Laajennamme ymmärrystämme varhaisen ja myöhäisen influenssarokotteen tehokkuudesta (BELIEVE)

Rekrytointi, seulonta ja kelpoisuuden arviointi

Mahdollisiin osallistujiin (Leicesterin yliopistosairaalat, NHS Trust, UHL:n henkilökunta) otetaan yhteyttä sähköpostitse tutkimuksesta tiedottamista ja selityksiä varten. Sähköposti on osa rutiininomaisia ​​kausi-influenssarokotussähköposteja, jotka lähetetään vuosittain muistuttamaan UHL:n henkilökuntaa rokottamisesta. Lisäksi tutkijat mainostavat julisteilla vilkkaan henkilöliikenteen alueilla, mm. ravintola, ja työterveystiimimme auttavat tässä tutkimuksen mainostamisessa. Tutkijat odottavat joidenkin terveydenhuollon työntekijöiden (HCW:t) tietävän tutkimuksesta suullisesti.

Tutkimuksessa on kaksi rekrytointivaihetta. Syyskuussa "varhaisen" rokotusryhmän osalta ja marraskuun puolivälistä joulukuun puoliväliin "myöhäisen" rokotusryhmän osalta - tarkat ajoitukset voivat vaihdella riippuen siitä, milloin inaktivoidut influenssarokotteet vastaanotetaan ja viruksen kausiluonteisuudesta , koska kaikki rekrytointi saatetaan päätökseen ennen influenssakauden alkua. Jakamista kahteen rokotusryhmään ei satunnaisteta; HCW:n päätös on, haluavatko he saada rokotuksen joko aikaisin vai myöhään. Jokaiseen ryhmään otetaan enintään 200 HCW:tä.

Henkilöille, jotka ilmaisevat kiinnostuksensa osallistua tutkimukseen, lähetetään tietolomake joko henkilökohtaisesti tai sähköpostitse. Tämän jälkeen tutkijat antavat heille niin kauan kuin heidän on päätettävä, osallistuvatko he tutkimukseen vai eivät. Jos henkilö suostuu osallistumaan, tutkimusryhmän jäsen tarkistaa ja vahvistaa kelpoisuuden. Osallistujia rekrytoidaan vain, jos kaikki kriteerit täyttyvät. Tällä hetkellä sovitaan henkilöstön jäsenten osallistumisesta ensimmäiseen tapaamiseen LRI:n tutkimustilassa. Tutkimusalueen rekrytointi tapahtuu UHL:n voimassa olevien sosiaalisen etäisyyden rajoitusten mukaisesti.

Tällä ensimmäisellä tapaamisella tutkimus selitetään henkilökunnalle ryhmissä. Tutkimusryhmän jäsen pyytää sitten kirjallista suostumusta alla kuvatulla tavalla jokaiselta HCW:ltä erikseen. Jos henkilöllä on lisää kysyttävää tutkimuksesta, toinen tutkimusryhmän jäsen voi tukea ja helpottaa tietoista suostumusta.

Sairaanhoitopotilaiden rekrytointi Akuuttien sairaanhoitoosastojen kliinikoille tiedotetaan ennen influenssakauden alkua sähköpostitse ja julisteilla kliinisillä alueilla tutkimuksesta, jossa on mukana laitospotilaita, joilla on (influenssan kaltainen sairaus) ILI. Leicesterin yliopistosairaaloiden virologian osasto kutsuu rutiininomaisesti potilaspotilaiden positiivisten influenssatapausten kliiniseen tiimiin influenssakauden aikana. Kun kliininen ryhmä sitten selittää tämän diagnoosin potilaalle, he myös kertovat heille tutkimuksesta ja toimittavat heille osallistujatiedotteen. Tämän jälkeen tutkijat antavat potilaalle niin kauan kuin heidän on päätettävä, osallistuvatko he tutkimukseen vai eivät. Jos henkilö suostuu osallistumaan, hän ilmoittaa asiasta kliinisen ryhmän jäsenelle, joka ilmoittaa asiasta tutkimusryhmälle. Tutkimusryhmän jäsen osallistuu osastolle tarkistamaan ja vahvistamaan kelpoisuus. Osallistujia rekrytoidaan vain, jos kaikki kriteerit täyttyvät. Laboratoriotulostietojen perusteella verrokkiryhmäksi rekrytoidaan myös kaksikymmentä potilasta, joilla on todettu influenssanegatiivinen vanupuikko.

