A korai és a késői influenza elleni védőoltás hatékonyságáról alkotott ismereteink bővítése (BELIEVE)

Toborzás, átvilágítás és alkalmasság értékelése

A potenciális résztvevőkkel (University Hospitals of Leicester NHS Trust, UHL munkatársai) e-mailben felvesszük a kapcsolatot a tanulmány hirdetése és magyarázata érdekében. Ez az e-mail része lesz a szezonális influenza elleni oltással kapcsolatos rutin e-maileknek, amelyeket évente küldenek ki, hogy emlékeztessenek az UHL munkatársaira az immunizálásra. Emellett a nyomozók plakátokkal hirdetnek majd a nagy forgalmú területeken, pl. az étterem, és Foglalkozás-egészségügyi Csoportunk segít a tanulmány reklámozásában. A kutatók arra számítanak, hogy egyes egészségügyi dolgozók (HCW) szájhagyomány útján szereznek tudomást a tanulmányról.

A tanulmány két toborzási szakaszból áll majd. Szeptember hónapban a „korai” oltási csoport és november közepétől december közepéig a „késői” oltási csoport esetében – a pontos időpontok változhatnak az inaktivált influenza elleni védőoltások beérkezésének időpontjától és a vírus szezonalitásától függően. , mivel minden toborzás az influenza szezon kezdete előtt lezajlik. A két oltási csoportba való besorolás nem kerül véletlenszerű besorolásra; a HCW döntése lesz, hogy korán vagy későn akarják-e megkapni az oltást. Minden csoportba legfeljebb 200 HCW-t vehetnek fel.

Azok a személyek, akik érdeklődésüket fejezik ki a vizsgálatban való részvétel iránt, személyesen vagy e-mailben tájékoztató lapot kapnak. Ezt követően a kutatók addig adják nekik, amíg el kell dönteniük, hogy részt vesznek-e a vizsgálatban vagy sem. Ha az egyén beleegyezik a részvételbe, a kutatócsoport egyik tagja átvizsgálja és megerősíti a jogosultságot. A résztvevőket csak akkor veszik fel, ha minden kritérium teljesül. Ebben az időben gondoskodnak arról, hogy a személyzet tagjai részt vegyenek egy kezdeti találkozón az LRI Kutatóterében. A kutatási területen a toborzás megfelel az UHL jelenlegi társadalmi távolságtartási intézkedéseinek.

Ezen az első megbeszélésen a tanulmányt a személyzet tagjainak csoportosan elmagyarázzák. A kutatócsoport egy tagja ezután minden egyes HCW-től külön-külön írásos beleegyezést kér az alábbiakban részletezett módon. Ha egy személynek további kérdései vannak a vizsgálattal kapcsolatban, egy másik vizsgálati csoporttag támogathatja és elősegítheti a tájékozott beleegyezést.

Fekvőbetegek toborzása Az akut egészségügyi osztályokon dolgozó klinikusokat az influenza szezon kezdete előtt e-mailben és plakátokon értesítjük a klinikai területeken az ILI-vel (influenzaszerű betegséggel) szenvedő fekvőbetegeket érintő vizsgálatról. A Leicesteri Egyetemi Kórházak Virológiai osztálya rendszeresen hívja a pozitív influenza esetek klinikai csapatát fekvőbetegeknél az influenza szezonban. Amikor a klinikai csapat elmagyarázza ezt a diagnózist a páciensnek, felhívják a figyelmükbe a vizsgálatot, és átadják a résztvevőknek szóló tájékoztatót. Ezt követően a vizsgálók addig adják a pácienst, amíg el kell döntenie, hogy részt vesz-e a vizsgálatban vagy sem. Ha az egyén beleegyezik a részvételbe, értesíti a klinikai csoport egyik tagját, aki ezután értesíti a kutatócsoportot. A kutatócsoport egy tagja részt vesz az osztályon, hogy átvizsgálja és megerősítse a jogosultságot. A résztvevőket csak akkor veszik fel, ha minden kritérium teljesül. A laboratóriumi eredmények alapján húsz igazoltan influenza-negatív tamponnal rendelkező fekvőbeteget is felvesznek ugyanilyen módon, kontrollcsoportként.

