS sob os regulamentos UN3733/Categoria B.

Análise de respiração VOC Todas as três plataformas de análise usarão a mesma abordagem de coleta básica. Será solicitado aos participantes que não tenham comido ou bebido nada pelo menos 30 minutos antes da coleta da respiração. Antes da amostragem, lave a boca com água que eles podem engolir - e, em seguida, forneça três amostras de respiração não forçada expirando em bocais descartáveis ​​por 3-5 segundos. Os pesquisadores usarão EPI ditado pela política de confiança local do UHL para coletar zaragatoas nasais e orais. Luvas clínicas descartáveis ​​serão usadas para todos os procedimentos. Os dispositivos analíticos serão mantidos na enfermaria ou em uma área de pesquisa longe do contato direto com o paciente.

Para análise GC-IMS, o bocal é conectado a um tubo de plástico de 10 cm de comprimento. À medida que o paciente exala no tubo, o pesquisador coletará uma amostra da respiração em uma seringa de 5 ml no meio do tubo.

A amostra será então injetada da seringa pelo pesquisador no dispositivo BreathSpecTM GC-IMS para análise. Qualquer material infeccioso contido na amostra será destruído ao ser aquecido a mais de 60°C como parte do processo analítico.

O eNose usa uma unidade comercial de captura de respiração com marcação CE, a Markes Bio-VOC. A unidade contém 129ml de respiração, vem lacrada e só é aberta quando estiver pronta para uso e é descartável. O usuário ajusta um bocal de papelão na unidade antes da amostragem. Uma vez que o paciente respirou na unidade, o bocal é removido e um encaixe de seringa é adicionado, que se conecta ao eNose. A seringa é então pressionada e a amostra é analisada. O tempo de análise é inferior a 5 minutos. A máquina eNose será descontaminada no final de cada dia de uso de acordo com as diretrizes do fabricante.

Para a análise GC-MS, outra amostra de respiração é novamente coletada usando a unidade Markes Bio-VOC como acima. Uma vez coletada a amostra, ela será transferida para um tubo de dessorção térmica (TD) (normalmente 89 mm x 6,4 mm). As paredes internas do tubo são revestidas com uma camada absorvente à qual aderem os produtos químicos respiratórios. O tubo TD é colocado no final da unidade Bio-VOC e o ar capturado é empurrado através do tubo. Depois de concluídos, as extremidades dos tubos são seladas com tampas. Um processo de descontaminação validado é então realizado para o amostrador Bio-VOC e os tubos TD por meio de um ciclo de calor longo / alto para garantir que o vírus seja eliminado. Os tubos TD descontaminados serão mantidos em caixas de armazenamento na área de pesquisa da Leicester Royal Infirmary para transporte à Universidade de Warwick para análise e descarte final, conforme um Acordo de Transferência de Material pré-definido.

Os resultados da análise GC-IMS serão carregados regularmente do BreathSpecTM para uma unidade compartilhada DataSync e baixados por analistas da Universidade de Warwick. Nenhum dado identificável será associado a esses dados, apenas um número de estudo.

Amostragem de máscara A amostragem de máscara consiste em participantes usando uma máscara facial modificada (cirúrgica plana, bico de pato ou FFP1) que contém até 5 tiras de álcool polivinílico (PVA) impresso em 3D por até 60 minutos enquanto é observado por um membro da equipe de pesquisa. Os investigadores fornecerão treinamento, suporte e equipamentos de proteção individual para a equipe de pesquisa que obtém amostras e concordam com os protocolos de processamento local. Antes do uso, as máscaras são esterilizadas e mantidas em sacos de amostra selados, uma vez usadas, são colocadas de volta nesses sacos e seladas. Eles serão transportados para o Laboratório de Virologia da UHL de acordo com as Avaliações de Risco atuais e procedimentos operacionais padrão relativos ao transporte de materiais perigosos. O RNA viral será extraído e quantificado das tiras de PVA dentro das máscaras usando PCR quantitativo em tempo real. O processamento das tiras de PVA exige que elas sejam dissolvidas em água, da qual o vírus de RNA é extraído e analisado por métodos moleculares. As máscaras e sacolas serão destruídas.

Teste de soro e sequenciamento viral Em cada um dos dias programados que requerem amostras de soro, o sangue coagulado será armazenado de 2oC a 8oC e centrifugado em 24 horas no Research Space, LRI. Os soros serão armazenados em criotubos, com todos os criotubos rotulados com o número do estudo do participante, número da visita e data da coleta no Espaço de Pesquisa, LRI. As amostras serão armazenadas congeladas a -80 oC até o embarque. Um conjunto de frascos criogênicos será enviado ao laboratório de referência da OMS em Melbourne assim que todas as amostras forem coletadas. O outro conjunto de criotubos será armazenado como medida de segurança em caso de problemas de transporte. Com o consentimento do participante, quaisquer amostras de soro não utilizadas serão armazenadas para futuras pesquisas aprovadas eticamente e compartilhadas com outros colaboradores de pesquisa em outras instituições acadêmicas e parceiros da indústria dentro e fora do Reino Unido para pesquisas futuras. O soro será usado para inibição da hemaglutinação e ensaios de microneutralização e, uma vez que todas as amostras tenham sido processadas, os resultados serão enviados de volta à equipe de pesquisa em Leicester.

Os ensaios de inibição da hemaglutinação (HAI) e microneutralização (MN), juntamente com o sequenciamento viral da influenza, serão realizados no Centro Colaborador da OMS para Referência e Pesquisa sobre Influenza (VIDRL), Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC 3000, Austrália.