Erweiterung unseres Verständnisses der Wirksamkeit früher und später Grippeimpfstoffe (BELIEVE)

Rekrutierung, Screening und Eignungsbewertung

Potenzielle Teilnehmer (University Hospitals of Leicester NHS Trust, UHL-Mitarbeiter) werden per E-Mail kontaktiert, um für die Studie zu werben und sie zu erläutern. Die E-Mail wird Teil der routinemäßigen E-Mails zur saisonalen Grippeimpfung sein, die jedes Jahr verschickt werden, um das UHL-Personal an die Impfung zu erinnern. Darüber hinaus werben die Ermittler durch Plakate in den stark frequentierten Bereichen, z.B. das Restaurant, und unser Team für Arbeitsmedizin wird bei der Werbung für die Studie behilflich sein. Die Forscher gehen davon aus, dass einige Mitarbeiter des Gesundheitswesens durch Mundpropaganda auf die Studie aufmerksam werden.

Die Studie wird zwei Phasen der Rekrutierung umfassen. Für den Monat September für die „frühe“ Impfgruppe und von Mitte November bis Mitte Dezember für die „späte“ Impfgruppe können die genauen Zeitpunkte je nach Erhalt der inaktivierten Grippeimpfstoffe und der Saisonalität des Virus variieren , da die gesamte Rekrutierung vor Beginn der Grippesaison abgeschlossen sein wird. Die Zuordnung zu den beiden Impfgruppen erfolgt nicht randomisiert; Es wird die Entscheidung des HCW sein, ob er die Impfung entweder früher oder später erhalten möchte. Für jede Gruppe werden maximal 200 HCWs rekrutiert.

Personen, die Interesse an einer Teilnahme an der Studie bekunden, erhalten persönlich oder per E-Mail ein Informationsblatt. Anschließend geben ihnen die Prüfer so viel Zeit, wie sie benötigen, um zu entscheiden, ob sie an der Studie teilnehmen möchten oder nicht. Wenn die Person der Teilnahme zustimmt, wird ein Mitglied des Forschungsteams die Eignung prüfen und bestätigen. Teilnehmer werden nur rekrutiert, wenn alle Kriterien erfüllt sind. Zu diesem Zeitpunkt werden Vereinbarungen getroffen, damit die Mitarbeiter einen ersten Termin im Forschungsraum des LRI wahrnehmen können. Die Rekrutierung im Forschungsbereich erfolgt im Einklang mit den aktuellen sozialen Distanzierungsmaßnahmen, die an der UHL gelten.

Bei diesem ersten Termin wird den Mitarbeitern in Gruppen die Studie erklärt. Ein Mitglied des Forschungsteams wird dann von jedem HCW einzeln eine schriftliche Einverständniserklärung wie unten beschrieben einholen. Wenn eine Person weitere Fragen zur Studie hat, kann ein anderes Mitglied des Studienteams die Einwilligung nach Aufklärung unterstützen und erleichtern.

Rekrutierung stationärer Patienten Ärzte auf den Akutstationen werden vor Beginn der Grippesaison per E-Mail und in klinischen Bereichen über Poster über die Studie mit stationären Patienten mit (influenzaähnlicher Erkrankung) ILI informiert. Die Virologieabteilung der University Hospitals of Leicester ruft während der Grippesaison routinemäßig das klinische Team bei positiven Influenzafällen bei stationären Patienten an. Wenn das klinische Team dann dem Patienten diese Diagnose erläutert, macht es ihn auch auf die Studie aufmerksam und händigt ihm eine Informationsbroschüre für die Teilnehmer aus. Anschließend geben die Prüfärzte dem Patienten so lange Zeit, bis er entscheiden kann, ob er an der Studie teilnehmen möchte oder nicht. Wenn die Person einer Teilnahme zustimmt, informiert sie ein Mitglied des klinischen Teams, das dann das Forschungsteam benachrichtigt. Ein Mitglied des Forschungsteams wird die Station besuchen, um die Eignung zu überprüfen und zu bestätigen. Teilnehmer werden nur rekrutiert, wenn alle Kriterien erfüllt sind. Anhand von Laborergebnisdaten werden auf die gleiche Weise auch zwanzig stationäre Patienten mit bestätigten Influenza-negativen Abstrichen als Kontrollgruppe rekrutiert.