Tanulmányi látogatások

A következő tevékenységeket hajtják végre minden látogatáskor, és rögzítik a CRF-ben:

1. látogatás: Alapszintű látogatás

• A résztvevőket fel kell venni, feltéve, hogy megfelelnek a felvételi és kizárási kritériumoknak, és teljes körű tájékoztatáson alapuló írásos beleegyezést adnak.
• Ezután a résztvevők tanulmányi számot kapnak
• A résztvevők egy rövid kérdőívet töltenek ki, amely demográfiai adatokat tartalmaz: életkor, nem, etnikai hovatartozás, munkakör, társbetegségek, rendszeres gyógyszeres kezelés, dohányzási előzmények, influenzafertőzések története és influenza elleni védőoltás.
• Gyűjtsön össze 10 ml alvadt vért az alapszintű antitestek előimmunizálásához. Feldolgozza a vért és tárolja a szérumot a szerológiai vizsgálatokhoz. Az influenza elleni védőoltást a szokásos módon kell beadni.
• A résztvevők kapnak egy hőmérőt, két influenza önmintavevő készletet (azaz egy tampont és egy vírusszállító tápközeg csövet mikrobiológiai mintazsákkal), valamint két tájékoztató lapot, amelyeket abban az esetben töltenek ki, ha bármilyen influenzaszerű betegség alakul ki ( ILI). Az ILI a WHO esetdefiníciója szerint 37,8 oC feletti láz és köhögés, amely az elmúlt 10 napon belül jelentkezett. Megmutatják nekik, hogyan kell kezelni a hőmérőt, hogyan kell öntörlőt (azaz torokmintát) venni, és hogyan kell rögzíteni a tampont a mintavevő csőben. Azt is bemutatják, hogyan kell kitölteni egy ILI esemény űrlapot (ILIef) – röviden rögzítve az ILI tüneteik/jeleik időzítését és jellegét.

2. látogatás: 3 héttel az alaplátogatás után (+ vagy - 7 nap)

• Gyűjts össze 10 ml alvadt vért szerológiai vizsgálatra. Feldolgozza a vért és tárolja a szérumot.
• A résztvevőket felkérik, hogy nyújtsanak levegőmintákat, ez kontrollként fog működni, amellyel összehasonlítják az ILI során előforduló leheletmintákat. 3. látogatás: Az influenza csúcsszezonja általában januártól februárig (+ vagy - 30 nap)
• Gyűjts össze 10 ml alvadt vért szerológiai vizsgálatra. Feldolgozza a vért és tárolja a szérumot. 4. látogatás: Az influenza szezon vége általában áprilistól májusig (+ vagy - 30 nap)
• Gyűjts össze 10 ml alvadt vért szerológiai vizsgálatra. Feldolgozza a vért és tárolja a szérumot. Az ILI-esemény tanulmányútja A vizsgálat résztvevői e-mailben vagy telefonon felveszik a kapcsolatot a vizsgálati csoporttal, hogy figyelmeztessék őket, ha ILI-esemény történt, és megszervezzék, hogy a vizsgálati csoport egyik tagja vegye át tőlük a tampont és az ILIef-et, amint lehetséges, miután az történt. megfelelő tárolásra (-80 oC-os fagyasztóba) bevéve a tesztelésig. Ha a vizsgálat résztvevői otthon vannak, amikor ILI-t észlelnek, felkérik őket, hogy végezzék el az önkenetet és az ILef-et. A tampont dupla zacskóba csomagolja, és a kutatócsoport egy tagja összegyűjti a kormány COVID-19-ről szóló útmutatójában: a minták biztonságos kezelése és feldolgozása a laboratóriumokban az UN3373, a 650. számú csomagolási útmutatóban foglalt szállítási útmutatás szerint. A tamponokat az UHL virológiai laboratóriumába szállítják, és a szokásos műveleti eljárások szerint dolgozzák fel (lásd a 8.7.1. szakaszt).

Ismételten tájékoztatni fogjuk a vizsgálatban résztvevőket, hogy ezeknek a tamponeredményeknek az eredményeit e-mailben és telefonon elküldik nekik a legújabb foglalkozás-egészségügyi tanácsokkal együtt. Azt tanácsolják nekik, hogy tartsák be az ILI-vel kapcsolatos foglalkozás-egészségügyi szabályzatot, amíg a tampon eredményére várnak, jelentsék a betegséget a szokásos módon, és forduljanak háziorvosukhoz, ha további orvosi tanácsra van szükség a jelenlegi betegségi időszakkal kapcsolatban.

Az ILIef tartalma bekerül a résztvevők esetjelentési űrlapjába (CRF), személyes adatok nem kerülnek bele. Ezeket a részleteket a WHO Melbourne-ben végzett vírusszekvenálás és antitesttiterek értelmezéséhez fogják használni.

Ha a vizsgálatban résztvevő a munkahelyén van, amikor ILI-t fejt ki, felkérik, hogy a munkából való távozása előtt nyújtson levegőmintát és maszkmintát az influenza új módszerekkel történő kimutatásához. A mintavételi anyagokat oda szállítják, ahol a HCW található, de ha ez nem történhet meg azonnal, akkor a HCW-t felszólítják, hogy kövesse a foglalkozás-egészségügyi tanácsokat, és menjen haza. Az ezekből a folyamatokból gyűjtött mintákat a 8.7. szakasz részletezi.

