Ampliare la nostra comprensione dell'efficacia del vaccino influenzale precoce rispetto a quello tardivo (BELIEVE)

Reclutamento, selezione e valutazione di ammissibilità

I potenziali partecipanti (University Hospitals of Leicester NHS Trust, personale UHL) saranno contattati via e-mail per pubblicizzare e spiegare lo studio. L'e-mail farà parte delle e-mail di routine sulla vaccinazione contro l'influenza stagionale che vengono inviate ogni anno per ricordare al personale UHL di essere immunizzato. Inoltre, gli investigatori faranno pubblicità con manifesti nelle aree ad alto traffico del personale, ad es. il ristorante e il nostro team di medicina del lavoro assisteranno con questa pubblicità dello studio. Gli investigatori si aspettano che alcuni operatori sanitari (operatori sanitari) vengano a conoscenza dello studio attraverso il passaparola.

Lo studio avrà due fasi di reclutamento. Per il mese di settembre per il gruppo di vaccinazione "precoce" e da metà novembre a metà dicembre per il gruppo di vaccinazione "tardiva" - i tempi esatti possono variare a seconda di quando vengono ricevuti i vaccini antinfluenzali inattivati ​​e della stagionalità del virus , poiché tutto il reclutamento sarà completato prima dell'inizio della stagione influenzale. L'assegnazione ai due gruppi di vaccinazione non sarà randomizzata; sarà la decisione degli operatori sanitari se desiderano avere la vaccinazione in anticipo o in ritardo. Ci sarà un limite di 200 operatori sanitari reclutati per ciascun gruppo.

Le persone che manifestano interesse a partecipare allo studio riceveranno una scheda informativa di persona o via e-mail. Successivamente gli investigatori daranno loro tutto il tempo necessario per decidere se partecipare o meno allo studio. Se l'individuo accetta di partecipare, un membro del gruppo di ricerca esaminerà e confermerà l'idoneità. I partecipanti saranno reclutati solo se tutti i criteri sono soddisfatti. In questo momento verranno presi accordi affinché i membri del personale partecipino a un primo appuntamento presso lo Spazio di ricerca presso l'LRI. Il reclutamento nell'area di ricerca rispetterà le attuali misure di allontanamento sociale in atto presso l'UHL.

In questo primo appuntamento lo studio sarà spiegato ai membri del personale in gruppi. Un membro del gruppo di ricerca richiederà quindi il consenso informato scritto, come descritto di seguito, da ogni singolo operatore sanitario. Se un individuo ha più domande sullo studio, un altro membro del gruppo di studio sarà autorizzato a supportare e facilitare il consenso informato.

Reclutamento di pazienti ricoverati I medici nei reparti medici per acuti saranno informati prima dell'inizio della stagione influenzale tramite e-mail e poster, nelle aree cliniche, dello studio che coinvolge pazienti ricoverati con ILI (malattia simil-influenzale). Il dipartimento di virologia degli ospedali universitari di Leicester chiama regolarmente il team clinico dei casi positivi di influenza nei pazienti ricoverati durante la stagione influenzale. Quando poi il team clinico andrà a spiegare questa diagnosi al paziente, lo informerà anche dello studio e gli fornirà un opuscolo informativo per i partecipanti. Successivamente, gli investigatori daranno al paziente tutto il tempo necessario per decidere se partecipare o meno allo studio. Se l'individuo accetta di partecipare, informerà un membro del team clinico che informerà quindi il team di ricerca. Un membro del gruppo di ricerca parteciperà al reparto per selezionare e confermare l'idoneità. I partecipanti saranno reclutati solo se tutti i criteri sono soddisfatti. Utilizzando i dati dei risultati di laboratorio, verranno reclutati allo stesso modo anche venti pazienti ricoverati con tamponi negativi all'influenza confermati, come gruppo di controllo.