Studienbesuche

Die folgenden Aktivitäten werden bei jedem Besuch durchgeführt und im CRF aufgezeichnet:

Besuch 1: Basisbesuch

• Die Teilnehmer werden eingeschrieben, sofern sie die Einschluss- und Ausschlusskriterien erfüllen und eine vollständig informierte, schriftliche Einwilligung erteilen.
• Den Teilnehmern wird dann eine Studiennummer zugewiesen
• Die Teilnehmer füllen einen kurzen Fragebogen aus, der demografische Informationen enthält: Alter, Geschlecht, ethnische Zugehörigkeit, berufliche Rolle, medizinische Komorbiditäten, regelmäßige Medikamente, Rauchergeschichte, Geschichte von Grippeinfektionen und Grippeimpfung.
• Sammeln Sie 10 ml geronnenes Blut vor der Immunisierung für Basisantikörper. Verarbeiten Sie Blut und lagern Sie Serum für serologische Tests. Der Grippeimpfstoff wird wie gewohnt verabreicht.
• Die Teilnehmer erhalten ein Thermometer, zwei Influenza-Selbstprobenentnahmesets (d. h. einen Tupfer und ein Röhrchen mit viralem Transportmedium mit einem Mikrobiologie-Probenbeutel) sowie zwei Informationsformulare, die sie ausfüllen müssen, falls bei ihnen eine grippeähnliche Erkrankung auftritt ( ICH LI). Ein ILI wird gemäß der WHO-Falldefinition als Fieber von >37,8 °C und Husten definiert, der innerhalb der letzten 10 Tage aufgetreten ist. Ihnen wird gezeigt, wie man das Thermometer bedient, einen Selbstabstrich (also einen Rachenabstrich) macht und wie man den Abstrichtupfer im Probenröhrchen befestigt. Außerdem wird ihnen gezeigt, wie sie ein ILI-Ereignisformular (ILIef) ausfüllen und dabei kurz den Zeitpunkt und die Art ihrer ILI-Symptome/Anzeichen aufzeichnen.

Besuch 2: 3 Wochen nach dem Basisbesuch (+ oder - 7 Tage)

• Entnehmen Sie 10 ml geronnenes Blut für die Serologie. Blut verarbeiten und Serum aufbewahren.
• Die Teilnehmer werden gebeten, Atemproben zur Verfügung zu stellen. Diese dienen als Kontrolle, mit denen während der ILI durchgeführte Atemproben verglichen werden. Besuch 3: Hauptsaison der Grippe normalerweise Januar bis Februar (+ oder - 30 Tage)
• Entnehmen Sie 10 ml geronnenes Blut für die Serologie. Blut verarbeiten und Serum aufbewahren. Besuch 4: Ende der Grippesaison, normalerweise April bis Mai (+ oder - 30 Tage)
• Entnehmen Sie 10 ml geronnenes Blut für die Serologie. Blut verarbeiten und Serum aufbewahren. Studienbesuch bei ILI-Ereignis Die Studienteilnehmer werden das Studienteam per E-Mail oder Telefon kontaktieren, um sie darüber zu informieren, dass ein ILI-Ereignis aufgetreten ist, und um zu veranlassen, dass ein Mitglied des Studienteams den Abstrich und den ILIef so bald wie möglich bei ihnen abholt entnommen und bis zum Test ordnungsgemäß gelagert (in einem Gefrierschrank bei -80 °C). Wenn die Studienteilnehmer zu Hause sind, wenn sie eine ILI entwickeln, werden sie gebeten, den Selbstabstrich und die ILef auszufüllen. Der Abstrichtupfer wird doppelt verpackt und von einem Mitglied des Forschungsteams gemäß den Transportrichtlinien in den Leitlinien der Regierung zu COVID-19 eingesammelt: sichere Handhabung und Verarbeitung von Proben in Laboratorien gemäß UN3373, Verpackungsanweisungen 650. Die Abstrichtupfer werden an das UHL-Virologielabor geliefert und gemäß den Standardarbeitsanweisungen verarbeitet (siehe Abschnitt 8.7.1).