Fekvőbeteg légvételi minta A fekvőbetegeket a szokásos UHL fertőzés-ellenőrzési szabályzat szerint keresik fel. Csak azokat a betegeket keresik fel, akiknél rendelkezésre állnak a közelmúltban a gyakori légúti kórokozók kimutatására elvégzett toroktampon vizsgálat eredményei. A COVID-19 pozitív osztályok nem vesznek részt a toborzásban, hanem az influenzában és más légúti vírusokban szenvedő fekvőbetegeket a COVID-19 negatív osztályokról toborozzák. Az igazoltan influenza-pozitív betegeket a házirendnek megfelelően általában mellékszobákban kezelik. A páciensnek minden esetben nem kell érintkeznie az elemző berendezéssel, mivel a lélegzetvételi és az analitikai folyamat elkülönül. Maszkos mintavételre nem kerül sor azoknál a betegeknél, akiknek arcmaszkos oxigénterápiára van szükségük. Miután beleegyezett a vizsgálatba, a kutatócsoport egyik tagja felkeresi a pácienst a leheletminta vételéhez szükséges maszkokkal, fecskendőkkel és szájrészekkel. Ebben az időben ismételt torokmintát is vesznek, így pontos összehasonlítást lehet végezni az új diagnosztikai módszerek és a jelenlegi gyakorlat között. Lehetőség szerint mindhárom kilégzési mintavételi módszert alkalmazni kell. A minták begyűjtése után egy biológiai veszélyt jelentő zacskóba helyezik őket, és az elemzőgépekhez viszik. A tampont és a maszkmintákat a Leicester Royal Infirmary virológiai laboratóriumába szállítják feldolgozásra. A lélegzetvételi eszközöket (fecskendőket és eldobható szájrészeket) a szokásos módon kell megsemmisíteni a klinikai hulladékok számára. A TD csövek és a Bio-VOC mintavevő dupla zacskóba kerülnek, és fertőtlenítésre kerülnek. Ez az egyetlen tanulmányi látogatás, amelyet fekvőbetegek igényelnek, és nincs szükség további nyomon követésre.

Saját tamponok A tamponokat a Leicester NHS Trust Egyetemi Kórházak Klinikai Mikrobiológiai Osztályára szállítják, ahol Cat 2 (BSL-2) körülmények között kezelik őket. Vortexeljük, és a tamponokat eldobjuk, és elhagyják a beoltott vírusszállító tápközeget (VTM). A VTM csöveket standard diagnosztikai teszttel tesztelik (rutinszerűen a kórházi betegek vizsgálatára használják), hogy ellenőrizzék az influenza jelenlétét (mivel számos különböző légúti vírus okozhat „influenzaszerű betegséget”). Ha influenzát észlelnek, akkor ennek a VTM-nek alikvot részét a szérummintákkal együtt elküldik a WHO Melbourne-hez az influenza vírusszekvenálása céljából. A VTM-et az UN3733/B kategória előírásai szerint szállítják a WHO laboratóriumába.

VOC kilégzés elemzése Mindhárom elemző platform ugyanazt az alapvető gyűjtési megközelítést fogja használni. A résztvevőket arra kérik, hogy legalább 30 perccel a levegővétel előtt ne egyenek és ne igyanak semmit. A mintavétel előtt mossa fel a száját vízzel, amit le tudnak nyelni, majd adjon három nem erőltetett leheletmintát úgy, hogy 3-5 másodpercig kilélegezzen az eldobható szájrészekbe. A kutatók az UHL helyi bizalmi politikája által diktált PPE-t viselnek az orr- és szájtamponok gyűjtéséhez. Minden eljáráshoz eldobható klinikai kesztyűt kell használni. Az analitikai eszközöket az osztályon vagy egy kutatási területen kell tartani, távol a betegek közvetlen érintkezésétől.

A GC-IMS elemzéshez a szájrész egy 10 cm hosszú műanyag csőhöz van rögzítve. Amint a páciens kilélegzik a csőbe, a kutató leheletmintát vesz egy 5 ml-es fecskendőbe, a cső részben lefelé haladva.

A kutató ezután a mintát a fecskendőből a BreathSpecTM GC-IMS készülékbe injektálja elemzés céljából. A mintában lévő fertőző anyagokat az analitikai folyamat részeként 60°C fölé melegítik.