Opintovierailut

Seuraavat toimet suoritetaan jokaisella vierailulla ja kirjataan CRF:ään:

Käynti 1: Peruskäynti

• Osallistujat otetaan mukaan edellyttäen, että he täyttävät osallistumis- ja poissulkemiskriteerit ja antavat täysin tietoisen kirjallisen suostumuksen.
• Osallistujille annetaan sitten tutkimusnumero
• Osallistujat täyttävät lyhyen kyselylomakkeen, joka sisältää demografisia tietoja: ikä, sukupuoli, etnisyys, työtehtävä, sairaudet, säännölliset lääkkeet, tupakointihistoria, influenssatartuntojen historia ja influenssarokote.
• Kerää 10 ml hyytytynyttä verta esiimmunisaatiota lähtötason vasta-aineiden varalta. Käsittele verta ja säilytä seerumia serologisia määrityksiä varten. Influenssarokote annetaan normaalisti.
• Osallistujat saavat lämpömittarin, kaksi influenssan omanäytteenottopakkausta (eli vanupuikko ja viruksenkuljetusalustan putki mikrobiologian näytepussilla) sekä kaksi tietolomaketta, jotka he täyttävät, jos heillä on jokin influenssan kaltainen sairaus ( ILI). ILI määritellään WHO:n tapauksen määritelmän mukaan >37,8 oC:n kuumeeksi ja yskäksi, joka on alkanut viimeisen 10 päivän aikana. Heille näytetään, kuinka lämpömittaria käytetään, ottavat vanupuikko itse (eli kurkkupuikko) ja kuinka vanupuikko kiinnitetään näyteputkeen. He myös osoittavat, kuinka ILI-tapahtumalomake (ILIef) täytetään - kirjataan lyhyesti heidän ILI-oireidensa/merkkiensä ajoitus ja luonne.

Käynti 2: 3 viikkoa peruskäynnin jälkeen (+ tai -7 päivää)

• Kerää 10 ml hyytynyttä verta serologiaa varten. Käsittele verta ja säilytä seerumia.
• Osallistujia pyydetään toimittamaan hengitysnäytteitä, tämä toimii kontrollina, johon verrataan ILI:n aikana otettuja hengitysnäytteitä. Vierailu 3: Influenssan huippukausi yleensä tammikuusta helmikuuhun (+ tai -30 päivää)
• Kerää 10 ml hyytynyttä verta serologiaa varten. Käsittele verta ja säilytä seerumia. Vierailu 4: Influenssakauden loppu yleensä huhtikuusta toukokuuhun (+ tai -30 päivää)
• Kerää 10 ml hyytynyttä verta serologiaa varten. Käsittele verta ja säilytä seerumia. ILI-tapahtuman opintovierailu Tutkimukseen osallistujat ottavat yhteyttä tutkimusryhmään sähköpostitse tai puhelimitse ilmoittaakseen heille, että ILI-tapahtuma on tapahtunut, ja sopiakseen, että tutkimusryhmän jäsen noutaa heiltä vanupuikko ja ILIef mahdollisimman pian sen jälkeen. otettu asianmukaiseen säilytykseen (-80oC pakastimessa) testaukseen asti. Jos tutkimuksen osallistujat ovat kotona, kun he saavat ILI:n, heitä pyydetään suorittamaan itsepyyhkäisy ja ILef. Vanupuikko kaksinkertaistaa pussituksen ja kerää tutkimusryhmän jäsen valtioneuvoston COVID-19-ohjeessa: näytteiden turvallinen käsittely ja käsittely laboratorioissa UN3373, pakkausohje 650 mukaisesti annetun kuljetusohjeen mukaisesti. Pyyhkäisynäytteet toimitetaan UHL:n virologiseen laboratorioon ja käsitellään vakiotoimintamenettelyjen mukaisesti (katso kohta 8.7.1).