Visite di studio

Ad ogni visita verranno svolte e registrate nel CRF le seguenti attività:

Visita 1: visita di riferimento

• I partecipanti saranno iscritti a condizione che soddisfino i criteri di inclusione ed esclusione e forniscano un consenso scritto pienamente informato.
• Ai partecipanti verrà quindi assegnato un numero di studio
• I partecipanti completeranno un breve questionario che includerà informazioni demografiche: età, sesso, etnia, ruolo lavorativo, comorbilità mediche, farmaci regolari, storia del fumo, storia delle infezioni influenzali e vaccino antinfluenzale.
• Raccogliere 10 ml di sangue coagulato pre-immunizzazione per anticorpi basali. Elaborare il sangue e conservare il siero per i test sierologici. Il vaccino antinfluenzale verrà somministrato normalmente.
• Ai partecipanti verrà fornito un termometro, due kit di autocampionamento dell'influenza (ovvero un tampone e una provetta di terreno di trasporto virale con una sacca per campioni microbiologici) e due moduli informativi che completeranno nel caso in cui sviluppino una malattia simil-influenzale ( ILI). Un ILI sarà definito secondo la definizione di caso dell'OMS come febbre > 37,8°C e tosse con insorgenza negli ultimi 10 giorni. Verrà mostrato loro come utilizzare il termometro, prelevare un tampone automatico (ad esempio un tampone faringeo) e come fissare il tampone nel tubo di campionamento. Verrà inoltre mostrato loro come completare un modulo di evento ILI (ILIef) - registrando brevemente i tempi e la natura dei loro sintomi/segni ILI.

Visita 2: 3 settimane dopo la visita di base (+ o - 7 giorni)

• Raccogliere 10 ml di sangue coagulato per la sierologia. Processare il sangue e conservare il siero.
• Ai partecipanti verrà chiesto di fornire campioni di respiro, questo fungerà da controllo rispetto ai quali verranno confrontati i campioni di respiro verificatisi durante l'ILI Visita 3: picco della stagione influenzale di solito da gennaio a febbraio (+ o - 30 giorni)
• Raccogliere 10 ml di sangue coagulato per la sierologia. Processare il sangue e conservare il siero. Visita 4: fine della stagione influenzale di solito da aprile a maggio (+ o - 30 giorni)
• Raccogliere 10 ml di sangue coagulato per la sierologia. Processare il sangue e conservare il siero. Visita di studio dell'evento ILI I partecipanti allo studio contatteranno il team dello studio tramite e-mail o telefono per avvisarli che si è verificato un evento ILI e per organizzare il ritiro da parte di un membro del team dello studio del tampone e dell'ILIef, non appena possibile dopo che è stato prelevato, per un'adeguata conservazione (in un congelatore a -80°C) fino al momento del test. Se i partecipanti allo studio sono a casa quando sviluppano ILI, verrà chiesto loro di completare l'auto-tampone e ILef. Il tampone sarà raddoppiato, imbustato e raccolto da un membro del gruppo di ricerca in conformità con la guida al trasporto emessa nella guida del governo su COVID-19: manipolazione e trattamento sicuri per i campioni nei laboratori in conformità con UN3373, istruzioni di imballaggio 650. I tamponi saranno consegnati al laboratorio di virologia UHL e trattati secondo le procedure operative standard (vedere Sezione 8.7.1).

Sarà ribadito al partecipante allo studio che i risultati di questi risultati del tampone saranno inviati via e-mail e telefonati insieme agli ultimi consigli di salute sul lavoro. Verrà consigliato loro di seguire la politica di salute sul lavoro per ILI in attesa dei risultati del tampone, segnalare la malattia in modo normale e contattare il proprio medico di base se è necessario un ulteriore consiglio medico in merito a questo periodo di malattia in corso.

I contenuti dell'ILIef saranno inseriti nel modulo di segnalazione dei casi dei partecipanti (CRF), nessuna informazione personale sarà inclusa. Questi dettagli saranno utilizzati nell'interpretazione del sequenziamento virale e dei titoli anticorpali, eseguita presso l'OMS di Melbourne.

Se il partecipante allo studio è al lavoro quando sviluppa ILI, gli verrà chiesto di fornire un campione di respiro e un campione di maschera per il rilevamento dell'influenza utilizzando nuovi metodi prima di lasciare il lavoro. I materiali di campionamento saranno portati nel luogo in cui si trova il personale sanitario, ma se ciò non potesse avvenire immediatamente, al personale sanitario verrà detto di seguire i consigli sulla salute sul lavoro e di tornare a casa. I campioni raccolti da questi processi sono dettagliati nella sezione 8.7.