Der Studienteilnehmer wird erneut darauf hingewiesen, dass ihm die Ergebnisse dieser Abstrichergebnisse per E-Mail zugesandt und per Telefon zusammen mit den neuesten arbeitsmedizinischen Ratschlägen übermittelt werden. Ihnen wird empfohlen, während des Wartens auf die Abstrichergebnisse die arbeitsmedizinischen Richtlinien für ILI zu befolgen, die Krankheit wie gewohnt zu melden und sich an ihren Hausarzt zu wenden, wenn weitere medizinische Beratung bezüglich dieser aktuellen Krankheitsperiode erforderlich ist.

Der Inhalt des ILIef wird in das Fallberichtsformular (CRF) des Teilnehmers eingegeben, es werden keine persönlichen Informationen enthalten. Diese Details werden bei der Interpretation der Virussequenzierung und der Antikörpertiter verwendet, die bei der WHO Melbourne durchgeführt werden.

Wenn der Studienteilnehmer bei der Entwicklung von ILI am Arbeitsplatz ist, wird er gebeten, vor dem Verlassen des Arbeitsplatzes eine Atemprobe und eine Maskenprobe zum Nachweis von Influenza mit neuartigen Methoden abzugeben. Probenahmematerialien werden zum Standort des HCW gebracht. Wenn dies jedoch nicht sofort möglich ist, wird der HCW angewiesen, den arbeitsmedizinischen Ratschlägen zu folgen und nach Hause zu gehen. Die aus diesen Prozessen entnommenen Proben sind in Abschnitt 8.7 detailliert beschrieben.

Stationäre Atemprobe: Stationäre Patienten werden gemäß den üblichen UHL-Richtlinien zur Infektionskontrolle angesprochen. Es werden nur Patienten angesprochen, denen Ergebnisse eines kürzlich durchgeführten Rachenabstrichs vorliegen, der auf häufige Atemwegserreger getestet wurde. COVID-19-positive Stationen werden nicht an der Rekrutierung beteiligt, stattdessen werden stationäre Patienten mit Influenza und anderen Atemwegsviren aus COVID-19-negativen Stationen rekrutiert. Patienten, bei denen ein Influenza-positiver Befund bestätigt wurde, werden gemäß den Richtlinien in der Regel in Nebenzimmern behandelt. In allen Fällen muss der Patient nicht mit dem Analysegerät in Kontakt kommen, da die Atemerfassung und der Analyseprozess getrennt sind. Bei Patienten, die eine Sauerstofftherapie über eine Gesichtsmaske benötigen, wird keine Maskenprobenahme durchgeführt. Sobald der Studie zugestimmt wurde, wird ein Mitglied des Forschungsteams mit den Masken, Spritzen und Mundstücken, die für die Entnahme von Atemproben benötigt werden, auf den Patienten zukommen. Zu diesem Zeitpunkt wird auch ein erneuter Rachenabstrich durchgeführt, damit ein genauer Vergleich zwischen den neuen Diagnosemethoden und der aktuellen Praxis erfolgen kann. Sofern möglich, werden alle drei Atemprobenmethoden verwendet. Sobald die Proben gesammelt wurden, werden sie in einen biologischen Gefahrenbeutel gegeben und zu den Analysegeräten gebracht. Abstrich- und Maskenproben werden zur Verarbeitung zum Virologielabor des Leicester Royal Infirmary transportiert. Die Atemerfassungsausrüstung (Spritzen und Einwegmundstücke) wird auf die übliche Weise als klinischer Abfall entsorgt. TD-Röhrchen und der Bio-VOC-Probenehmer werden doppelt verpackt und dekontaminiert. Dies ist der einzige Studienbesuch, der für stationäre Patienten erforderlich ist, und es sind keine weiteren Nachuntersuchungen erforderlich.