Tutkimukseen osallistuneelle toistetaan, että näiden pyyhkäisytulosten tulokset lähetetään sähköpostitse ja puhelimitse sekä uusimmat työterveysohjeet. Heitä kehotetaan noudattamaan ILI:n työterveyspolitiikkaa vanupuikkotuloksia odotellessa, ilmoittamaan sairaudesta normaalisti ja ottamaan yhteyttä yleislääkäriin, jos tarvitaan lisälääkärin neuvoja tämän nykyisen sairausjakson osalta.

ILIefin sisältö syötetään osallistujien tapausraporttilomakkeeseen (CRF), henkilötietoja ei sisällytetä. Näitä yksityiskohtia käytetään virussekvensoinnin ja vasta-ainetiitterien tulkinnassa WHO:n Melbournessa.

Jos tutkimukseen osallistuja on töissä ILI:n kehittyessä, häntä pyydetään toimittamaan hengitysnäyte ja maskinäyte influenssan havaitsemiseksi uusilla menetelmillä ennen työstä poistumista. Näytteenottomateriaalit tuodaan sinne, missä HCW sijaitsee, mutta jos tämä ei onnistu heti, HCW:tä kehotetaan noudattamaan työterveysohjeita ja menemään kotiin. Näistä prosesseista kerätyt näytteet on kuvattu yksityiskohtaisesti kohdassa 8.7.

Sairaalahengitysnäyte Sairaalapotilaita lähestytään tavanomaisen UHL-infektiontorjuntapolitiikan mukaisesti. Vain potilaat, joilla on saatavilla tulokset äskettäin otetusta kurkusta, joka on testattu yleisten hengitysteiden patogeenien varalta, otetaan yhteyttä. COVID-19-positiivisia osastoja ei oteta mukaan rekrytointiin, vaan influenssa- ja muita hengitystieviruksia sairastavat osastopotilaat rekrytoidaan COVID-19-negatiivisilta osastoilta. Influenssapositiivisiksi todetut potilaat hoidetaan yleensä sivuhuoneissa ohjeiden mukaisesti. Kaikissa tapauksissa potilaan ei tarvitse joutua kosketuksiin analyysilaitteiston kanssa, koska hengityksen talteenotto ja analyysiprosessit ovat erillisiä. Maskinäytteenottoa ei oteta potilaille, jotka tarvitsevat happihoitoa kasvonaamion kautta. Kun yksi tutkimusryhmän jäsen on antanut suostumuksensa tutkimukseen, hän lähestyy potilasta hengitysnäytteiden keräämiseen tarvittavilla maskeilla, ruiskuilla ja suukappaleilla. Tällä kertaa otetaan myös toistuva vanupuikko kurkusta, jotta voidaan tehdä tarkka vertailu uusien diagnostisten menetelmien ja nykyisen käytännön välillä. Kaikkia kolmea hengitysnäytteenottomenetelmää käytetään mahdollisuuksien mukaan. Kun näytteet on kerätty, ne laitetaan biologisen vaaran pussiin ja viedään analyysikoneisiin. Vanupuikko- ja maskinäytteet kuljetetaan Leicester Royal Infirmaryn virologian laboratorioon käsittelyä varten. Hengityksen talteenottolaitteet (ruiskut ja kertakäyttöiset suukappaleet) hävitetään normaalilla tavalla kliinisen jätteen mukana. TD-putket ja Bio-VOC-näytteenottolaite pakataan kaksinkertaisesti ja ne dekontaminoidaan. Tämä on ainoa sairaalapotilaiden vaatima opintokäynti, eikä lisäseurantaa tarvita.