Campione di respiro ospedaliero I pazienti ricoverati verranno contattati secondo la consueta politica di controllo delle infezioni UHL. Saranno contattati solo i pazienti che hanno risultati disponibili per un recente tampone faringeo testato per i comuni patogeni respiratori. I reparti positivi al COVID-19 non saranno coinvolti nel reclutamento, mentre i pazienti ricoverati con influenza e altri virus respiratori saranno reclutati dai reparti negativi al COVID-19. I pazienti che sono confermati positivi all'influenza sono generalmente gestiti nelle stanze laterali come da politica. In tutti i casi, al paziente non sarà richiesto di entrare in contatto con l'apparecchiatura di analisi, poiché la cattura del respiro e i processi analitici sono separati. Il campionamento della maschera non verrà effettuato su pazienti che richiedono ossigenoterapia tramite una maschera facciale. Una volta acconsentito allo studio, un membro del gruppo di ricerca si avvicinerà al paziente con le maschere, le siringhe e i boccagli necessari per la raccolta del campione di respiro. In questo momento verrà eseguito anche un tampone faringeo ripetuto in modo che possa avvenire un confronto accurato tra i nuovi metodi diagnostici e la pratica attuale. Verranno utilizzati tutti e tre i metodi di campionamento del respiro, ove possibile. Una volta che i campioni sono stati raccolti, saranno posti in un sacchetto di rischio biologico e portati alle macchine di analisi. I tamponi e i campioni di maschera saranno trasportati al laboratorio di virologia presso la Leicester Royal Infirmary per l'elaborazione. Le attrezzature per la cattura del respiro (siringhe e boccagli monouso) saranno smaltite normalmente come rifiuti clinici. Le provette TD e il campionatore Bio-VOC saranno imbustati in doppio e decontaminati. Questa è l'unica visita di studio richiesta dai pazienti ricoverati e non è richiesto alcun ulteriore follow-up.

Tamponi automatici I tamponi saranno consegnati al Dipartimento di microbiologia clinica presso gli ospedali universitari del Leicester NHS Trust, dove saranno gestiti in condizioni di Cat 2 (BSL-2). Saranno sottoposti a vortex e i tamponi scartati lasciando il mezzo di trasporto del virus inoculato (VTM). Le provette VTM saranno testate su un test diagnostico standard (utilizzato abitualmente per i test sui pazienti ospedalieri) per verificare la presenza di influenza (poiché molti virus respiratori diversi possono causare una "malattia simil-influenzale"). Se viene rilevata l'influenza, un'aliquota di questo VTM verrà inviata all'OMS di Melbourne, insieme ai campioni di siero, per il sequenziamento virale dell'influenza. VTM sarà trasportato al laboratorio dell'OMS secondo i regolamenti UN3733/Categoria B.

Analisi dell'espirato VOC Tutte e tre le piattaforme di analisi utilizzeranno lo stesso approccio di raccolta di base. Ai partecipanti verrà chiesto di non aver mangiato o bevuto nulla almeno 30 minuti prima del campionamento del respiro. Prima del campionamento, bagnare la bocca con acqua che possono poi ingoiare, quindi fornire tre campioni di respiro non forzato espirando in boccagli usa e getta per 3-5 secondi. I ricercatori indosseranno DPI dettati dalla politica di fiducia locale presso l'UHL per la raccolta di tamponi nasali e orali. Per tutte le procedure verranno utilizzati guanti clinici monouso. I dispositivi analitici saranno tenuti in reparto o in un'area di ricerca lontana dal contatto diretto con il paziente.

Per l'analisi GC-IMS, il boccaglio è collegato a un tubo di plastica lungo 10 cm. Mentre il paziente espira nel tubo, il ricercatore aspirerà un campione di respiro in una siringa da 5 ml a metà del tubo.

Il campione verrà quindi iniettato dalla siringa dal ricercatore nel dispositivo BreathSpecTM GC-IMS per l'analisi. Qualsiasi materiale infetto contenuto all'interno del campione verrà distrutto riscaldandolo a oltre 60°C come parte del processo analitico.

L'eNose utilizza un'unità commerciale di cattura del respiro marcata CE, il Markes Bio-VOC. L'unità contiene 129 ml di respiro, viene sigillata e aperta solo quando è pronta per l'uso ed è usa e getta. L'utente adatta un boccaglio di cartone all'unità prima del campionamento. Una volta che il paziente ha respirato nell'unità, il boccaglio viene rimosso e viene aggiunto un raccordo per siringa, che si collega all'eNose. La siringa viene quindi premuta e il campione viene analizzato. Il tempo di analisi è inferiore a 5 minuti. La macchina eNose verrà decontaminata alla fine di ogni giorno di utilizzo secondo le linee guida del produttore.