Selbstabstriche Die Abstriche werden an die Abteilung für klinische Mikrobiologie der Universitätskliniken des Leicester NHS Trust geliefert, wo sie unter den Bedingungen der Kategorie 2 (BSL-2) behandelt werden. Sie werden verwirbelt und die Tupfer werden entsorgt, wobei das beimpfte Virustransportmedium (VTM) zurückbleibt. Die VTM-Röhrchen werden mit einem Standard-Diagnosetest (das routinemäßig für Krankenhauspatiententests verwendet wird) getestet, um das Vorhandensein einer Grippe festzustellen (da viele verschiedene Atemwegsviren eine „grippeähnliche Erkrankung“ verursachen können). Wenn eine Influenza nachgewiesen wird, wird ein Aliquot dieses VTM zusammen mit den Serumproben zur viralen Sequenzierung der Influenza an die WHO Melbourne geschickt. VTM wird gemäß den Vorschriften der UN3733/Kategorie B zum WHO-Labor transportiert.

VOC-Atemanalyse Alle drei Analyseplattformen verwenden denselben grundlegenden Erfassungsansatz. Die Teilnehmer werden gebeten, mindestens 30 Minuten vor der Atemprobenentnahme nichts gegessen oder getrunken zu haben. Vor der Probenahme spülen sie ihren Mund mit Wasser aus, das sie dann schlucken können – und geben dann drei nicht erzwungene Atemproben ab, indem sie 3–5 Sekunden lang in Einwegmundstücke ausatmen. Forscher werden bei der Entnahme von Nasen- und Mundabstrichen PSA tragen, die den örtlichen Vertrauensrichtlinien an der UHL entspricht. Für alle Eingriffe werden klinische Einweghandschuhe verwendet. Die Analysegeräte werden auf der Station oder in einem Forschungsbereich ohne direkten Patientenkontakt aufbewahrt.

Für die GC-IMS-Analyse wird das Mundstück an einem 10 cm langen Kunststoffrohr befestigt. Während der Patient in den Schlauch ausatmet, entnimmt der Forscher eine Atemprobe in eine 5-ml-Spritze auf halbem Weg in den Schlauch.

Anschließend wird die Probe vom Forscher aus der Spritze zur Analyse in das BreathSpecTM GC-IMS-Gerät injiziert. In der Probe enthaltenes infektiöses Material wird durch Erhitzen auf über 60 °C im Rahmen des Analyseprozesses zerstört.

Die eNose verwendet ein kommerzielles Atemerfassungsgerät mit CE-Kennzeichnung, das Markes Bio-VOC. Die Einheit fasst 129 ml Atemluft, wird versiegelt geliefert und erst geöffnet, wenn sie gebrauchsfertig ist. Sie ist für den Einmalgebrauch bestimmt. Der Benutzer befestigt vor der Probenahme ein Mundstück aus Pappe am Gerät. Sobald der Patient in das Gerät eingeatmet hat, wird das Mundstück entfernt und ein Spritzenanschluss angebracht, der mit der eNose verbunden wird. Anschließend wird die Spritze heruntergedrückt und die Probe analysiert. Die Analysezeit beträgt weniger als 5 Minuten. Das eNose-Gerät wird am Ende jedes Nutzungstages gemäß den Richtlinien des Herstellers dekontaminiert.

Für die GC-MS-Analyse wird erneut eine weitere Atemprobe mit dem Markes Bio-VOC-Gerät wie oben entnommen. Sobald die Probe gesammelt ist, wird sie in ein Thermodesorptionsröhrchen (TD) (typischerweise 89 mm x 6,4 mm) überführt. Die Innenwände des Schlauchs sind mit einer absorbierenden Schicht beschichtet, an der Atemchemikalien haften. Das TD-Rohr wird am Ende der Bio-VOC-Einheit platziert und die eingefangene Luft wird durch das Rohr gedrückt. Nach der Fertigstellung werden die Enden der Rohre mit Endkappen verschlossen. Anschließend wird ein validierter Dekontaminationsprozess für den Bio-VOC-Probenehmer und die TD-Röhrchen durch einen langen/hohen Hitzezyklus durchgeführt, um sicherzustellen, dass das Virus abgetötet wird. Die dekontaminierten TD-Röhrchen werden in Lagerboxen im Forschungsbereich des Leicester Royal Infirmary aufbewahrt, um sie gemäß einer vorab festgelegten Materialtransfervereinbarung zur Analyse und endgültigen Entsorgung an die University of Warwick zu transportieren.