Vanupuikkonäytteet toimitetaan Leicester NHS Trustin yliopistosairaaloiden kliinisen mikrobiologian osastolle, jossa niitä käsitellään Cat 2 (BSL-2) -olosuhteissa. Niitä vorteksoidaan ja vanupuikkoja heitetään pois siirrostetusta viruksenkuljetusväliaineesta (VTM). VTM-putket testataan tavallisella diagnostisella määrityksellä (käytetään rutiininomaisesti sairaalapotilaiden testaamiseen) influenssan toteamiseksi (koska monet erilaiset hengitystievirukset voivat aiheuttaa "influenssan kaltaisen sairauden"). Jos influenssa havaitaan, osa tästä VTM:stä lähetetään WHO:lle Melbourneen seeruminäytteiden kanssa influenssan virussekvensointia varten. VTM kuljetetaan WHO:n laboratorioon UN3733/Category B -määräysten mukaisesti.

VOC-hengitysanalyysi Kaikki kolme analyysialustaa käyttävät samaa peruskeräysmenetelmää. Osallistujia pyydetään olemaan syömättä tai juomatta mitään vähintään 30 minuuttia ennen hengitysnäytteenottoa. Ennen näytteenottoa huuhtele heidän suunsa vedellä, jonka he voivat sitten niellä - ja anna sitten kolme ei-pakotettua hengitysnäytettä hengittämällä ulos kertakäyttöisiin suukappaleisiin 3-5 sekunnin ajan. Tutkijat käyttävät UHL:n paikallisen luottamuspolitiikan sanelemia henkilönsuojaimia nenä- ja suupyyhkeiden keräämiseen. Kaikissa toimenpiteissä käytetään kertakäyttöisiä kliinisiä käsineitä. Analyyttiset laitteet säilytetään osastolla tai tutkimusalueella poissa suorasta potilaskontaktista.

GC-IMS-analyysiä varten suukappale kiinnitetään 10 cm pitkään muoviputkeen. Kun potilas hengittää ulos putkeen, tutkija vetää hengitysnäytteen 5 ml:n ruiskuun osittain putkea pitkin.

Tämän jälkeen tutkija ruiskuttaa näytteen ruiskusta BreathSpecTM GC-IMS -laitteeseen analysointia varten. Kaikki näytteen sisältämä tarttuva materiaali tuhotaan lämmittämällä se yli 60 °C:seen osana analyysiprosessia.

eNose käyttää kaupallista CE-merkittyä hengityksen talteenottoyksikköä, Markes Bio-VOC -laitetta. Yksikkö pidättää 129 ml hengitystä, tulee sinetöitynä ja avataan vasta, kun se on käyttövalmis, ja se on kertakäyttöinen. Käyttäjä asentaa yksikköön pahvisuukappaleen ennen näytteenottoa. Kun potilas on hengittänyt yksikköön, suukappale poistetaan ja ruiskuliitin lisätään, joka liitetään eNoseen. Sitten ruiskua painetaan ja näyte analysoidaan. Analyysiaika on alle 5 minuuttia. eNose-kone desinfioidaan jokaisen käyttöpäivän lopussa valmistajan ohjeiden mukaisesti.

GC-MS-analyysiä varten otetaan jälleen uusi hengitysnäyte käyttämällä Markes Bio-VOC -yksikköä kuten edellä. Kun näyte on kerätty, se siirretään lämpödesorptioputkeen (TD) (tyypillisesti 89 mm x 6,4 mm). Putken sisäseinät on päällystetty imukykyisellä kerroksella, johon hengityskemikaalit tarttuvat. TD-putki asetetaan Bio-VOC-yksikön päähän ja talteenotettu ilma työnnetään putken läpi. Kun se on valmis, putkien päät suljetaan päätytulpilla. Sen jälkeen Bio-VOC-näytteenottimelle ja TD-putkille suoritetaan validoitu dekontaminaatioprosessi pitkän / korkean lämpösyklin kautta, jotta varmistetaan, että virus kuolee pois. Dekontaminoidut TD-putket säilytetään säilytyslaatikoissa Leicester Royal Infirmaryn tutkimusalueella kuljetettavaksi Warwickin yliopistoon analysoitavaksi ja loppusijoitettavaksi ennalta määritellyn materiaalinsiirtosopimuksen mukaisesti.