Per l'analisi GC-MS, un ulteriore campione di respiro viene nuovamente raccolto utilizzando l'unità Markes Bio-VOC come sopra. Una volta raccolto, il campione verrà trasferito su un tubo di desorbimento termico (TD) (tipicamente 89 mm x 6,4 mm). Le pareti interne del tubo sono rivestite con uno strato assorbente a cui aderiscono i prodotti chimici dell'alito. Il tubo TD viene posizionato all'estremità dell'unità Bio-VOC e l'aria catturata viene spinta attraverso il tubo. Una volta completate, le estremità dei tubi vengono sigillate con tappi terminali. Viene quindi intrapreso un processo di decontaminazione convalidato per il campionatore Bio-VOC e le provette TD attraverso un ciclo di calore lungo/alto per garantire che il virus venga ucciso. I tubi TD decontaminati saranno conservati in scatole di stoccaggio nell'area di ricerca della Leicester Royal Infirmary per il trasporto all'Università di Warwick per l'analisi e lo smaltimento finale, secondo un accordo di trasferimento di materiale predefinito.

I risultati dell'analisi GC-IMS verranno caricati regolarmente da BreathSpecTM su un'unità condivisa DataSync e scaricati dagli analisti dell'Università di Warwick. Nessun dato identificabile sarà associato a questi dati, solo un numero di studio.

Campionamento della maschera Il campionamento della maschera consiste in partecipanti che indossano una maschera facciale modificata (chirurgica piatta, a becco d'anatra o FFP1) che contiene fino a 5 strisce di alcol polivinilico (PVA) stampato in 3D per un massimo di 60 minuti mentre vengono osservati da un membro del team di ricerca. Gli investigatori forniranno formazione, supporto e dispositivi di protezione individuale al personale di ricerca che ottiene i campioni e concorderà i protocolli per l'elaborazione locale. Prima dell'uso le maschere vengono sterilizzate e conservate in sacchetti per campioni sigillati, una volta indossate vengono riposte in questi sacchetti e sigillate. Saranno trasportati al laboratorio di virologia UHL in linea con le attuali valutazioni del rischio e le procedure operative standard relative al trasporto di materiali pericolosi. L'RNA virale sarà estratto e quantificato dalle strisce di PVA all'interno delle maschere utilizzando la PCR quantitativa in tempo reale. La lavorazione delle strisce di PVA richiede che vengano sciolte in acqua, dalla quale il virus a RNA viene estratto e analizzato con metodi molecolari. Le mascherine e le borse saranno distrutte.

Test del siero e sequenziamento virale In ciascuno dei giorni programmati che richiedono campioni di siero, il sangue coagulato sarà conservato a 2oC a 8oC e centrifugato entro 24 ore presso il Research Space, LRI. I sieri saranno conservati in crioviali, con tutti i crioviali etichettati con il numero dello studio del partecipante, il numero della visita e la data di raccolta presso lo Spazio di ricerca, LRI. I campioni saranno conservati congelati a -80 oC fino alla spedizione. Una serie di crioviali verrà inviata al laboratorio di riferimento dell'OMS a Melbourne una volta raccolti tutti i campioni. L'altro set di crioviali verrà conservato come misura di sicurezza in caso di problemi di trasporto. Con il consenso dei partecipanti, eventuali campioni di siero inutilizzati verranno conservati per future ricerche eticamente approvate e condivisi con altri collaboratori di ricerca in altre istituzioni accademiche e partner industriali all'interno e all'esterno del Regno Unito per ricerche future. Il siero verrà utilizzato per i test di inibizione dell'emoagglutinazione e microneutralizzazione e, una volta che tutti i campioni saranno stati elaborati, i risultati verranno inviati al team di ricerca di Leicester.

I test di inibizione dell'emoagglutinazione (HAI) e della microneutralizzazione (MN), insieme al sequenziamento virale dell'influenza, saranno eseguiti presso il Centro di collaborazione dell'OMS per la consultazione e la ricerca sull'influenza (VIDRL), Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC 3000, Australia.