Die Ergebnisse der GC-IMS-Analyse werden regelmäßig vom BreathSpecTM auf ein gemeinsam genutztes DataSync-Laufwerk hochgeladen und von Analysten der University of Warwick heruntergeladen. Mit diesen Daten werden keine identifizierbaren Daten verknüpft, sondern lediglich eine Studiennummer.

Bei der Maskenprobenahme tragen die Teilnehmer bis zu 60 Minuten lang eine modifizierte Gesichtsmaske (flache chirurgische Maske, Entenschnabelmaske oder FFP1), die bis zu 5 Streifen 3D-gedruckten Polyvinylalkohols (PVA) enthält, während sie von einem Mitglied des Forschungsteams beobachtet werden. Die Ermittler stellen dem Forschungspersonal, das Proben entnimmt, Schulungen, Unterstützung und persönliche Schutzausrüstung zur Verfügung und vereinbaren Protokolle für die Verarbeitung vor Ort. Vor dem Gebrauch werden die Masken sterilisiert und in versiegelten Probenbeuteln aufbewahrt. Sobald sie getragen werden, werden sie wieder in diese Beutel gelegt und versiegelt. Sie werden im Einklang mit den aktuellen Risikobewertungen und Standardarbeitsanweisungen für den Transport gefährlicher Materialien zum UHL-Virologielabor transportiert. Virale RNA wird mithilfe quantitativer Echtzeit-PCR aus den PVA-Streifen in den Masken extrahiert und quantifiziert. Für die Verarbeitung der PVA-Streifen müssen diese in Wasser gelöst werden, aus dem das RNA-Virus extrahiert und mit molekularen Methoden analysiert wird. Die Masken und Taschen werden vernichtet.

Serumtests und Virussequenzierung An jedem der geplanten Tage, an denen Serumproben benötigt werden, wird das geronnene Blut bei 2 °C bis 8 °C gelagert und innerhalb von 24 Stunden im Research Space, LRI, zentrifugiert. Die Seren werden in Kryoröhrchen gelagert, wobei alle Kryoröhrchen mit der Studiennummer des Teilnehmers, der Besuchsnummer und dem Datum der Entnahme im Research Space, LRI, gekennzeichnet sind. Die Proben werden bis zum Versand gefroren bei -80 °C gelagert. Sobald alle Proben gesammelt wurden, wird ein Satz Kryoröhrchen an das WHO-Referenzlabor in Melbourne geschickt. Der andere Satz Kryoröhrchen wird als Sicherheitsmaßnahme für den Fall von Transportproblemen aufbewahrt. Mit Zustimmung der Teilnehmer werden alle nicht verwendeten Serumproben für zukünftige ethisch anerkannte Forschungen aufbewahrt und für zukünftige Forschungen an andere Forschungsmitarbeiter in anderen akademischen Einrichtungen und Industriepartnern innerhalb und außerhalb des Vereinigten Königreichs weitergegeben. Das Serum wird für Hämagglutinationshemmungs- und Mikroneutralisationstests verwendet. Sobald alle Proben verarbeitet wurden, werden die Ergebnisse an das Forschungsteam in Leicester zurückgesendet.

Tests zur Hämagglutinationshemmung (HAI) und Mikroneutralisation (MN) sowie die Sequenzierung von Influenzaviren werden im WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza (VIDRL), Peter Doherty Institute for Infection and Immunity, 792 Elizabeth Street, Melbourne, VIC, durchgeführt 3000, Australien.