GC-IMS-analyysin tulokset ladataan säännöllisesti BreathSpecTM:stä DataSyncin jaetulle asemalle, ja Warwickin yliopiston analyytikot lataavat ne. Näihin tietoihin ei liitetä tunnistettavia tietoja, vain tutkimusnumero.

Maskinäytteenotto Maskinäytteenotto koostuu osallistujista, jotka käyttävät modifioitua kasvomaskia (litteä kirurginen, ankannokka tai FFP1), joka sisältää enintään 5 kaistaletta 3D-tulostettua polyvinyylialkoholia (PVA) enintään 60 minuutin ajan tutkimusryhmän jäsenen tarkkailun aikana. Tutkijat tarjoavat koulutusta, tukea ja henkilösuojaimia näytteitä ottavalle tutkijahenkilökunnalle ja sopivat protokollista paikallista käsittelyä varten. Ennen käyttöä maskit steriloidaan ja säilytetään suljetuissa näytepusseissa, kun ne on käytetty, ne laitetaan takaisin näihin pusseihin ja suljetaan. Ne kuljetetaan UHL:n virologialaboratorioon voimassa olevien riskiarviointien ja vaarallisten aineiden kuljetusta koskevien standardien toimintaohjeiden mukaisesti. Viruksen RNA uutetaan ja kvantitoidaan maskien sisällä olevista PVA-liuskoista käyttämällä reaaliaikaista kvantitatiivista PCR:ää. PVA-liuskojen käsittely edellyttää niiden liuottamista veteen, josta RNA-virus uutetaan ja analysoidaan molekyylimenetelmin. Naamiot ja laukut tuhotaan.

Seerumitestaus ja virussekvensointi Jokaisena aikataulun mukaisena seeruminäytteitä vaativana päivänä hyytynyt veri säilytetään 2–8 oC:ssa ja sentrifugoidaan 24 tunnin kuluessa LRI:n tutkimustilassa. Seerumit säilytetään kryovialeissa, ja kaikkiin kryovialeihin on merkitty osallistujan tutkimusnumero, käyntinumero ja keräyspäivä tutkimustilassa, LRI. Näytteet säilytetään pakastettuna -80 oC:ssa toimitukseen asti. Yksi sarja kryovialeita lähetetään WHO:n vertailulaboratorioon Melbournessa, kun kaikki näytteet on kerätty. Toiset kryoviaalit säilytetään turvatoimenpiteenä kuljetusongelmien varalta. Osallistujan suostumuksella kaikki käyttämättömät seeruminäytteet säilytetään tulevaa eettisesti hyväksyttyä tutkimusta varten ja jaetaan muiden tutkimusyhteistyökumppaneiden kanssa muissa akateemisissa instituutioissa ja teollisuuskumppaneiden kanssa Yhdistyneessä kuningaskunnassa ja sen ulkopuolella tulevaa tutkimusta varten. Seerumia käytetään hemagglutinaation esto- ja mikroneutralisaatiomäärityksiin, ja kun kaikki näytteet on käsitelty, tulokset lähetetään takaisin Leicesteriin tutkimusryhmälle.

Hemagglutinaation esto (HAI) ja mikroneutralisaatio (MN) määritykset sekä influenssavirussekvensointi suoritetaan WHO:n influenssan viite- ja tutkimuskeskuksessa (VIDRL), Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC. 3000, Australia.