Az eNose egy kereskedelmi forgalomban kapható CE-jelölésű légzésfogó egységet, a Markes Bio-VOC-t használ. Az egység 129 ml lélegzetet képes visszatartani, le van zárva, és csak használatra kész állapotban van kinyitva, és eldobható. A felhasználó a mintavétel előtt egy karton szájrészt illeszt az egységre. Miután a beteg belélegzett az egységbe, a szájrészt eltávolítják, és egy fecskendőcsatlakozót helyeznek hozzá, amely az eNose-hoz csatlakozik. Ezután a fecskendőt lenyomják, és a mintát elemzik. Az elemzési idő kevesebb, mint 5 perc. Az eNose gépet minden használat nap végén fertőtlenítik a gyártási irányelvek szerint.

A GC-MS analízishez ismét egy további leheletmintát veszünk a Markes Bio-VOC egységgel a fentiek szerint. A minta összegyűjtése után egy termikus deszorpciós (TD) csőbe kerül (jellemzően 89 mm x 6,4 mm). A cső belső falai nedvszívó réteggel vannak bevonva, amelyhez a lehelet vegyi anyagok tapadnak. A TD csövet a Bio-VOC egység végére helyezik, és a felfogott levegőt átnyomják a csövön. Ha elkészült, a csövek végeit zárókupakokkal le kell zárni. Ezt követően a Bio-VOC mintavevő és a TD csövek validált dekontaminációs folyamatát hosszú/magas hőcikluson keresztül végezzük el, hogy biztosítsuk a vírus elpusztulását. A dekontaminált TD-csöveket a Leicester Royal Infirmary kutatási területén lévő tárolódobozokban tárolják, és a Warwicki Egyetemre szállítják elemzés és végső ártalmatlanítás céljából, az előre meghatározott anyagszállítási megállapodás értelmében.

A GC-IMS elemzés eredményeit rendszeresen feltöltik a BreathSpecTM-ből egy DataSync megosztott meghajtóra, és letöltik a Warwicki Egyetem elemzői. Ezekhez az adatokhoz semmilyen azonosítható adat nem lesz társítva, csak egy vizsgálati szám.

Maszk-mintavétel A maszkmintavétel során a résztvevők módosított arcmaszkot viselnek (lapos sebészeti, kacsacsőrű vagy FFP1), amely legfeljebb 5 csík 3D nyomtatott polivinil-alkoholt (PVA) tartalmaz, legfeljebb 60 percig, miközben a kutatócsoport egy tagja megfigyeli őket. A nyomozók képzést, támogatást és egyéni védőfelszerelést biztosítanak a mintákat gyűjtő kutatószemélyzetnek, és megállapodnak a helyi feldolgozás protokolljában. Használat előtt a maszkokat sterilizálják és lezárt mintazsákokban tárolják, elhasználódásuk után visszahelyezik ezekbe a tasakokba és lezárják. Ezeket az UHL Virológiai Laboratóriumába szállítják a veszélyes anyagok szállítására vonatkozó jelenlegi kockázatértékelésekkel és szabványos működési eljárásokkal összhangban. A vírus RNS-t kivonják és mennyiségileg meghatározzák a maszkokon belüli PVA-csíkokból valós idejű kvantitatív PCR-rel. A PVA-csíkok feldolgozása megköveteli, hogy azokat vízben oldják fel, amelyből az RNS-vírust kivonják és molekuláris módszerekkel elemzik. A maszkokat és táskákat megsemmisítik.

Szérumvizsgálat és vírusszekvenálás A szérummintákat igénylő minden napon az alvadt vért 2°C és 8°C közötti hőmérsékleten tárolják és 24 órán belül centrifugálják a Kutatótérben, LRI. A szérumokat kriovialokban tárolják, és az összes kriovialon fel kell tüntetni a résztvevő vizsgálati számát, a látogatás számát és a begyűjtés dátumát a Kutatótérben, LRI. A mintákat a kiszállításig fagyasztva tároljuk -80 oC-on. Az összes minta összegyűjtése után egy krioviális készletet elküldenek a WHO melbourne-i referencialaboratóriumába. A másik krioviális készletet biztonsági intézkedésként tárolják szállítási problémák esetén. A résztvevő beleegyezésével a fel nem használt szérummintákat későbbi, etikailag jóváhagyott kutatásokhoz tárolják, és megosztják más kutatói munkatársakkal az Egyesült Királyságon belüli és kívüli kutatóintézetekben és iparági partnerekkel a jövőbeli kutatás céljából. A szérumot hemagglutináció-gátlási és mikroneutralizációs vizsgálatokhoz használják fel, és az összes minta feldolgozása után az eredményeket visszaküldik a leicesteri kutatócsoportnak.

A hemagglutináció-gátló (HAI) és a mikroneutralizációs (MN) vizsgálatokat, valamint az influenzavírus-szekvenálást a WHO Influenza Referencia- és Kutatóközpontjában (VIDRL), Peter Doherty Infection and Immunity Intézetben, Elizabeth Street 792, Melbourne, VIC végzik. 3000, Ausztrália.